SNT 2154-2008 进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法 兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 狅 犪 犵 狌 犾 犪 狊 犲 狆 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲狊 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 犻犻 狀犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犳 狅 狅 犱犜 犲 犮 犺 狀 犻 狇 狌 犲狌 狊 犻 狀 犵狉 犪 犫 犫 犻 狋狆 犾 犪 狊 犿 犪犳 犻 犫 狉 犻 狀 狅 犵 犲 狀犪 犵 犪 狉犿 犲 犱 犻 狌 犿 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前言本标准中直接平板计数法参照了 食品和动物饲料中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法第部分：兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术 狊 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 犻（狊 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 狌 狊犪 狌 狉 犲 狌 狊 ）：，法参照了 食品和动物饲料中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法第部分：检测技术 （）：。本标准的附录和附录均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：赵贵明、刘沛、李卫华。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术范围本标准规定了进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法。本标准中直接平板计数法适用于食品中凝固酶阳性葡萄球菌的计数，法适用于凝固酶阳性葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品。动物饲料等其他食品可参照执行。设备和材料 灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅和干热灭菌箱。水浴箱：。培养箱：。吸管：和 ，分刻度分别为 和 。接种环：直径。天平：量程，灵敏度。灭菌样品处理器具：取样勺，剪刀，开罐器等。样品稀释瓶：、。无菌培养皿：直径。均质器。无菌试管。酒精灯或煤气灯。计。金黄色葡萄球菌（凝固酶阳性）标准质控菌株：或其他来源的经验证合格的菌株。培养基和试剂 兔血浆纤维蛋白原（）琼脂培养基（见附录第 章）。改良 肉汤（，见附录 第 章）。水琼脂（见附录 第 章）。蛋白胨氯化钠溶液（见附录 第 章）。第一法直接平板计数法检验程序检验程序见图。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售图凝固酶阳性葡萄球菌直接平板计数法检验程序操作步骤 样品的制备 样品的整个制备过程均应遵循无菌操作程序。冷冻样品检验前可在条件下解冻，时间不超过，也可在温度不超过 的条件解冻，时间不超过 。液体样品应先将其充分摇匀。样品匀液的制备 固体和半固体食品：以无菌操作称取 样品，于盛有 蛋白胨氯化钠溶液的无菌均质杯内，于 均质 ，制成 样品匀液；或于装有 蛋白胨氯化钠溶液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 制成 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取样品 放入装有 蛋白胨氯化钠溶液的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成 的样品匀液。用 无菌吸管或微量移液器吸取 样品匀液 ，沿管壁缓慢注于装有 稀释液的无菌三角瓶中，振摇均匀或换用支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 的样品匀液。如需进一步稀释，按上述顺序操作。接种及培养 根据对样品污染情况的估计，选择个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），分别在做 倍递增稀释的同时，吸取 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。样品匀液移入平皿后，应及时将凉至 左右的 琼脂培养基（可放置于 恒温水浴箱中保温）注入平皿约 ，并转动平皿使混合均匀。同时将 琼脂培养基倾入加犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售有 空白稀释液的无菌平皿内作对照。待琼脂凝固后，翻转平板，置 培养箱，培养 。典型菌落计数 凝固酶阳性葡萄球菌在 琼脂培养基平板上形成黑色、灰色或白色的小菌落，外围有沉淀晕环。注：菌落色泽与葡萄球菌还原亚碲酸钾的能力相关，大部分金黄色葡萄球菌形成黑色或灰色菌落，其他不还原亚碲酸钾的葡萄球菌则为白色菌落。凝固酶阳性的葡萄球菌产生的凝固酶将纤维蛋白原分解为不溶性纤维蛋白，使菌落外围出现沉淀晕环。选择菌落数在 之间的平板，挑典型菌落计数（见 描述），按平均典型菌落数乘以稀释倍数计算。