WST 349-2011 α-淀粉酶催化活性浓度测定参考方法.pdf

ICs 11,020C50中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准Ws/T349 2011OI-淀粉酶催化活性浓度测定参考方法Re f e r e n c e p r o c e d u r e f o r t h e m e a s u r e m e n t o fc a t a Iy t i c a c t i v i t y c o n c e n t r a t i o n o f -a m y l a s e2011-09-30 发布中华人民共和国卫生部 发 布2012-04-01 买 施Ws/T349-20113 术语和缩略语3.1 术语和定义 3.2 缩略语 4 参考方法描述 4.1 测定原理和方法 4.2 检查列表 4.3 试剂 4.4 仪器 4.5 采样和样本 4.6 测定系统和分析部分的准备 4.7 酶催化活性浓度测定4.8 测定结果处理4.9 分析可靠性4.10 通过实验室间 比对进行确认 4.11 参考区间 4.12 报告 4.13 质量保证 附录A(规范性附录)不同温度下溶液的p H值 附录B(规范性附录)测定葡萄糖苷酶催化活性浓度 附录C(规范性附录)EPS中G7-NP质量 比的控制 附录D(资料性附录)试剂原料详细信息 附录E(资料性附录)淀粉酶IFCC37参考方法与30参考方法的比较 参考文献 次目前言 1 范围 12 规范性引用文件 11 1 2 3 3 3 4 77811131415151515172024252831Ws/T34g 2o 11前 言本标准按照GB/T1.1z O09给出的规则起草。本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的IFCC37酶催化活性浓度测定原级参考方法 第8部分:淀粉酶催化浓度测定参考方法,将原参考方法试剂中磷酸吡哆醛去掉,重新建立依据本标准的参考区间,并参考IS015193:2009 体外诊断器具 生物源样品中量的测定参考测定程序的表述 适当增加内容。本标准的附录A、附录B、附录C为规范性附录,附录D、附录E为资料性附录。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位:上海市临床检验中心。本标准主要起草人:居漪、胡晓波、张锦锋。Ws/T349-2011卜淀粉酶催化活性浓度测定参考方法1 范 围本标 准规定 了在临床 医学应用 中,测定贮淀粉酶(AMY)催化活性浓 度 的参考方法。本标 准 主要适 用 于参考实验室,作为旷淀粉 酶催 化 活性 浓 度测 定 的溯 源,也可作 为 与酶催 化 活性浓度检验有关 的仪 器和试 剂生 产企业 的溯源,可供有关认 可单位及质量管理部 门应用。2 规范性 引用文件下列文件对于本 文件 的应用是必 不可少 的。凡是注 日期 的引用 文件,仅所注 日期 的版本适 用 于本文件。凡是不注 日期 的引用文件,其最新 版本(包括所有 的修 改单)适 用 于本文件。IS015193:2009 体外诊 断器 具 生物源样 本 中量 的测定 参考测定程序 的表述3 术语和缩略语3.1 术语和定义下列术语 和定义适 用 于本 文件。3.1.1原始样本 p r i m a 叩s a m p l e最初从一个 系统 中取 出的一个 或几个部分 的集合 物,旨在提供该 系统 的信 息或作 为对该 系 统做 出决定 的基 础。注:在某些情况下,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此时取样系统是这些系统的组成部分。3.1.2实验 室样本 1a b o r a t o r y s a m p l e准备送到实验室或 实验室接 收 的用于测定 的原始样本或原始样本 的分样本。3.1,3分析样本 a n a y t i c a l s a m p Ie自实 验室样 本 制备 的、可从 中取 出分析部分 的样本。