DBS63 0006-2022 食品安全地方标准 枸杞蜂蜜.pdf

青海省地方标准DBS63DBS63/0006-2022食品安全地方标准食品安全地方标准枸杞蜂蜜枸杞蜂蜜2022-09-19 发布2022-12-19 实施青青海海省省卫卫生生健健康康委委员员会会发发布布DBS 63/0006-20221前言本文件遵循中华人民共和国食品安全法中华人民共和国标准化法青海省食品安全地方标准管理办法等法律、法规规定，按照GB/T11-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由青海花赐生物科技有限公司提出。本文件由青海省卫生健康委员会归口。本文件起草单位：青海花赐生物科技有限公司、中国农业科学院蜜蜂研究所、青海之也科技咨询服务有限公司。本文件主要起草人：山永凯、贾彩惠、赵小娟、刘洪智、张红城、王健斌、李树志、许安洁、乔江涛、薛德艳、蔡帮军、孔令杰、董捷、黄俊。本文件由青海省卫生健康委员会监督实施。本文件于 2022 年 09 月 19 日首次发布。DBS 63/0006-20222枸杞蜂蜜1范围本标准规定了枸杞蜂蜜的术语和定义、质量要求、检验规则、包装、标签与标志、贮存、运输、保质期。本标准适用于青海省境内采集、加工的枸杞蜂蜂蜜。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适于本文件。凡是不注明的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB 2762食品安全国家标准 食品中污染物限量GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量GB 4789.1食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则GB 4789.2食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定GB 4789.3食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数GB 4789.4食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB 4789.5食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验GB 4789.10食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验GB 4789.15食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数GB 5009.8食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定GB 5009.14食品安全国家标准 食品中锌的测定GB 7718食品安全国家标准 预包装食品标签通则GB 14963食品安全国家标准 蜂蜜GB/T 191包装储运图示标志SN/T 0852进出口蜂蜜检验规程3术语和定义本标准釆用下列定义和术语。3.1枸杞蜂蜜蜜蜂仅采集枸杞植物的花蜜、露蜜或分泌物，与其自身分泌物混合后，经过转化、沉积、去水、贮藏于蜂巢中，并在蜂巢内转化直至成熟。3.2花旗松素是枸杞蜜中的特有成分，用于区分枸杞蜂蜜和其他蜂蜜的特征性成分。DBS 63/0006-202233.3标准指纹图谱枸杞蜂蜜中所含各类成分的特征性色谱图。4质量要求4.1 蜜源要求蜜蜂采集植物主要来源于青海省境内枸杞的花蜜、分泌物或蜜露，应安全无毒，不得来源于有毒蜜源植物。4.2 感官要求应符合表 1 的规定。表 1 感官要求项目要求检测方法色泽色泽均匀一致，呈琥珀色。结晶状态下为乳白色按 SN/T 0852 的相应方法检验滋味、气味具有枸杞特有的花香味，无酸或酒的挥发性气味和其他异味状态常温下呈粘稠流体状，或部分及全部结晶，无发酵征状GB 14963 感官要求中相应方法检测杂质不含有蜜蜂肢体、幼虫、蜡屑及正常视力可见杂质（含蜡屑巢蜜除外）4.3 理化要求应符合表 2 的规定。