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SBT
10316-1999
孢子发芽率测定法
10316
1999
孢子
发芽率
测定法
备案号:2 7 4 3-1 9 9 9中华 人 民共 和 国 行 业标 准日 B沪 T抱子发 芽率测定法 代,B x6 6 0 2 9-8 7D e t e r m i n a t i o n o f t h e r a t e o f c o n i d i s g e r mi n a t i o n本方法适用 于酿造酱油时 在制品菌种泡子发芽率的测定。仪器及试剂a 凹玻片、盖玻片、显微镜;b.恒温箱;c.生理盐水、无菌水、察氏培养基;d.接种环、酒精灯等。2操作 2.1 制备悬浮液:取种曲 少许入盛有2 5 m L事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中,充分振 摇约1 5 min,务使抱子个个分散,制成抱子悬浮液。2.2 制作标本:先在凹玻片的凹 窝内 滴入无菌水4 滴,再将察氏 培养基融化并冷却至4 5-5 0 后,接入抱子悬浮 液数滴。充 分摇匀后,用 玻璃棒以 薄层涂布在盖玻片上,然后反盖于凹玻片的窝上,四周涂凡士林封固。放置于3 0-3 2 恒温箱内 培养3-5 h,2.3 镜检:取出标本在高倍镜头下观察抱子发芽情况,逐个数出发芽抱子数和未发芽抱子数。3计算发 芽 率(%)一 贵 X 1 0 0式中:a 发芽 抱子数,个;A-发芽及不发芽抱子总数,个。4注愈事项 4.1 为了 正确起见,要同 时制作两张以 上标本片镜检,取其 平均值。4.2 悬浮液制备后要立刻制作标本培养,时间不宜放长。4.3 培养基中接入悬浮液的数量,应根据视野内抱子数多少来决定,一般以每视野内有 1 0 -2 0 个抱子为宜。国家 国内 贸易 局1 9 9 9-0 4-1 5 批 准1 9 9 9-0 4-1 5实 施2 2 8s ur r 1 0 8 1 8-1 9 9 9 4.4 每次镜检,要在不同视野中连续观察 1 0 0-2 0 0 个抱子的发芽情况。4.5 由于发芽快慢与温度有密切关系,所以培养温度要严格控制。为了加速发芽,可提高培养温度至3 5 左右,但必须与 3 0-3 2 法进行对照。4.菌种不同,驯化程度不同,测定用培养基配方允许稍有不同,例如 3.9 5 1 菌种可在察氏培养基中加几滴豆饼煮出液。4.7 察氏培养基配方如下:硝酸 钠3 g 磷酸氢二钾 l g 氯化钾 0.5 g 硫酸镁0.5 g 硫酸亚铁 0.O l g 蔗糖2 0 g 蒸馏水1 0 0 0 mL 琼脂2 0 g 将 卜 述药品按顺序溶解后,加入琼脂加热溶化。分装 1 5 X 1 5 0 mL试管中,加压灭菌后备用。附加说明:本标准由国家国内贸易局提出。本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准主要起草人须凤高。2 2 9