NYT 556-2002 鸡传染性喉气管炎诊断技术.pdf

NY/T556-2002表1病毒分离稀释方法管号病毒分离物稀释度试管中的混合液1210-11mL病毒分离物原液+4mL稀释液2210-21mL2号管液+9mL稀释液3210-31mL3号管液十9mL稀释液4210-41mL4号管液十9mL稀释液2X10-51mL5号管液+9mL稀释液病毒-血清混合液：设两排试验管，每排4个管，第1排每管放0.6L标准阳性血清，第2排每管放0.6mL阴性血清，然后向每排14号试验管内分别加入(2102210-5)稀释的病毒悬液各0.6mL,将病毒-血清悬液混合并置冰箱(4C8)4h。鸡胚接种及结果判定：取经处理过的病毒-血清混合液，分别接种912日龄的鸡胚绒毛尿囊膜，0.2mL/枚，每管接种5枚，接种后的鸡胚在37孵育，每天观察鸡胚2次，连续观察7d,弃去24h内死亡的鸡胚，24h120h内死亡的鸡胚，放4冷却后，观察鸡胚绒毛尿囊膜上有无痘斑形成；120h仍不死亡的鸡胚，亦取出，置4冷却后，观察鸡胚绒毛尿囊膜上有无痘斑形成。记录观察结果，按半数致死量(Reed-Muench)方法计算EIDso,计算方法见附录A(规范性附录)。2.3结果判定如分离物能引起鸡胚绒毛尿囊膜出现典型的痘斑，并且经鸡胚中和试验，其阴性血清组和阳性血清组的EID5o的对数之差大于或等于2.5时，则判定分离物为鸡传染性喉气管炎病毒。3琼脂凝胶免疫扩散试验3.1材料准备3.1.1器材：烧杯，直径85mm培养皿，孔径4mm的打孔器，69号针头，微量移液器及针头。3.1.2琼脂扩散抗原。3.1.3标准阳性血清。3.1.4被检血清：无菌采血，分离血清，4或一20保存备用。3.1.5琼脂平板：配制方法见附录B(规范性附录)。3.2操作方法3.2.1琼脂板打孔在琼脂糖平皿上，按坐标纸上画好的梅花型（见图1）打孔，孔径4mm,孔间距3mm。挑出孔内琼脂，在火焰上封底。图1打孔样式2