SN 0339-1995 出口茶叶中黄曲霉毒素B1检验方法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准S N 0 3 3 9 一 9 5出口茶叶中黄曲霉毒素 B:检验方法Me t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f a f l a t o x i n B ii n t e a f o r e x p o r t1 9 9 5 一 0 5 一 2 9 发布1 9 9 5 一 1 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布中华人民共和国进出 口商品检验行业标准出口茶叶中黄曲霉毒素B 1 检验方法s N 0 3 3 9 一9 5Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f a f l a t o x i n B,i s t e a f o r e x p o r t主肠 内容与适用范围本标准规定了出口茶叶中黄曲霉毒素B,含量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B,含量的检验。2 抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 0 0 0件为一检验批。同一检验批的商品应具有柑同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1-5 1 6 5 0 2 5 1-5 0 0 1 1 5 0 1 1 0 0 0 1 6 1 0 0 1-1 5 0 0 1 9 1 5 0 1-2 0 0 0 2 02.3 抽样方法 从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取 2.2 规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用 取样铲从每件中 各取出 有代表性的样品 约5 0 0 g。将所取样品充分混匀，用四 分法或分样器 逐步 缩分出5 0 0 9，装入洁净密 封的 样品 筒内，加封后，标明标 记，及时送实验室。2.4 试样制备 将所取回样品全部磨碎，通过 2 0目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记。2.5 试样保存 将试样于室温下保存。注:在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.测定方法3.1 方法提要 样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 5-0 5-2 9 批准1 9 9 5-1，一 0 1 实施 IS x 0 3 3 9 一9 5 所用试剂，除特殊注明外，均为分析纯，水为重燕馏水。3.2.1 三氯甲烷。3.2.2 正己烷。3.2.3 苯。3.2.4 甲醉:紫外光谱级。3.2.5 乙睛:紫外光谱级。3.2.6 三氟乙酸。3.2.7 乙腊一 水溶液(1+1),3.2.8 三氯甲烷一 甲醇溶液(9 5+5),3.2-9 苯一 乙睛溶液(9 8+z)e3.2.1 0 黄曲霉毒素 B，标准品:纯度)9 90,3.2.1 1 黄曲霉毒素 s,标准溶液:准确称取适量的黄曲霉毒素 s,标准品，以苯一 乙睛溶液(3.2-9)于棕色容 量瓶中，配成浓度为1 0 p g/m L标准 贮备液。根据需 要，再配成适当浓度的标准工作溶液。3.3 仪器和设备3.3.1 液相色谱仪，配有荧光检测器。3.3-2 硅胶小柱:Wa t e r s S e p-p a k S i l i c a 前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱。3.3.3 振荡器。3.3.4 旋转蒸发器，配有 1 0 0 m L具尾管的圆底烧瓶。3.3.5 微量注射器。3.3.6 离心管:5 mL具塞磨口。3.3.了 粉碎机。3.3.8 滤膜:有 机系 用，0.4 5 p m.3.3.9 微孔滤膜过滤器:有机系 用，0.5 j a m,3-4 测定步骤3.4.1 提取 称取试样 5.0 g(精确到。.1 g)置于1 0 0 m L具塞锥形烧瓶中，加入 1 5 mL三氯甲烷，于振荡器上提取 3 0 mi n，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至约 2 0 m L,3.4.2 净化 用旋转蒸发器将上述滤液在 5 0 水浴中浓缩至约 1 mL，经。.4 5 p m滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用 2-4 m L正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用 3-4 m L三氯甲烷一 甲醇溶液(3.2.8)以每秒钟 2 滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气缓缓吹干，供衍生用。3.4.3 衍生3.4.3.1试样 加2 0 0 p L 正己 烷和5 0 p L三氟乙酸于 上述离心 管中，盖紧磨口 塞，超声振荡1 m in，静置1 0 m i n，打开 磨口 塞，缓缓通入氮气至 干。用乙 睛一 水溶液(1+1)(3.2.7)定容至1.0 M I，超声1 m i n，用0.5 p m滤膜过滤，滤液供液相色谱用。3.4-3.2 标准工作溶液 取 1.0 m L标准工作溶液，用氮气缓缓吹干，按3.4-3.1步骤操作。3.4.4 测定3.4.4.1 色谱条件 a.色谱柱:NO V A P AK C,a,3 0 0 mmX3.9 mm(内径).b.流动相:甲醇一 水溶液(4 2+5 8).S N 03 39 一 9 5 c.流速:0.8 m L/mi n,d.荧光检测器:激发波长 3 7 5 nn，发射波长4 2 5 n mo e.色谱柱温度:室温。3.4.4.2 测定 根据样液中黄曲霉毒素B，的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作榕液和样液中黄曲 霉毒素B，衍生 物的响应 值均应在 仪器 检测线性范围内。