DB44T 2388-2022 水稻品种（系）稻瘟病室内和田间抗性鉴定与评价技术规范.pdf

ICS 65.020 CCS B 15 44 广东省地方标准 DB44/T 23882022 水稻品种（系）稻瘟病室内和田间抗性鉴定与评价技术规范 Technical Specification for Identification and Evaluation of Rice Blast Resistance in Greenhouse and Field 2022-08-15 发布 2022-11-15 实施 广东省市场监督管理局 发 布 DB44/T 23882022 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 3.1 病原物（稻瘟病菌）.1 3.2 寄主植物（水稻）.1 3.3 鉴定方法.2 4 鉴定方法.2 4.1 室内苗期叶瘟抗性鉴定.2 4.2 田间成株期穗瘟抗性鉴定.4 5 抗性综合评价.5 5.1 抗性综合评价依据.5 5.2 抗性综合评价标准.6 5.3 抗性鉴定数据有效性判别.6 6 鉴定材料的处理.6 6.1 室内人工接种材料的处理.6 6.2 田间自然诱发病圃材料的处理.6 7 汇总报告格式.6 7.1 试验概况.6 7.2 结果与分析.7 附录 A（规范性）稻瘟病田间病圃水稻材料插植布局.8 附录 B（规范性）水稻品种（系）稻瘟病抗性鉴定与评价数据汇总格式.9 附录 C（资料性）稻瘟病病情调查记录与田间病圃管理记录.10 参考文献.12 DB44/T 23882022 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由广东省农业农村厅提出并组织实施。本文件由广东省种植业标准化技术委员会（GD/TC 48）归口。本文件起草单位：广东省农业科学院植物保护研究所。本文件主要起草人：杨健源、汪文娟、朱小源、苏菁、李传瑛、韦小燕、陈凯玲、封金琦、陈炳。DB44/T 23882022 1 水稻品种（系）稻瘟病室内和田间抗性鉴定与评价技术规范 1 范围 本文件规定了水稻品种（系）稻瘟病室内和田间抗性鉴定与评价方法的术语和定义、鉴定方法、内容及时期、调查方法、抗性综合评价和汇总报告格式。本文件适用于我省省级水稻品种稻瘟病抗病性鉴定与评价试验，包括在属于华南早籼类型区、华南感光晚籼类型区的水稻品种同一适宜生态区进行的区试、绿色通道、联合体及引种等试验。水稻品种（系）的抗病性比较、主导品种的抗病性监测及抗病资源的筛选等试验可参照执行。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 2646-2014 水稻品种试验稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 病原物（稻瘟病菌）3.1.1 稻瘟病 rice blast 由无性型真菌稻梨孢（无性代：Pyricularia oryzae；有性代：Magnaporthe oryzae）所致的水稻病害。主要包括叶瘟、穗瘟。3.1.1.1 叶瘟 leaf blast 水稻三叶期后至分蘖盛期，稻苗叶片上发生的稻瘟病，病菌侵染叶片引起圆形、椭圆形或梭型病斑，严重时使植株枯死。3.1.1.2 穗瘟 panicle blast 水稻抽穗后至成熟期，穗颈、枝梗和谷粒发生的稻瘟病，病菌侵染稻穗致白穗，或增加空秕率，降低千粒重。3.1.2 接种体 inoculum 接种体指用于人工接种鉴定用的稻瘟病菌的分生孢子悬浮液。接种体适用范围为根据7个中国鉴别品种划分的ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG群小种。来源：参见全国稻瘟病生理小种联合试验组论文 3.2 寄主植物（水稻）3.2.1 DB44/T 23882022 2 试验品种（系）testing variety（line）抗病性鉴定参试的水稻品种（系）。3.2.2 感病对照品种 susceptible control variety 抗病性鉴定时选定的当地相应熟期感病品种。3.2.3 诱发品种 disease spreader variety 在试验品种（系）和感病对照品种四周种植的用于诱发稻瘟病发生的当地相应熟期高感品种。3.2.4 鉴别品种 differential variety 中国稻瘟病联合试验组筛选出的7个品种：Tetep、珍龙13、四丰43、东农363、关东51、合江18、和丽江新团黑谷。用于鉴别与监测稻瘟病菌小种群及其变化的一组水稻品种。来源：参见全国稻瘟病生理小种联合试验组论文 3.3 鉴定方法 3.3.1 抗性鉴定 resistance identification 在水稻生长发育阶段，通过室内人工接种、田间病圃自然诱发等方法感染稻瘟病菌，以确定水稻试验品种（系）对稻瘟病菌的抗感反应类型。3.3.1.1 室内人工接种 greenhouse artificial inoculation 通过人工控制适宜的发病条件，在温室内用接种体进行水稻苗期叶片人工喷雾接种。