SNT 2617-2010 冬生疫霉病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2617-2010冬生疫霉病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Phytophthora.hibernalis Carne2010-05-27发布2010-12-01实施微中华人总共利和国发布移安器n国家质量监督检除检变总局数码防伪SN/T2617-20106鉴定标准6.1菌落特征在V8培养基上生长速度较慢(4mm/d8mm/d),菌落平贴至中度的蓬松，呈玫瑰花瓣状，花瓣状区域较宽且圆。6.2病原形态P.hibernalis的孢子囊长卵圆形或椭圆形，易脱落，带有较长的孢囊柄，顶部具有不完全的乳头状突起，通常基部锥形、顶部近半乳突处最宽。孢子囊大小(29um53um)(14um224m)(平均40um19um),长宽比较大为1.82.4（平均2.1)，孢囊柄长234m73um。孢囊梗不分枝或窄的长分枝，或形成不规则合轴式长侧枝。孢子囊低温萌发释放游动孢子。病菌不产生厚垣孢子，一般无菌丝膨大体。:P.hibernalis为同宗配合，雄器多围生，偶侧生，平均10um15um;卵孢子黄橙色，满器，大小为22m45.6um(平均30um),壁厚1m3牡m;藏卵器大小为22um56um(平均35m)。形态图参见附录D。6.3与近似种的形态区别冬生疫霉与丁香疫霉(Phytophthora syringae)在形态上很相似，主要区别为冬生疫霉菌落的花瓣区域较宽，孢子囊易脱落、孢子囊柄较长、雄器多围生；丁香疫霉菌落的花瓣区域较尖、窄，孢子囊不脱落、雄器多侧生。参见附录E。6。APCR特异性产物引物PHIB1和PHIB2的特异性PCR扩增片段为4O7bp。7结果判定根据冬生疫霉病菌的鉴定标准（见第6章），对分离菌进行综合判定。如分离菌的所有特性均与各鉴定指标吻合，可鉴定为冬生疫得病菌(Phytophthora hibernalis Carne)。8菌种保藏将分离菌接在V8培养基上，待菌落长满后，切成边长1cm小块，放在有无菌水的试管中，封好，室温保存。或将分离菌接在V8培养基的斜面上，斜而表面布满菌丝后，封好斜面的盖子，置于10保存。9复核必要时由专家对检测结果进行复核。3