表 2 理化指标项目要求检验方法果糖和葡萄糖（g/100g）65GB 5009.8蔗糖（g/100g）5GB 5009.8花旗松素（mg/kg）2.5本标准附录 A丁香酸甲酯与花旗松素含量比0.06本标准附录 A锌(Zn)/（mg/kg）25GB 5009.144.4 污染物限量污染物限量应符合 GB2762 的规定。4.5 兽药残留限量和农药残留限量4.5.1 兽药残留限量兽药残留限量应符合相关标准的规定。4.5.2 农药残留限量DBS 63/0006-20224农药残留限量应符合 GB2763 的规定。4.6 微生物限量微生物限量应符合表 3 的规定。表 3微生物指标项目要求检验方法a菌落总数/（CFU/g）1000GB 4789.2大肠菌群/（MPN/g）0.3GB 4789.3霉菌计数/（CFU/g）200GB 4789.15嗜渗酵母计数/（CFU/g）200GB 14963 中附录 A沙门氏菌0/25gGB 4789.4志贺氏菌0/25gGB 4789.5金黄色葡萄球菌0/25gGB 4789.10a样品的分析及处理按 GB4789.1 执行。4.7 真实性要求不得添加或取出任何成分。5包装、标签与标志、贮存、运输、保质期5.1 包装产品包装材料和容器应卫生、无毒无异味、无破损，应符合相关产品质量标准及食品安全要求，包装应密封完好、无泄漏。5.2 标签与标识产品包装应符合 GB 7718 的规定，产品储运图示标志应符合 GB/T 191 的规定。5.3 贮存产品应贮存于阴凉、通风、干燥清洁的常温环境中；严禁与有毒、有害、有异味、有腐蚀性的物品混放。5.4 运输产品运输所用运输工具应清洁卫生，防止日晒、雨淋、重压，不得与有毒、有害、易腐败变质、有腐蚀性或有异味的物品混运。搬运产品应轻拿轻放，严禁摔扔、撞击、挤压。5.5 保质期本标准规定的贮存条件下，自生产之日起，产品保质期为 24 个月。DBS 63/0006-20221附录附录 A A（规范性附录）枸杞枸杞蜜理化指标检测方法蜜理化指标检测方法A.1 花旗松素和丁香酸甲酯含量测定A.1.1 原理蜂蜜中的植物化学物质主要来自于花蜜，由于蜂蜜中的植物化学物质含量相对较少，因此采用Phenomenex Strata-X-A 固相萃取柱富集蜂蜜中植物化学物质。花旗松素和丁香酸甲酯最大紫外吸收波长为 301 和 275。在反相 C18柱上的保留时间不同。A.1.2 试剂a）花旗松素、丁香酸甲酯（色谱纯）。b）甲醇（色谱纯）、乙酸（色谱纯）、氨水（分析纯）、甲酸（分析纯）、蒸馏水（重蒸，并经0.45m 滤膜过滤）。A.1.3 设备和仪器a）离心机；b）氮吹仪；d）分析天平；e）高效液相色谱仪（紫外检测器）；A.1.4 色谱条件色谱柱：Kinetex C18(1504.6mm，5m)；流动相：A 相水（含 2%乙酸），B 相甲醇（含 2%乙酸）；流速：0.65ml/min；检测波长：280nm；温度：35；梯度洗脱程序：0-11min，5%-8%B；11-14min，8%-10%B；14-17min，10%-14%B；17-24min，14%-20%B；24-28min，20%-21%B；28-30min，21%-22%B；30-36min，22%-25%B；36-41min，25%-30%B；41-46min，30%-33%B；46-55min，33%B；55-60min，33%-34%B；60-70min，34%-36%B；70-80min，36%-45%B；80-90min，45%-75%B；定量方法：外标法（峰面积）；A.1.5 步骤A.1.5.1 配置标准品溶液称取花旗松素和丁香酸甲酯各 2mg 于 50ml 的容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀备用。A.1.5.2 建立标准品标准曲线将 A.1.5.1 中配制好的标准品溶液用 0.22m 滤膜过滤，在上述色谱条件下每个标准品溶液分别以 1、5、10、15、20、25l 的体积上样分析。最终以标准品的进样量 x（纳克，ng）对色谱图上的峰面积 y进行线性回归分析，得到每个标准品的标准曲线。