SCT 7232-2020 虾肝肠胞虫病诊断规程.pdf

SC/T7232-2020虾肝肠胞虫病诊断规程1范围本标准给出了虾肝肠胞虫病(Enterocytozoon hepatopenaei disease).诊断试剂和材料、器材和设备、临床症状，规定了采样、组织病理、套式PCR和TaqMan荧光定量PCR等病原检验的3种方法和综合判定。本标准适用于虾肝肠胞虫病的诊断，监测、检疫和流行病学调查。2规范性引用文件凡是不注日物的用8然机图件仅别的饭本适用时GB/T28630.4-2012综合(WSD)诊规程美之SN/T1193基因检验实张3缩略语TA下列缩略语适用文件bp:碱基对(base pairDNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuclEB:溴化乙啶(E近idium bromideEHP:虾肝肠胞PCR:聚合而h反应polymerase chain reactionSWP:孢子壁蛋白(spore wall protein)SSU rRNA:核糖体核糖林ibonuTaq:水生栖热菌0Tris:三羟甲基基用4试剂和材料4.1水或相当纯度的水。4.2组织病理法所用试剂和材料：除阳性对照、阴性对照外，按照GB/T28630.4一2012中第3章的规定执行。4.3无水乙醇：分析纯。4.410PCR缓冲液：随Tag DNA聚合酶提供，一20保存4.5MgC2(25mmol/L):-20保存。4.6 dNTPs(各2.5mmol/L):含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各2.5mmol/L的混合物，一20保存，用于PCR。4.7 Tag DNA聚合酶(5U/L):-20保存4.82预混液(2 XPremix Ex Taq)。4.9套式PCR引物的目的基因为SWP基因，对虾肝肠胞虫有很高的特异性，浓度为10mol/L。序列如下：514F:5-TTG-CAG-AGT-GTT-GTT-AAG-GGT-TT-3;514R:5-CAC-GAT-GTG-TCT-TTG-CAA-TTT-TC-3;147F:5-TTG-GCG-GCA-CAA-TTC-TCA-AAC-A-3;1