若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式（）计算：犖犆（狀 狀）犱（）式中：犖 样品中菌落数；犆 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；狀 适宜范围菌落数的第一稀释度（低）平板个数；狀 适宜范围菌落数的第二稀释度（高）平板个数；犱 稀释因子（适宜范围菌落数的第一稀释度）。示例：稀释度 （第一稀释度）（第二稀释度）菌落数，犖犆（狀 狀）犱（）（）上述数据经“四舍五入”后，表示为 或 。若所有稀释度的平板菌落数均小于，则应按最低稀释度的平均典型菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）的平板均无典型菌落生长，则以小于乘以最低稀释倍数计算。凝固酶阳性葡萄球菌菌落总数的报告 菌落数在 以内时，按“四舍五入”方式修约，采用两位有效数字报告。大于或等于 时，前第位数字采用“四舍五入”方式修约后，取前位数字，后面用代替位数来表示结果；也可用 的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”方式修约，采用两位有效数字。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。固体或半固体样品以 为单位报告结果，液体样品以 为单位报告结果。第二法犕犘 犖法检验程序检验程序见图。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售图凝固酶阳性葡萄球菌 犕犘 犖法检验程序操作步骤 接种及培养 分别在做 倍递增稀释的同时，选择适宜的个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），以吸取该稀释度的吸管或微量移液器吸取 样品匀液，接种到 改良 肉汤管，每个稀释度接种管，如需做双料，则应吸取 样品匀液，接种到 改良 肉汤管。每个试管中均加入适量冷却至 左右的无菌水琼脂或石蜡，凝固后使形成密封状态。要求样品的最高稀释度，能达到获得阴性终点。将上述接种物 培养。如试管中的液体变色或出现黑色沉淀，用接种环移取环，分别划线接种 琼脂培养基平板，培养，；如试管中的液体没有产生黑色沉淀或变色，则继续培养，培养至 后，无论试管有无变黑，均需用接种环分别划线接种 琼脂培养基平板，培养，后观察结果。注：接种环移取肉汤培养物前，先无菌去除水琼脂或石蜡层。典型菌落确认凝固酶阳性葡萄球菌在 平板上呈黑色或灰色，甚至白色的小菌，外围有沉淀晕环。结果计算计算有典型菌落的 琼脂培养基平板所对应的管数，查 检索表（见附录）。报告根据检索表的数值，报告样品中凝固酶阳性葡萄球菌的含量，单位：或 。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（规范性附录）培养基和试剂犃 兔血浆纤维蛋白原（犚 犘 犉）琼脂培养基犃 成分犃 基础成分胰酪胨 酵母粉 牛肉粉 丙酮酸钠 甘氨酸 氯化锂 琼脂 蒸馏水 犃 亚碲酸钾溶液称取亚碲酸钾，加入 蒸馏水或去离子水中，通过 孔径的滤膜进行过滤除菌，并于保存不超过个月，若溶液中出现白色沉淀应弃去。犃 牛纤维蛋白原溶液称取牛纤维蛋白原，加入 蒸馏水或去离子水中，临用时配制。犃 兔血浆和胰酶抑制剂溶液称取 胰酶抑制剂，加入 含 的兔血浆，临用时配制。犃 制法将培养基的各个基础成分加入蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节 ，高压灭菌 ，冷却至 左右备用（水浴）。无菌加入预热至 左右的亚碲酸钾溶液 、牛纤维蛋白原溶液 及兔血浆和酶抑制剂溶液 ，混匀后铺平板备用。该平板应立即使用，避免血浆沉淀的出现。犃 改良 犌 犆肉汤（犿 狅 犱 犻 犳 犻 犲 犱犌 犻 狅 犾 犻 狋 狋 犻 犪 狀 犱犆 犪 狀 狋 狅 狀 犻 犫 狉 狅 狋 犺）犃 成分犃 基础成分胰酪胨 牛肉粉 酵母粉 氯化锂 甘露醇 氯化钠 甘氨酸 丙酮酸钠 蒸馏水 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犃 亚碲酸钾溶液称取亚碲酸钾溶于 蒸馏水或去离子水中，通过 孔径的滤膜进行过滤除菌，并于保存不超过个月，若溶液中出现白色沉淀应弃去。犃 制法将培养基的各个基础成分加入蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节 ，适量分装，高压灭菌 ，冷却至 左右备用。无菌加入 亚碲酸钾溶液于每 单料管，于每 双料管，混匀后使用。犃 水琼脂称取 细菌学琼脂粉于 蒸馏水或去离子中，加热煮沸至完全溶解，高压灭菌 ，冷却至 左右备用。犃 蛋白胨氯化钠溶液犃 成分蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 犃 制法将各成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节，高压灭菌 ，灭菌后 （）。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犅（规范性附录）犵（犿 犔）检样中最近似值（犕犘 犖）表表犅 阳性管数 阳性管数 注：本表采用个稀释度（）、（）和 （），每个稀释度接种管。注：表内所列检样量如改用（）、（）和 （）时，表内数字应相应降低 倍；如改用 （）、（）、（）时，则表内数字应相应增加 倍，其余类推。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年 月第一版 年 月第一次印刷印数 书号：定价 元版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售