对 标准工作溶液 和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素 B,衍生物保留时间约为 8 mi n.3.4-4.3 空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。I5 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按下式计算试样中黄曲霉毒素B，的含量:义 一A-c,A cc式 中:x 试样中黄曲霉毒素B，的含墩，n;k g;A样液中黄曲霉毒素B,衍生物的蜂面积，MM ;标准工作溶 液中黄曲霉毒索B，的浓度，p g/m L;人标准工作溶液中黄曲霉毒素B,衍生物的峰面积,m m2;c 最终样液所代表试样的浓度，g/mL,注:计算结果需扣除空白值。测定低限、回收率4.1 测定低限 本 方 法 的 测 定 低 限 为。0 0 1 m g/k g,4.2 回收率 回收率的实验数据:黄曲 霉毒素B，的添加浓度在。.0 0 1 0.5 m g/k g 范围内，回收率为8 9.1%-1 0 4.9%.附加说明:本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。本标 准由中华人民 共和国 江西进出口 商品 检验局负责起草。本标准主要起草人徐文彦、黄小明、施小珊。P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a f o r I m p o r t a n d E x p o r t C o m mo d i t y I n s p e c t i o nS N 033 9一 95Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f a f l a t o x i n B,i n t e a f o r e x p o r t1 S c o p e a n d f i e l d o f a p p l i c a t i o n T h i s s t a n d a r d s p e c i f ie s t h e m e t h o d o f s a m p l i n g,s a m p l e p r e p a r a t i o n a n d d e t e r m i n a t i o n b y h i g hp e r f o r ma n c e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y o f a f l a t o x i n B,i n t e a f o r e x p o r t.Th i s s t a n d a r d i s a p p l i c a b l e t o t h e d e t e r mi n a t io n o f a f l a t o x i n B,i n t e a f o r e x p o r t.2 S a mp l i n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n2.1 I n s p e c t i o n l o t E a c h i n s p e c t i o n l o t s h o u l d n o t e x c e e d 2 0 0 0 p a c k a g e s.T h e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e c a r g o w i t h i n t h e s a m e i n s p e c t i o n l o t,s u c h a s p a c k in g,ma r k,o r i g i n,s p e c i f i c a t i o n a n d g r a d e,s h o u l d b e t h e s a me.2.2 Q u a n t i t y o f s a mp l e t a k e n Q u a n t i t y i n a l o t,Mi n imu m q u a n t i t y t o b e t a k e n,p a c k a g e s p a c k a g e s 1-5 1 6-5 0 2 5 1-5 0 0 1 1 5 0 1-1 0 0 0 1 6 1 0 0 1-1 5 0 0 1 9 1 5 0 1-2 0 0 0 2 02.3 S a mp le p r o c e d u r e D r a w t h e n u mb e r o f p a c k a g e s s p e c i f i e d i n 2.2 a t d if f e r e n t p a r t s o f t h e p i l e a t r a n d o m.O p e n a n de m p t y o u t a l l c o n t e n t s o f e a c h p a c k a g e o n a c l e a n p l a s t i c s h e e t.D r a w t h e r e p r e s e n t a t i v e s a m p l e f r o mt h e r e s p e c t i v e p a c k a g e s,t h e q u a n t i t y o f t h e s a mp l e d r a w n f r o m e a c h p a c k a g e s h o u l d b e a b o u t 5 0 0 g.Mi x a n d r e d u c e t h e mi x e d r e p r e s e n t a t i v e s a m p l e t o c a 5 0 0 g b y q u a r t e r i n g o r b y a r i f f le s a mp l e r,p l a c ei n a c l e a n c o n t a i n e r w h ic h i s t h e n s e a l e d,l a b e l e d a n d s e n t t o l a b o r a t o r y i n t i me.2.4 P r e p a r a