SN 0666-1997 出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量检验方法杯碟法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 6 6 一 1 9 9 7出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量 检验方法杯碟法Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f o l e a n d o m y c i nr e s i d u e s i n m e a t s a n d m e a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -C y l i n d e r p l a t e m e t h o d1 9 9 7 一 0 8 一 1 5 发布1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 6 6 6 一 1 9 9 7前台 本标准是根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标准的 起草与表述规则第1 部分:标准编写的 基本规定 和S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中 农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定 的要求而编写的。其中测定方法采用了日本厚生省 1 9 9。年编著的 畜、水产食品中的残留 物质检查法 中 竹桃霉素残留量检验方法，但在技术内 容上稍作改变，经验证后.按规定格式的 要求作了编辑性修改.标准中同时制定了抽样和制样方法。本标准的测定低限是根据国际上对肉品中竹桃霉素的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的。本标准中的附录A是标准的附录。本标准中的附录B是提示的附录。本标准由 中华人民共和国国家进出口 商品检验局提出并归口。本标准由 中华人民 共和国内 蒙古进出口 商品检验局负责起草。本标准主要起草人:刘中学、甄宏太。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量检验方法杯碟法s N 0 666 一 1 997Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f o l e a n d o my c i nr e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -C y l i n d e r p l a t e me t h o d范围本标准规定了出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量检验的抽样、制样和杯碟测定方法。本标准适用于出口猪肉中竹桃霉素残留量的检验。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。S N 0 1 7 9-9 2 出口 食品中四环素族抗生素残留 量检验方法抽样和制样3.1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件商品为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。3.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1-2 5 1 2 6 1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 11 0 0 0 1 7 1 0 0 12 5 0 0 2 03-3 抽样方法 按 3.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品.如果每件内无小包装或有小 包装但其重量超过2 k g，则可用无菌刀具从每件内 割取不少于1 0 0 g,混合后置于清洁容器中，作为 混合原始样品。原始样品总量不得少于2 k g，加封后，标明标 记，及时送交实 验室。3.4 试样制备 从原始样品中 取出 部分有代表性样品，将可食部分用纹碎机纹碎，充分混匀，用四分法 缩分出 不少于5 0 0 g 作为试样。装入清洁容器中，加封后，标明 标记。3.5 试样保存中 华人 民共和国国家进出口 商品检验局1 9 9 7-0 8-1 5 批准1 9 9 8-0，一 0 1 实施 ts x 0 6 6 6 一1 9 9 7将试样于一1 8 以下冷冻保存。注:在抽祥及制样的操作过程中.必须防止样品受到污染或发生残留物含盆的变化.测定方法4 ，方法提要 用磷酸盐缓冲液(p H 7.9 土。.1)提取试样中的竹桃霉素残留物，离心后取上清液作为样液，以藤黄微球菌作为 指示菌，用杯碟法 进行测定，根据所产生 抑菌圈的 大小 用标准曲线法定 量。4.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。4.2-1 磷酸盐 缓冲液(p H 7.9 士0.1)0 精确称取无 水磷酸二氢钾0.5 2 3 g 和无水磷酸氢二钾1 6.7 3 g,溶解于 1 0 0 0 mL水中，于 1 2 1 高压灭菌 1 5 m i n.4.2.2 试验菌种:藤黄微球菌(Mi c r o c o c c u s l u t e u s)，菌号C MC C 2 8 0 0 1，中国药品生物制品检定所提供。4.2.3 竹桃霉素标准品:纯度)9 5 0 0。美国S I G MA化学制品公司提供，或等效品。密封、防潮、避光保存于 4 冰箱。4.2.4 竹桃霉素标准储备液:准确称取适量的竹桃霉素标准品，溶于约 2 ml,甲醇中，再用磷酸盐缓冲液(4.2.1)稀释，配制成浓度为2 5 0 p g/m L的 标准储备 液。4 C 冰箱中 保存，可使用5 天。4.2.5 竹桃霉素标准中间液:取竹桃霉素标准储备液 1 0.0 mL于 5 0 0 m L容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(4.2.1)稀释至刻度，配制成浓度为5.0 p g/mL的标准中间液。