SC 1042-2000 奥利亚罗非鱼.pdf

s C 1 0 4 2-2 0 0 0前言 奥利亚罗非鱼，原产于非洲，8 0 年代引进我国。为保护和保存引进的奥利亚罗非鱼的优良经济性状，防止苗种生产中种质混杂和性状退化，并开展该鱼种质的有效监测，特制定本标准。本标准是“七五”、“八五”科技攻关成果的总结。本标准的附录A、附录B,附录C都是标准的附录。本标准由农业部渔业局提出.本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。本标准起草单位:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心。本标准主要起草人:潘锋、王和海、胡玫。中华人民共和国水产行业标准奥利亚罗非鱼s c 1 0 4 2 一2 0 0 0B l u e t i l a p i a1 范围 本标准给出了奥利亚罗非鱼(O r e o c h r o m i s a u r e a)主要生物学性状、生长与繁殖、遗传学特性及检测方法。本标准适用于奥利亚罗非鱼的种质检测。2 名称与分类2.1 名称2，.，学名 奥利亚罗非鱼(O r e o c h r o m i s a u r e a)e2.1.2 别名 蓝罗非鱼、奥利亚非娜、奥利亚丽绷等。2.2 分类位置 属妒形目(P e r c i f o r m e s)，丽鱼科(C i c h l i d a e),孵光鳃罗非鱼属(O r e o c h r o mi s),3 主要生物学性状3.1 外部形态特征3.1.1 形态特征 体形侧扁，背部隆起，腹部呈弧形，无腹棱。吻圆钝，突出。口小端位，口裂不达眼前缘，无口须。体披栉鳞。体色蓝灰色，鳃盖后部有一深蓝色斑块。咽喉部呈银灰色。体侧上鳞片中央的色素较边缘深，鱼体两侧有垂直暗带。成鱼背部略带蓝黑色，腹部颜色较淡。背鳍边缘红色。胸鳍淡灰色透明。臀鳍深蓝色。尾鳍终生有蓝绿色斑点，不形成明显的纵向或横向暗带条纹，其末端平截不分叉，呈现橙红色，腹鳍深蓝色，长有生殖突起。稚鱼青灰色带金色光泽，体侧有深灰色垂直暗带，背鳍硬棘幼鱼前期有一较大黑点，以后逐渐消失。各龄鱼体色因环境改变而迅速变淡或加深。奥利亚罗非鱼外形见图1 aS C 1 0 4 2 一2 0 0 03.1.2 可数性状3.1.2.1 背鳍鳍式:D.X V-XV 0,1 1-1 3,3.1.2.2 胸鳍鳍式:P.0,1 1-1 4.3.1.2.3 腹鳍鳍式:V.1,5.3.1.2.4 臀鳍鳍式:A.1,9-1 1.3.1.2.5 左侧第一鳃弓外侧鳃耙数:2 5-2 9 03.1.2.6 侧线断折，呈不连续两行。侧线鳞数:上段为 1 8 -2 9，下段为 1 2 1 8,3 门.2.了 领齿 上下领有圆锥状领齿各为三列，最外一列为“Y 型。3.1.3 可量性状 可量比例性状变动值见表 t o 表 1 可量比例性状变动值项目范围全长，c m2 0.5-3 4.5体长，c m1 7.0-2 9.6体长/体高2.5 3 -2.9 4体长/头长2.5 6.4.2 9体长/尾柄长5.8 9-9.8 7体长/尾柄高6.0 6.1 0.2 1头长/吻长2.3 9 -3.5 0头长/眼径3.7 2 -5.2 4头长/眼间距2.0 6-2.3 5注:此表为无锡地区2 至 3 龄奥利亚罗非鱼的实侧数据，3.2 内部结构特征3.2.1 缥 缥分二室，前室较大，后室细长。3.2.2 肋骨 肋骨数 1 3 对。3.2.3 下咽齿 左、右下咽骨愈合，其上有浓密的蓖齿。3.2.4 脊椎骨 脊椎骨总数(颅后椎数、腹椎数、尾椎数之和)为2 9 -3 0,3.2.5 腹膜 黑色。4 生长与怪殖4.1 生长 池塘饲养条件下，不同年龄组鱼的体长和体重的理论值见表2。S C 1 0 4 2 一 2 0 0 0表 2 不同年龄组鱼的体长和体重理论值年龄，龄123体长，c m1 3.0 6 士 0.4 71 9.4 9 士1.2 32 3.9 3 士1.4 9体重.98 5.6 9 士1 0.1 72 3 1.9 5 士 3 7.64 1 7.1 4 士4 4.9 9注:主要根据鳞片上的年轮数。在同等饲养条件下，雌鱼的生长率仅为同龄雄鱼的5 4%-9 0%.4.2 繁殖4.2.1 性成熟年龄 雌、雄鱼初次性成熟为4 -6 月龄。4.2.2 产卵 越冬鱼种在水温 2 4 -2 6 条件下，饲养 1 -1.5个月即可繁殖，年产卵 3-5次，每次间隔 1 5-3 0 d o4.2.3 繁殖水温 繁殖最适水温为2 4 2 6 0C.水温低于 2 0 或高于3 0 0C 繁殖减少。4.2.4 怀卵量 不同年龄组鱼的个体怀卵量见表 3,表 3 不同年龄组鱼的个体怀卵量年龄，龄123体重,g5 0-1 5 02 0 0 3 5 04 0 0-6 0 0绝对怀卵量日，粒2 5 0-6 0 08 0 0-1 2 0 01 3 0 0 2 5 0 0相对怀卵ta ,粒5-34-33-21)绝对怀卵f,指直观可数的卵位数2)相对怀卵t,指单位体重(9)所含卵粒数。