SN 0207-1993 出口肉中丙硫咪唑残留量检验方法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 2 0 7 一 9 3出 口肉 中丙硫 咪 哇 残 留量 检验方法M e t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f r e s i d u e s i n me a t f o r ea l be n da z o l ex p o r t1 9 9 3 一 0 6 一 0 4 发布1 9 9 3 一 0 8 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布中 华人民共和国进出口商品检验行业标准出 口肉 中丙硫咪哇残 留量 检验方法s N 0 207 一 93M e t h o d f o r d e t e r m i n a t i o n o f a l b e n d a z o l e r e s i d u e s i n me a t f o r e x p o r t主肠 内容与适 用范围本标准规定了出口肉中丙硫咪哇残留量检验的抽样、制样和高压液相色谱测定方法。本标准适用于出口猪肉中丙硫咪哇残留量的检验。抽样 和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 检验批中的件数最少抽样件数 1 2 5 1 2 6-1 0 0 5 1 0 1 2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1-1 0 0 0 1 7 1 0 0 1-2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按 2.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始祥品总量不少于2 k g，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室。2.4 试祥制备 从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀，充分混匀，用四分法缩分出 不少于5 0 0 g,装入洁净容器内，加封后，标明 标记。2.5 试样保存 将试样于一1 8 冷冻保存。注:在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.3 测定方法3.1 方法提要 2.5 g 均匀试样于6 N H C l 中 水解，用碳酸钠调节p H)8.0，用乙酸乙酷提取。将丙硫咪哇代谢物和内 标反提取到1 N H C l 内。于S e p-P a k 柱中净化后，浓缩至 干，残渣重新溶解于流动相中，用具荧光检中华人民共和国国家进出口 商品检验局1 9 9 3-0 6-0 4 批准1 9 9 3-0 8-0 1 实施 1S N 0 2 0 7 一9 3测器的H P L C进行定量。3.2 试剂和材料3.2.1 5-(丙硫酞-1 H苯井咪哇-2-胺:标准品。纯度”%。3.2.2 5-(丁硫R)-1 H苯并咪哇-2-胺:内标。纯度”%。3,2.3 浓盐酸:分析纯。3.2.4 二甲亚9(D MS O):经玻璃仪器蒸馏。3.2.5 乙酸乙醋:经玻璃仪器蒸馏。3.2.6 甲醇:经玻璃仪器蒸馏。3,2.7 甲苯:经玻璃仪器蒸馏。3.2.8 乙睛:经玻璃仪器蒸馏。3.2.9 二乙醇胺.3.2.1 0 无水碳酸钠:粉末状，分析纯。3.2.1 1 磷酸二氢钾:分析纯。3.2.祀无水磷酸氢二钾:分析纯。3.2.1 3 水:去离子水。3.2.1 4 氮气:纯度i9 9.9 9%.3.2.1 5 标准储备溶液3.2.巧门 称取1 0.0 m g 5-(丙硫酞)-1 H苯并咪 w O-2-胺于1 0 0 m L 容量瓶内，用D M S O溶解并稀 释至刻度(1 0 0 Fa g/m L),3.2-1 5-2 称取1 0.0 m g 5-(丁硫酞)-1 H苯并咪4-2-胺于1 0 0 m L容量瓶内，用D M S O溶解并稀 释至刻度(1 0 0 Fa g/m L).3.2.1 6 标准工作溶液3.2.1 6.1 移取 2.0 mL储备溶液(3.2.1 5.1)及 8.0 m L DMS O入一 1 5 mL具玻塞离心管内，以涡式混匀器混匀，制得 2 0 Fa g/m L溶液0.2.1 6.1)(2.5 g试样中加入 5 0 F L此溶液，含量相当于4 0 0 F a g/k g),3.2-1 6.2 移取5.0 m L工作溶液(3.2.1 6.1)及5.0 m L D M S O入一1 5 m L具玻塞离心管内，以涡式混匀器混匀，制得 1 0 p g/m L溶液(3.2.1 6.2)(2.5 g试样中加人 5 0 Is L此溶液，含量相当于2 0 0 ,g/k g),3.2.1 6.3 移取 5.0 m L工作溶液(3.2.1 6.2)及 5.0 mL D MS O入一 1 5 m L具玻塞离心管内，以涡式混匀器混匀，制得5 V g/m L溶液(3.2.1 6.3)(2.5 g 试样中加入5 0 p L 此溶液，含量相当于l o o p g/k g),3.2.1 6.4 移取 1.0 mL储备溶液(3.2.1 5.2)及，.0 m L D MS O入一 1 5 mL具玻塞离心管内，以涡式混 匀 器 混 匀，制 得1 0 K g/m L 溶 众(3.2.1 6.4)(2.5 g 试 样 中 加 入5 0 k L 此 溶 液，含 量 相 当 于2 0 0 fag/k g),所有标准溶液均应保存于冰箱内，标准在D M S O溶液中至少可以稳定6 个月。因为在此条件下D M S O会发生凝结，所以 使用前需要将离心管放于装有 温水的烧杯内，使标准溶液重新液化，以涡式混 匀器混匀。仪器和设备 液相色谱仪并配备荧光检测器。微量注射器:1 0 K L,5 0 M L.保护柱:C O:P E L L O D S,2 m m(内径)X 5 c m.