NYT 561-2015 动物炭疽诊断技术.pdf

NY/T561-2015新鲜疑似炭疽动物病料标本陈旧动物病料和环境标本制备悬液血液涂片或组织触片染色镜检62-63水浴15min-20min涂布琼脂平板培养基10倍梯度稀释1个3个梯度.涂布PL上T琼脂平板，37培养36h-48h挑取扁平、灰白色、毛玻璃样、不溶血的粗糙型大菌落噬菌体裂解试验青霉素抑制试验PCR鉴定试验判定结果.出具诊断报告图1炭疽细菌学检查操作流程6新鲜疑似炭疽动物病料标本的细菌学检查6.1病料标本采集和运输6.1.1疑似炭疽患病动物病料标本采集疑似炭疽患病动物，自消毒的耳部或尾根部静脉采血1mL一3L,或者抽取病变部水肿液或渗出液以及天然孔流出的血性物，放置于无菌采样管中。取少许血液或组织液直接涂于载玻片上，自然干燥后火焰固定，放置于载玻片盒中。6.1.2疑似炭疽死亡动物病料标本采集疑似炭疽死亡动物，针刺鼻腔或尾根部静脉抽取血液。已经错剖的疑似炭疽动物尸体，应立即停止解剖活动，可抽取1mL3L血液或血性物，或者用无菌棉拭子蘸取组织切面采样，并做血液涂片或组织触片，然后立即按照农医发2007)12号的规定处理现场。6.1.3病料标本运输病料标本的包装和运输应符合国务院2004)424号的要求，运输时间超过1h,应在2一8条件下运输。6.2细菌染色法6.2.1碱性美蓝荚膜染色法6.2.1.1操作方法滴加碱性美蓝染色液于载玻片涂抹面上，染色2min3min(如荚膜不清楚，染色时间可稍延长)，水洗、干燥、镜检。冲洗后的废水以及吸水纸经高压灭菌处理或者用10%次氯酸钠溶液处理过夜。6.2.1.2结果观察镜下观察可见，炭疽芽孢杆菌菌体粗大，呈深蓝色，菌体外围荚膜呈粉红色。病料标本染色，菌体单在、成对或呈短链条排列；培养物染色，菌体呈长链条排列。6.2.2革兰氏染色法6.2.2.1操作方法滴加草酸铵结晶紫染色液于载玻片涂抹面上，染色1min,水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min,水洗。滴加95%乙醇，脱色约30s,水洗。滴加沙黄复染液，复染1mi,水洗，干燥，镜检。废水以及吸水2