使用当天配制。4.2.6 竹桃霉素标准 工作液:取一定量竹桃霉素标准中间液，用磷酸盐缓冲 液(4.2.1)分别稀释成浓 度为。.0 1,0.0 2 5,0.0 5,0.1 0,0.2 0 和。4 0 p g/m L的 一组标准工作液。使用当天配制。以0.1 0 j a g/m L 浓度为 参考浓度;以。0 1 p g/m L 浓度为判 断阴 性对照浓度。4.2.7 培养基 I(见附录 A中Al),4.2.8 培养基I(见附录A中 A 2),4.3 仪器和设备4.3.1 恒温培养箱:(2 6 士1)C，搁板必须水平。4.3-2 震荡培养箱:(3。士1)C。4.3.3 培养皿:内径 9 0 mm,底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，配陶瓦盖，或玻璃盖内嵌入干燥的滤纸.4.3.4 牛津 杯:不锈钢圆筒，外径(8-0 士0.1)m m，内 径(6-0 士 0.1)m m，高(1 0.0 士。，1)m m,4.3.5 游标卡尺:测量范围。2 0 0 mm,精度 0.0 2 mm.或抑菌圈测量仪。4.3.6 均质器:不低于8 0 0 0 r/m i n,4.3.7 离心机:不低于 4 0 0 0 r/m i n,4.3，8 半对数坐标纸。4,4 测定步骤4.4.1 样液制备 称取试样约1 0 g(精确至。.1 g)，置于均质杯中，加入1 0.0 m L磷酸盐缓冲 液(4.2.1)，小心搅匀。放置6 0 m i n 后，于8 0 0 0 -1 0 0 0 0 r/m i n 均质2 m i n，移 入离心管中，于4 0 0 0 r/m i n 离心2 0 m i n，取上清液作为样液。4.4.2 菌悬液制备 将试验菌种(4-2.2)接种于装有培养基I 的试管中，于(3 0 士1)培养2 4 h.吸取约1 m L 该培养物接种于装有5 0 m L培养基I 的锥形瓶中，于(3。士1)0C 震荡培养1 8 -2 0 h。此培养物即为菌悬液.贮于4 冰箱中可 使用1 周。4.4.3 检定平板的制备S N 06 66一 19 91 制备前，先预测一下藤黄微球菌悬液的最佳用量。方法是先用不同量的菌悬液加到培养基 t 中，经培养获得适当 大小(用。.1 0 t a g/m L竹桃霉素标准工作液时 直径在1 6 m m以上)且清晰的 抑菌圈，菌悬液的该加入量即为最佳用量。平板制备时，先向培养皿中加入2 0 m L 融化的 培养基H，保持水平，待其凝固。将最佳用 量的菌悬液加入到事先融化并冷却至4 5-5 0 的培养基，中，充分混匀后，向每个培养皿中基层琼脂上加4 mL,使其均匀分布，并保持水平，凝固后即为检定用平板。所用平板需当天制备。4.4.4 标准曲线的绘制 按照 S N 0 1 7 9-9 2中 6.1 进行，但标准工作液用 4.2.6中所制备的一组标准工作液。4.4.5 样液的测定 每 份样液用3 个检定平板。在每个平板上置6 只牛津 杯，使其在半径约2 8 m m的圆周上呈6 0 0 角均匀分布，间隔注 满样液和0.1 0 K g/m L的竹桃霉素标准工作液。于(2 6 士 1)培养(1 7 士1)h。翻转平板，除去牛津杯.如有抑菌圈产生，精确测量其直径。4.5 结果计算和表述 在3 个检定平板上，各浓度竹桃霉素标准工作液均出现适当大小的清晰抑菌圈时，如样液抑菌圈直径的平均值-9 5 a a.A v a il a b l e f r o m S I G M A C h e m i c a l C o m p a n y,U S A,o r e q u i v a l e n t.S t o r e h e r me t ic a l l y a t 4 0C,k e e p a w a y f r o m l i g h t a n d a v o i d w e t t i n g.4.2.4 O l e a n d o m y c i n s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n:A c c u r a t e ly w e ig h a p r o p e r q u a n t i t y o f o l e a n d o m y c i nr e f e r e n c e s t a n d a r d,d i s s o l v e i n a b o u t 2 m L o f m e t h a n o l a n d d i lu t e w i t h p h o s p h a t e b u f f e r s o l u t i o n(4.2.1)t o p r e p a r e a s t o c k s o l u t i o n o f 2 5 0 p g/mL i n c o n c e n t r a t io n.S t o r e i n 4 0C r e f r i g e r a t o r,i t c a n b eu s e d w i t h i n 5 d a y s.4.2.5 O l e a n d o my c i n s t a n d a r d i n t e r m e d i a t e s o l u t i o n,D i l u t e 1 0.0 mL o f o l e a n d o m y c i n s t o c k s o l u t i o nt o 5 0 0 mL i n a v o l u me t r i c f la s k w i t h p h o s p h a t e b u f f e r s o l u t io n(4.2.1)t o p r e p a r e a n i n t e r m e d i a t e s o-l u t i o n o f 5.0 l a g/m L in c o n c e n t r a t io n.P r e p a r e f r e s h l y o n t h e d a y o f t e s t i n g.4.2.6 O l e a n d o my c i n s t a n d a r d w o r k in g s o l u t i o n:D il u t e o l e a n d o my c i n s t a n d a