NYT 829-2004 牛奶中氨苄青霉素残留检测方法HPLC.pdf

NY/T829-20044.2.8三氯乙酸水溶液(200mg/ml)称取氯乙酸20g,溶于80ml.水中，加水稀释至00ml.摇即得4.2.9三氯乙酸水溶液(750mgml)称取乙酸75g,加水适量，使溶解，并稀释至100L,摇匀即得4.2.107%甲醛水溶液量取37%甲醛18.9mL.加水至100l.摇匀即得4.2.1120%乙腈水溶液量取20ml乙腈至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得4.2.12氨苄青霉素标准贮备液(1000g/m)准确称取氨苄青霉素标准品约0.1155g,置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成1000gml标准贮备液，置于4冰箱中保存，存放期为1周。4.2.13氨苄青霉素标准工作液精密量取氨苄青霉素标准贮备液适量，用水稀释成适宜浓度的标准溶液(0.(001gl0.100g/mL),即得。临用前配制4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪（配荧光检测器）4.3.2冷冻离心机4.3.3分析天平（感量0.0001g)4.3.4旋涡振荡器4.3.5恒温水浴锅4.3.6微孔滤膜(0.45m)4.4测定步骤4.4.1试样的制备试样的制备包括：一取新鲜或室温下解冻后的牛奶，以3500rmin离心10min,取下层液作为供试试样：一取新鲜或室温下解冻后的空白牛奶，以3500rmin离心10min,取下层液作为空白试样：取空白试样，添加适宜浓度的标准工作溶液作为空白添加试样。4.4.2提取精密量取试样5.0ml.10ml,置于朔料离心管中，加入三氯乙酸水溶液(750mg/ml)0.5mL.0.01ml,盖紧后剧烈振摇30s。然后，以6500rmin的速度离心10min,量取上清液1mL0.01mL于10mL螺口刻度离心管中。4.4.3衍生化在盛有1.0ml离心上清液或标准工作液的10mL螺口刻度离心管中，加入三氯乙酸水溶液(200mgmL)0.2nl.和7%甲醛溶液0.2ml,旋涡混匀20s,加盖拧紧后置于沸水浴中加热30minm。取出，冷却至室温，用20%乙腈水溶液定容至2ml,混匀后，经0.45m微孔滤膜滤过至样品瓶中，供高效液相色谱分析4.4.4测定4.4.4.1色谱条件色谱柱：C1x,250mrm4.6nmm(i.d.）,粒径5m.或相当者：流动相：磷酸盐缓冲液一乙腈(75+25，/)：流速：I ml/min:2