SNT 2206.11-2014 化妆品微生物检验方法 第11部分：金黄色葡萄球菌 多重实时荧光PCR法.pdf

SN/T2206.11-2014以间接地体现样品模板DNA的目的基因的扩增量。样品的模板DNA进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，从而对化妆品中金黄色葡萄球菌进行实时荧光PCR检测。4.2设备和材料4.2.1实时荧光PCR仪。4.2.2冰箱：-204。4.2.3高速台式离心机（最高转速12000r/min以上）。4.2.4微量移液器和灭菌吸头：10uL、100uL、200uL、1000uL4.2.5离心管：1.5mL。4.2.6恒温水浴锅。4.2.7天平：感量0.01g。4.2.8均质器。4.2.9灭菌锥形瓶：500mL、250mL。4.2.10生化培养箱：温度361。4.2.11高压灭菌器。4.3培养基和试剂除另有规定外，试剂均为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。4.3.1水：应符合GB/T66822008中一级水的规格4.3.2 SCDLP液体培养基。4.3.37.5%氯化钠肉汤。4.3.4 Tag DNA聚合酶。4.3.5dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP4.3.610PCR缓冲液：200mmol/L Tris-HCI(pH值为8,4)，200mmol/L氯化钾(KCl),15mmol/L氯化镁(MgCl2)。4.3.7DNA提取液：称取0.1 g chelex100粉末，加人100nL灭菌蒸馏水中，摇匀。4.3.8三氯甲烷。4.3.9酚-三氯甲烷（体积比14.3.10异丙醇。4.3.1175%乙醇。4.3.12阴阳性菌株或DNA。4.3.13引物和探针：引物和探针序列见附录A。4.4检测步骤4.4.1样品制备不同类型化妆品样品的制备参照GB7918.1进行。4.4.2增菌培养参照GB7918.5进行样品的增菌培养。4.4.3增菌液模板DNA的制备取4.4.2中培养的样品增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中，8000r/min离心5min,轻轻倒去2