SNT 2131.2-2010 进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法 第2部分：小鼠生物法.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 代替 进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第部分：小鼠生物法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犱 犻 犪 狉 狉 犺 犲 狋 犻 犮 狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺狆 狅 犻 狊 狅 狀 狊 犻 狀狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犘 犪 狉 狋：犕 狅 狌 狊 犲犫 犻 狅 犾 狅 犵 狔犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口贝类食品中腹泻性贝类毒素检验方法 共分为两部分：第部分：荧光磷酸酶抑制法；第部分：小鼠生物法。本部分为 的第部分。本部分代替 出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法。本部分与 相比，主要变化如下：将原标准名称修订为 贝类中腹泻性贝类毒素检验方法第部分：小鼠生物法；将范围进行了简化和修改；增加了术语和定义；试剂和材料中增加了吐温 生理盐水的具体配制方法；在结果计算和表述中，增加了报告表述方式；增加了健康和安全的提示条款。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：曹际娟、王秋艳、郑秋月、徐杨、王刚、于兵、郑惠芳、赵昕、吴振兴。本部分所代替标准历次版本发布情况为：。犛 犖犜 进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第部分：小鼠生物法范围 的本部分规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的小鼠生物测定方法。本部分适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的检验。规范性引用文件下列文件中的条款通过 本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。分析实验室用水规格和试验方法 实验动物环境及设施术语和定义下列术语和定义适用于 的本部分。腹泻性贝类毒素犱 犻 犪 狉 狉 犺 犲 狋 犻 犮 狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺狆 狅 犻 狊 狅 狀 狊，犇 犛 犘化学结构以大田软海绵酸（，简称）及其衍生物为代表的，摄食后可产生以腹泻为主要特征的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称。鼠单位犿 狅 狌 狊 犲狌 狀 犻 狋，犕犝对体重为 的只 雄性小白鼠腹腔各注射 贝类提取液后，使只或只小鼠在 死亡的毒力为个鼠单位。试样保存和制备 试样保存 样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异。同时，还要有充分的个数。去壳贝肉、带壳的或罐装的等，均应采取足够的个数并使贝肉达 以上。远离实验室不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳样品，应按 的方法开壳，去除水分后冷冻送检。样品的制备 生鲜带壳样品的前处理用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来物，取出贝肉。不应以加热或加药物的方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。将去壳贝肉放在孔径约 的金属筛网上，沥水 ，按 制备检样。冷冻样品的前处理在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按 方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的犛 犖犜 贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后，按 制备检样；事先已去除水分的冷冻去壳样品，室温缓化后，按 制备检样。制备检样对于可以切取中肠腺的贝类（如：扇贝、贻贝及牡蛎等），称量 贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称量后作为检样备用，注意不要使中肠腺内容物污染制样工具；不便切取中肠腺的贝类样品，称量 贝肉后，可将全部贝肉细切、混合，作为检样。测定方法 方法提要用丙酮提取贝类中 毒素，再转移至乙醚中，经减压蒸干后，再以吐温 生理盐水为分散介质，制备 吐温 生理盐水混悬液，将该混悬液注射入小鼠腹腔，观察小鼠存活情况，计算其毒力。仪器和设备 旋转蒸发器。圆底烧瓶：、。均质器：转速 以上。布氏漏斗。天平：感量。带塞刻度试管：，具 刻度。分液漏斗。冰箱：和 。一次性注射器（）及注射器针头（）。试剂和材料除另有规定外，所有化学试剂均为分析纯或生化试剂，水为符合 规定的一级水。丙酮，（）。无水乙醚，（）。吐温 生理盐水：称取 吐温 （），溶于生理盐水（氯化钠）中，并定容至 。小白鼠：体重为 的健康 品系雄性小鼠。测定步骤 试样提取 将检样置于均质杯内，加倍量丙酮均质至少 。如为小均质杯，可分两次操作。将均质好的物质倒入布氏漏斗中抽滤，收集抽提液。对残渣分别用残渣倍量的丙酮再抽滤两次，其抽提液与 所得抽提液合并。将抽提液移入 的圆底烧瓶中，调整旋转蒸发器水浴温度为，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。将浓缩液移入分液漏斗内，以 乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）。用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移入 或 的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，）去除乙醚。用少量乙醚将浓缩物移入 或 圆底烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。以吐温 生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到 ，充分振摇，制成均匀 吐温 生理盐水混悬液。此时 液量相当于预先测定的 去壳贝肉的质量，以此悬浮犛 犖犜 液作为试验原液进行动物实验。以试验原液注射小鼠，内只或只小鼠死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前，应先振荡使试液成均匀悬浮液，再取其部分以吐温 生理盐水稀释。小白鼠试验 选择体重为 的健康 品系雄性小鼠只，随机分组：检测样品组和空白对照组（吐温 生理盐水），只组。以振荡器使待测液（试验原液或其稀释液）成为均匀悬浮液。分别取 待测液或吐温 生理盐水腹腔注射。注射时若有一滴以上提取液溢出，应将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，未死亡的应连续观察。观察时限 内，在空白对照组小鼠正常的情况下，检测样品组若出现只或只小鼠死亡，则应按表进行最小染毒量动物实验或最大稀释度实验。表注射量与毒力的关系试验液注射量 检样量毒力（）原液 原液 倍稀释液 倍稀释液 倍稀释液 倍稀释液 以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳肉量。结果计算和表述 观察时限 内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组无小鼠死亡或仅有只小鼠死亡，则报告该检测样品中 毒力为：。观察时限 内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组有只或只小鼠死亡，则按 进行动物实验，并根据表，计算检测样品中 毒力并报告结果，或报告该样品的毒力为大于 。健康和安全任何 含量大于 的样品即被认为是有害的，人类食用不安全。腹泻性贝类毒素是一种有毒的混合物，为避免腹泻性贝类毒素的危害，应戴手套进行检验操作。橡胶手套、玻璃制品等用过的器材应在的次氯酸钠溶液中浸泡以上，以使毒素分解。同样，废弃的提取液等也应以上述溶液处理。所有对含有丙酮及乙醚溶液的操作应在通风橱中进行。小鼠尸体应按 要求焚烧处理，其排放物应达到污物焚烧排放规定要求。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第部分：小鼠生物法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元