注:在 取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理。3.1.4多 卜 和 亍 音 阝 卜 a n a Iy t i c a I p o r t i o n从分析样本 中取 出的用于实际测定 和观察 的物质部分。注:如 果不需预处理,分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出。某些情况下,需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。3.1.5 卜 祠 亍 漯 辜攴 a n a Iy t i c a l s o Iu t i o n将分 析部 分溶解 在气体、液体或 固体 中而制备 的溶 液,溶解 过程 中可 以有反应发生或无 反应发生。3.1.6(某一物质 系统 的)基质 m a t r i x(o f a m a t e r i a l s y s t e m)一个 物质 系统 中除被分 析物之外 的所有成分。1Ws/T349-20113,1.7磁奏爿皆 丿 宁 法 r e f e r e n c e p r o c e d u r e在校准或表征标准物质时为提供测定结果所采用的测定方法,适用于评定 由同类量 的其他测定方法获得的被测定量值的测定正确度。3.1.8测定系统的灵敏度 s e n s i t i Vi t y o f a m e a s u r i n g w s t e m简称灵敏度(s e n s i t i v k y)测定系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。注1:测定 系统的灵敏度可能与被测定的量值有关。注2:所考虑 的被测定值 的变化必须大于测定系统 的分辨力。3.1.9彐 卜 祠 干 牛 宁 乒 帚 屮 圭 a n a Iy t i c a l s p e Ci f i c i t y测定方法只测定可测定的量的能力。3.1,10分柝干扰 a 1Ra Iy t i c a I i n t e r f e r e n c e由一个影响量引起的系统测定误差,该影响量 自身在测定系统中不产生信号,但它会引起示值的增高或降低。3.1.11影向I i n f u e n c e q u a n t i t y被测定 以外 的可影 响测 定结果 的量。3.1.12被测工 m e a s u r a n d拟测定 的量。注1:对被测定的说明要求了解量的种类,以及含有该量的现象、物体或物质状态的描述,包括有关成分及所涉及的化学实体。注2:在VIM第二版和IEC6005 300:z O01中,被测定定义为受到测定的量。注3:测定包括测定系统和实施测定的条件,它可能会改变研究中的现象、物体或物质,使被测定的量可能不同于定义的被测定。在这种情况下,适当的修正是必要的。3.1.13检 出限 d e t e c t i o n m i t,m i t o F d e t e c t i o n由给定测定 方法获得 的测 得值,其声称 的物质成分 不存 在 的误 判概率 为,声称物质成分存 在 的误判概率 为。注 1:国 际理论和应用化学联合会(IUPAC推荐和 的默认值为0.05。注2:有时使用缩写词LOD。注3:不要用术语“灵敏度”表示“检 出限”。3,1.14校 准 品 c a Ii b r a t o r用于校准的测定标准。3.2 缩略语下列缩略语适用于本文件。AMY:淀粉酶(-a m y l a s e)EPS:4,6-亚乙基(GD-4-硝基苯(G7)-(1-)4)-冫麦芽七 糖(4,6-e t h y l i d e n e(G1)-n i t r o p h e n y l(G7)-(1-)4)D m a l t o h e p t a o s i d e)2Ws/T349-2011G:()4)-冫吡喃葡萄糖苷(-()4)-冫g l u c o p y r a n o s y D4-NP:41诮壅 彡 笨酚(4-n i t r o p h e n o x i d e)GNP:硝基苯-()4)-冫麦芽七糖(4-n i t r o p h e n y L叶(1-4)-冫m a l t o h e p t a o s i d e)IRMM:参考物质与参考测定研究院(h s u t u t e f。