5 遗传学特性5.1 同功酶 醇脱氢醇(A D H)电泳图谱，肝中AD H有 2 个位点，2 条谱带，无多态(见图 2)邸 即 靡 一辱0 图 2 奥利亚罗非鱼肝组织A D H同工酶电泳图谱5.2 染色体数 体细胞染色体数2 摊=4 4,5.3 核型 雌、雄鱼核型完全一致，有亚中部着丝粒染色体(s m组)3 对，亚端部着丝粒染色体(s t 组)1 2 对，端部着丝粒染色体(t 组)7 对，染色体育数(N F)5 0(见图3)eS C 1 0 4 2 一 2 0 0 0八人几井古住p.nU入 八沪、侧.办 介八 沪 i t 几八晚八 八六 扣介 八图 3 奥利亚罗非鱼染色体组型核型公式:6 s m+2 4 s t+1 4 t,6 检测方法6.1 生化遗传分析6.1.1 电泳样品制备 将鱼杀死，取肝脏组织0.3 g，以4 倍体积0.3%的氧化型辅酶I 液匀浆.在冷冻离心机中以1 7 0 0 0r/m i n离心 2 次，第一次离心后，去除上层油膜，再第二次离心，至上层溶液澄清为止，取上清液点样。6.1.2 电泳步骤 使用水平平板电泳仪和浓度为7.5 Y o 聚丙烯酞胺凝胶。电极缓冲液采用E B T缓冲液 见附录A(标准的附录)。步骤为:a)预电泳。恒温 5 时，将预先制备好的象丙烯酸胺凝胶放在冷却板上，在 5 0 mA电流下，预电泳3 0 mi n,b)前电泳。预电泳后，用微量加样器在每个点样孔内加人 8 K L样品，在2 5 m A电流下，前电泳1 0 m i n，再进行正式电泳.c)正式电泳。在 2 7 5 V电压下，电泳时间为3-5 h,d)染色。将电泳后的电泳胶板放人在恒温箱3 7 保温的染色液中染色，至酶带清晰显示为止。染色液配方见附录 B(标准的附录)。62 染色体检测6.2-1 标本制备 采用肾组织细胞加植物血凝聚素(P H A)短期培养法及空气自然干燥法，制片，吉姆萨(G i e m s a)染色。吉姆萨染色液配方见附录C(标准的附录)。6.2.2 计数 在光镜下，选取染色体铺散良好、完整的中期分裂相计数染色体数目，确定 2 n 数。6.2.3 形态分类 选择 1 0 个以上的分裂相，进行显微拍照，按放大照片对染色体组型分析，按形态归类。6.3 结果判定 各项测定结果，对照标准指标，综合分析判定，是否符合标准。同时，计算出符合标准的百分数。s C 1 0 4 2 一 2 0 0 0 附录A (标准的附录)E B T电极级冲液的配制A l 原液配制 三轻甲基氛基甲烷(T r i s)6 5.4 g 乙二胺四乙酸钠盐(N a,E D T A)3.5 1 g 蒸馏水1 3 0 0 m L 另称硼酸约2 7 g，用来调节p H值至8.6，并稀释至1 5 0 0 m L,A 2 电极用液正极用液:取原液 7 9.4 mL稀释至 1 0 0 0 mL,浓度为。.0 2 8 6 m o l/L,负极用液:取原液 1 1 1 m L稀释至 1 0 0 0 m L，浓度为0.0 4 m o l/L.附录B(标准的附录)染 色 液 配 方B l 0.2 5 m o l/L T i r s-H C I 染色级冲液的配制 称取T i r s 3 0.2 9 g，加燕馏水 9 0 0 m L，和盐酸调节p H值至8.0，再稀释至1 0 0 0 m L,B 2 染色液配方。.2 5 m o l 染色缓冲液氧化型辅酶I抓化硝基四氛哇兰(N B T)吩喃甲醋硫酸盐(P MS)9 5%乙醇1 4 0 mL2 2 mg1 0.5 mL1 0.5 mg4.5 mL 附最C (标准的附录)古姆萨(G i e m s a)染色液配制C l G i e m s a 染色母液的配制 称取。.5 g G i e m s a 粉，量取3 3 m L甘油，在研钵中先用少I甘油与G i e m s a 粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加人，在5 6 条件下保温2 h,-后，加人3 3 m L申醇，保存于棕色瓶内。C 2 0.2 m o l 确睑级冲液配制C 2.1 A液 0.2 mo l/L磷酸氢二钠(N a 2 H P O,)液液、称取磷酸氢二钠(N a,H P O,H z 0)3 6.6 1 g 定容于1 L蒸馏水中.或称取磷酸氢二钠(N a z H P O,s c 1 0 4 2 一2 0 0 02 H 2 0)7 1.6 4 g 定容于1 L蒸馏水中。C 2.2 B液 0.2 mo l/L磷酸二氢钠(N a H 2 P O,)溶液 称取磷酸二氢钠(N a H,P O,H,0)2 7.6 g 定容于1 L蒸馏水中，或称取磷酸二氢钠(N a H,P O,2 H 2 0)3 1.2 1 g定容于1 L蒸馏水中。C 2.3 p H 7.2 磷酸缓冲液 取 0.2 m o l/L磷酸氢二钠(N a 2 HP 0,)溶液 7 2.0 mL，加 0.2 mo l/L磷酸二氢钠(N a H 2 P O,)溶液2 8.0 m L即成。C 3 G i e m s a 工作染液 取1 0 0 m L p H 7.2 磷酸缓冲液，加人3 m L G i e m s a 染色母液即成。