A.1.5.3 蜂蜜样品的前处理DBS 63/0006-20222从冰箱中取出蜂蜜样品，如是未结晶状则直接称重；如是结晶状，将样品至于 35水浴 20 分钟，充分搅拌后称重。把 200ml 烧杯放在天平上，去皮，称取 20 g0.1g 的蜂蜜样品；加入 80ml 超纯水，充分搅拌，放入超声波清洗器中，25连续超声 10 分钟。从超声中取出，用氨水(5:95 V/V)调节 pH 67。将蜂蜜样品分装到四个离心管中配平，5000g 离心 10 分钟或 4000g 离心 15 分钟；离心后的样品及时从离心管中取出。固相萃取柱的活化：将 Strata-X-A 固相萃取柱固定在萃取架上，用移液枪移取 3ml 甲醇缓慢加入萃取柱中。待萃取柱活化完毕后，及时加入 1ml 水（pH67）进行平衡。待萃取柱平衡结束，将离心后的蜂蜜样品过萃取柱，待蜂蜜样品全部过完萃取柱，用移液枪移取 1ml 超纯水加入萃取柱中进行清洗。待清洗结束，用移液枪移取 2ml 甲酸甲醇溶液（5:95 V/V）洗脱萃取柱上成分，并且用试管收集洗脱液。将洗脱液置于氮吹仪上，氮吹至溶剂全部挥发。用 2ml 甲酸甲醇（色谱纯）溶液（2:98 V/V）复溶氮吹后的多酚类成分，用移液枪反复吹打，置于超声清洗器中，25连续超声 2 分钟。复溶液过 0.22m滤膜过滤至上样瓶中准备 HPLC 检测。A.1.5.4 测定在上述色谱条件下，取 20L 样品溶液进行分析，外标法计算样品中的花旗松素和丁香酸甲酯的含量。A.1.6 计算见式（1）：C=5M（1）式中：C每 100g 样品中各种多酚的含量，单位为毫克（mg）；M20L 样品溶液中目标化合物含量，单位为微克（g）；A.2 枸杞蜜的高效液相色谱图A.2.1 原理枸杞蜜中常见的植物化学成分是花旗松素、反反式脱落酸和顺反式脱落酸，在紫外波长 280nm 下均有吸收，在反相 C18柱上的保留时间不同。出峰的顺序是花旗松素反反式脱落酸顺反式脱落酸。花旗松素和顺反式脱落酸是枸杞蜜的特征色谱峰。A.2.2 试剂甲醇（色谱纯）、乙酸（色谱纯）、氨水（分析纯）、甲酸（分析纯）、蒸馏水（重蒸，并经 0.45m滤膜过滤）。A.2.3 设备和仪器a）离心机；b）氮吹仪；d）分析天平；e）高效液相色谱仪（紫外检测器）；A.2.4 步骤A.2.4.1 蜂蜜样品的前处理从冰箱中取出蜂蜜样品，如是未结晶状则直接称重；如是结晶状，将样品至于 35水浴 20 分钟，充分搅拌后称重。把 200ml 烧杯放在天平上，去皮，称取 20 g0.1g 的蜂蜜样品；加入 80ml 超纯水，充分搅拌，放入超声波清洗器中，25连续超声 10 分钟。从超声中取出，用氨水(5:95 V/V)调节 pH 67。DBS 63/0006-20223将蜂蜜样品分装到四个离心管中配平，5000g 离心 10 分钟或 4000g 离心 15 分钟；离心后的样品及时从离心管中取出。固相萃取柱的活化：将 Strata-X-A 固相萃取柱固定在萃取架上，用移液枪移取 3ml 甲醇缓慢加入萃取柱中。待萃取柱活化完毕后，及时加入 1ml 水（pH67）进行平衡。待萃取柱平衡结束，将离心后的蜂蜜样品过萃取柱，待蜂蜜样品全部过完萃取柱，用移液枪移取 1ml 超纯水加入萃取柱中进行清洗。待清洗结束，用移液枪移取 2ml 甲酸甲醇溶液（5:95 V/V）洗脱萃取柱上成分，并且用试管收集洗脱液。将洗脱液置于氮吹仪上，氮吹至溶剂全部挥发。用 2ml 甲酸甲醇（色谱纯）溶液（2:98 V/V）复溶氮吹后的多酚类成分，用移液枪反复吹打，置于超声清洗器中，25连续超声 2 分钟。复溶液过0.22m 滤膜过滤至上样瓶中；准备 HPLC 检测。A.2.4.2 测定取 20L 样品溶液，按下述色谱条件进行分析：色谱柱：Kinetex C18(1504.6，5m)；流动相：A 相水（含 2%乙酸），B 相甲醇（含 2%乙酸）；流 速：0.65ml/min；检测波长：280nm；温 度：35；梯度洗脱程序：0-11min，9%-14%B；11-14min，14%-15%B；14-17min，15%B；17-24min，15%-16%B；24-28min，16%-17%B;28-30min，17%-22%B；30-38min，22%-25%B；38-41min，25%-30%B；41-46m