r r e f e r e n c e m a t e r i a l s a n d m e a s u r e m e n t)IFCC:国际 临 床 化 学 与 检 验 医 学 联 合 会(i n t e r n a t i o n a l f e d e r a t i o n o f d i n i c a l c h e m i s t r y a n dl a b o r a t o r y m e d i c i n e)SOP:标准操作方法(s t a n d a r d o p e r a t i o n p r o c e d u r e)4 参考方法描述4.1 测定原理和方法EPS+H2O淀粉酶 4,6 亚乙基GX+硝基苯-G(7-X)仁硝基苯-G(7-X)+(7-X)H2OA葡萄糖苷酶(7 x)葡萄糖+硝基苯酚本标准采用4,6-亚 乙基(G1)-4-硝基苯(G7)-(4)-冫麦芽七糖(EPS)作为淀粉酶测定底物,在淀粉酶催化下,水解为仁硝基苯糖苷,再经【x 葡萄糖苷酶催化,水解为硝基苯酚(4-NP)和葡萄糖。硝基苯酚的生成量与【x 淀粉酶催化活性浓度成正 比,在37,405n m 波长下测定硝基苯酚摩尔消光系数,计算淀粉酶催化活性浓度。4.2 检查列表4.2.1 试剂列表将所用试剂按表1列出。表1 试剂列表分 类系统名称通用名称,缩咯语试 剂 羟 乙基 哌嗪-N-乙基磺酸HEPEs4,亚乙基(GD叫-硝基苯(G7)-【x(1-4)-麦芽七糖EPs葡萄糖苷酶(EC3.2.1.)无氖化钠无氯化钙,二水合物无氢氧化钠无牛血清 白蛋 白,Fr a c u o n V牛 白蛋 白氯化钠溶液(0.154m o l Ll)无溶 剂质量与双蒸水类似的高纯度水(电导率(2u s c m-l,p H6 7,硅酸盐(0.1m g L1)无参考物质JCTLM(或)国家批准的参考物质无质控物质常规系统校准品无指示剂无无Ws/T349-20114.2.2 分光光度计和辅助仪器列表参考实验室应在表2登记主要测定仪器(分光光度计)和主要辅助仪器(点式温度计、天平、p H计、恒温水浴箱、稀释配液仪、移液器等)。表2 分光光度计和辅助仪器4.3 试剂4.3.1 试剂原料信息按表3填写试剂原料详细信息。表3 试剂原料详细信息试剂系统名 通用名淀粉酶测定所用每个试剂原料详细信息见附录D。如怀疑一种化学药品含有不纯的物质影响了分析物的催化活性浓庋,应进行进一步的研究,例如,比较不同厂家和不同批号的产品。宜使用在对比试验中已经鉴定或认可的试剂。以下两种试剂需要注意安全:a)氢氧化钠:有强烈刺激和腐蚀性。粉尘或烟雾会刺激眼和呼吸道,腐蚀鼻中隔;皮肤和眼与Na OH直接接触会引起灼伤;误服可造成消化道灼伤,黏膜糜烂、出血和休克。本品不会燃烧,遇水和水蒸气大量放热,形成腐蚀性溶液。与酸发生中和反应并放热。具有强腐蚀性。燃烧(分解)产物:可能产生有害的毒性烟雾。呼吸系统防护:必要时佩带防毒口罩。眼睛防护:4仪 器 名 称生 产 厂 家型 号分光光度计点式温度计天 平p H计恒温水浴箱稀释配液仪移液器信息指标内 容CAs,CARN注册 号生产厂家货号/批号分子式相对分子质量纯 度特定合格要求(如有)危险度贮存要求失效期Ws/T3492011戴化学安全防护眼镜。防护服:穿工作服(防腐材料制作)。手防护:戴橡皮手套。b)氯化钙,二水合物:属中等毒性类。对鼻、口、喉和皮肤有刺激作用。侵人途径:粉尘吸人,食人。健康危害:粉尘会灼烧、刺激鼻腔、口、喉,还可引起鼻 出血和破坏鼻组织;干粉会刺激皮肤,溶液会严重刺激甚至灼伤皮肤。禁忌物:三氟化溴、碳酸与石灰 的混合物。防护措施:戴防护镜或面具;穿戴 全 身工作 服 及橡 胶手 套。急救措施:眼睛接 触:用大 量清 水 冲洗 至少15m i n,就医;皮肤接触:用清水冲洗5m 1n,必要时就医;吸人:将患者移至新鲜空气处,若感不适,就医;食人:若患者清醒,可给饮水或牛奶,立即就