微 孔过 滤 器:。.2 K m,0.4 5 K m滤 膜 玻璃刻度离心管:具磨口 塞，1 5 m L.离心机。，d，J勺 ，.卜11IJ川33433.5336?S N 02 07一 933.3.了 捣碎机.3.3.8 吸移管。3.3.9 p H计。3.3.1 0 涡式混匀器。3.3.1 1 真空抽滤器.3.4 测定步骤3.4.1 提取和净化3.4.1.1 取试样代表性部位，以捣碎机进行充分匀化。匀化后的试样在分析前一直冷冻保存。3.4.1.2 将一去皮重的烧杯置于天平上，烧杯中放一 5 0 mL玻璃离心管(未加塞)，用粗管尖吸移管取样，称取2.5 士 0.0 5 g 均匀试样，置于离心管 底部。如此分别制备四份空白组织 试样，及一份对照试样，三 份添 加标准的 试样。在 对照试样中加 人1 0 0 I L纯D MS O,在疑有丙硫咪哇残留物的组织试样中加入5 0 I A L D M S O。在空白 组织试样和疑有丙硫咪 哇的 组织 试样中 分别加入5 0 h L 工作溶 液(3.2.1 6.4).然后，在已 加入5 0 I L 工作溶液(3.2.1 6.4)的三个空白 组织试样中 分别加入5 0 p L工作溶液(3-2.1 6.1),(3.2.1 6.2),(3.2.1 6.3),注:应将添加溶液加于5 0 mL管内刚好浸没均匀试样，以便下一步加入HC I 时确保有足够的溶液.3.4.1.3 在3.4.1.2 制备的每一试样中加入2.5 m L 6 N H C I，盖好每支管，然后 将试样 管(用另 一试管架固定，以防塞子突然跳出)放到预先调至 1 1 0 士4 的烘箱内。3.4.1.4 在 1h 后，把试样从 1 1 0 士4 的烘箱中取出，将试徉管放于干冰或冰上约 5 mi n,冷却至室温。3.4.1.5 向每个试样中加人2.0 m L 水?然后以涡式混匀器混匀试样，用p H计监测p H值。慢慢加入足量(约1.2 3 g)的碳酸钠，加 人时间约需4-5 m i n，以免起泡或结块，调节p H至8 9.5(将洁净 的p H电极直接放入试样中测定。记录 p H值后，在离心管内壁上轻轻接触去掉电极上的液滴。将整个电极从试样管中 取出，用水冲洗，擦干后再测定下二个试样)。注室温或接近室温的试样.加入碳酸钠时象较冷试样那样不会产生泡沫，因此，加入碳酸钠时可以快些.3.4.1.6 向每个试样内加入1 5 mL乙酸乙醋，盖上塞子，平放于试管架上，振摇 5 mi n,然后取下塞子，于约 4 0 0 0 r/mi n将试样离心 5 mi n e3.4.1水相。3.4.1了 用吸移管将乙酸乙醋提取液转入另一5 0 mL玻璃离心管内，应尽量转移完全。注意不要带走8 重复操作3.4-1.6 和3.4.1.7 步骤，再次提取每个试样，把相应的提取液合并于各自 的5 0 mL 玻璃离心管内。3.4.1.9 向每个合并的乙酸乙酷提取液中加入 4.0mLINH C 1，盖上塞子，平放于试管架上，振摇5 mi n。取下塞子，然后于 4 0 0 0 r/mi n 左右离心 5 m i n,3.4.1.1 0 尽量完全吸去乙酸乙酷相，注意不要带走水相。在3 5 士5 水浴上蒸去水溶液上残留 的乙 酸乙醋(1 mL),(必要时，可在此步骤停止分析操作，而放置过夜。)3.4.1.1 1 以涡式混匀器将每一试样混匀.同时慢慢加人足量(约。.3 3 g)碳酸钠，加入时间约需 1-2 mi n，以免起泡或结块。用 p H计监测p H值，每个试样的 p H值应为 8-9.5,3.4.1.1 2 向每个试样中加入 2 0 m L甲苯，盖上塞子，平放于试管架上，振摇 5 mi n，取下塞子，于 4 0 0 0r/m i n左右将试祥离心 5 mi n.3.4.1.1 3 尽量完全吸去甲苯相，注意不要带走水相。在 3 5 士5 的水浴上蒸去水相上残留的甲苯(8.0 wit h s o d i u m c a r b o n a t ea n d e x t r a c t e d w i t h e t h y l a c e t a t e.T h e a l b e n d a z o l e ma r k e r a n d i n t e r n a l s t a n d a r d a r e b a c k-e x t r a c t e d i n t o1 N H C l.Th e a q u e o u s p h a s e i s a p p l ie d t o a S e p-P a k C 1 8 c a r t r i d g e wh e r e t h e c o mp o u n d s o f i n t e r e s t a r er e t a i n e d a n d e l u t e d w i t h e t h y l a c e t a t e.T h e e t h y l a c e t a t e e x t r a c t i s t h e n c o n c e n t r a t e d t o d r y n e s s.T h er e s i d u e i s r e c o n s t i t u t e d i n m o b i l e p h a s e,f i l t e r e d a n d q u a n t i f i c a t i o n p e r f o r m e d b y H P L C u s i n g f l u o r e s-c e n c e d e t e c t i o n.3.2 Re a g e n t s a n d ma t e r i a l s3.2.1 5-(P r o p y l s u l f o n y l)-1 H b e n z imi d a z o l-2-a m i n e;s t a n d a r d s u b s t a n c e.p u r i t y 9 9 o o3.2.2 5-(B u t y l s u l f o n y l)-1 H b e n z i m i d a z o l-2-a m i n