可不受田间条件和季节的限制，常年进行试验。3.3.1.2 田间自然诱发病圃 natural blast nursery 在稻瘟病常发、重发区设立的通过田间自然诱发方式进行水稻苗期和成株期稻瘟病抗病性评价的鉴定圃。与病圃当地水稻生产同期进行。鉴定结果能较准确反映当地当时的实际情况，但对气候、季节依赖性强。3.3.2 鉴定年限 years of evaluation 根据试验目的应达到的最低生产周期要求。3.3.2.1 省级品种（系）试验年限 years of provincial testing variety（line）应为与区域试验同步进行的两个正季生产周期。3.3.2.2 其它品种（系）试验年限 years of non-provincial testing variety（line）不做具体要求，可根据抗性鉴定目的参照进行试验。4 鉴定方法 4.1 室内苗期叶瘟抗性鉴定 4.1.1 采用室内人工接种方法对参试材料进行水稻苗期叶瘟接种，创造并保持适宜的发病条件待其充分发病，然后据其对接种菌株的抗性频率确定品种（系）的抗性强弱，简称抗谱鉴定。DB44/T 23882022 3 4.1.1.1 对收集的稻瘟病菌单孢进行小种鉴定及归类。4.1.1.2 根据广东稻作区稻瘟病菌小种发生比例，选用不少于 60 个有代表性的单孢分离菌株作为接种体进行试验。4.1.1.3 年度间接种的菌株与小种比例，应根据田间小种群体变化情况作动态调整。4.1.1.4 每个菌株应按均一孢子量进行单独接种。4.1.2 接种体制备 4.1.2.1 将单孢分离菌株在酵母淀粉培养基（酵母浸膏 2 g，可溶性淀粉 10 g，琼脂 15 g20 g，蒸馏水 1000 ml）试管里培养 7 d10 d，挑取直径为 2 mm 的菌丝块，转接到玉米粒培养基上扩大培养10 d13 d，待菌丝长满玉米粒，用无菌水洗去玉米粒表面的菌丝，将玉米粒薄铺于消毒的搪瓷盘中，上面覆盖 1 层湿纱布，在日光灯下光照培养 3 d4 d。用无菌水洗下附在玉米粒上的孢子，用 2 层塑料细纱网隔去玉米残渣，即为分生孢子悬浮液接种体。以上菌株培养及产孢均在 26 28 下进行。4.1.2.2 在光学显微镜下观察产孢情况，用血球计数板测定孢子浓度，用无菌水将孢子悬浮液浓度调节至约 2105 个孢子/ml，作为苗期喷雾接种的接种体。4.1.2.3 接种体应现配现用。4.1.3 水稻苗准备 4.1.3.1 参试材料经浸种、催芽后，每个材料选取发芽良好的种子 15 粒20 粒，按顺序分别穴播于盛有肥沃土壤的育苗盆内，穴间距为 3 cm 左右；浇水盖土，保证正常出苗生长。幼苗应生长健壮、一致。接种前 3 d5 d 酌施氮肥，保持稻苗嫩绿以利于发病。4.1.3.2 试验设 2 次重复，均为随机排列。每盆中分别设抗感对照各 1 个，通常感病对照品种是广陆矮 4 号，抗病对照品种是三黄占 2 号。4.1.3.3 同时播种相应接种菌株数量的鉴别品种一套，供每个接种菌株同时接种，作为本次接种菌株小种号的验证试验。4.1.4 稻苗喷雾接种 4.1.4.1 用单菌株接种。4.1.4.2 参试材料生长至 3 叶4 叶期时移至 25 28 温室 0.5 d 后进行接菌。按 0.8%的体积比浓度在接种体中加入吐温 20（Tween20），混匀后进行喷雾接种。用高压弥雾（压力：2.0 Pa，雾滴的体积中值直径 50 m100 m）喷雾器将接种体喷洒于稻苗上，接种量以所有叶片上布满孢子液为限。4.1.4.3 接种后置于 25 28 的温室内，保持相对湿度 95%以上遮光保湿 24 h；然后去除遮光条件，每天定时喷雾清水 3 次4 次保湿，让稻苗充分发病。4.1.5 叶瘟病情调查 4.1.5.1 调查时间、部位 4.1.5.1.1 调查时间。接种后 7 d10 d。当感病对照品种的发病程度大于等于 7 级时进行调查，共调查 1 次。4.1.5.1.2 调查部位。参试材料水稻叶片。4.1.5.2 调查方法 4.1.5.2.1 参试材料以发病最重的稻株的叶片作为其抗性级别。4.1.5.2.2 每个参试材料、每个菌株记录 1 个抗性级别数值。DB44/T 23882022 4 叶瘟病情调查分级标准见表 1。调查数据记载参见附录 C 表 C.1。来源：NY/T 2646-2014 水稻品种试验稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程的内容，有修改 表1 水稻叶瘟病情调查分级标准 叶瘟病级 病情 抗性类型 0 无任何症状 抗病 1 针头状大小褐点 2 褐点较大，直径小于1 mm 3 圆形至椭圆形的灰色病斑，边缘褐色，直径1 mm2 mm 4 典型纺锤形病斑，直径大于2 mm，通常局限在两叶脉之间，为害面积小于叶面积的2.0%感病 5 典型纺锤形病斑，为害面积占叶面积的2.1%10.0%6 典型纺锤形病斑，为害面积占叶面积的10.1%25.0%7 典型纺锤形病斑，为害面积占叶面积的25.1%50.0%8 典型纺锤形病斑，为害面积占叶面积的50.1%75.0%9 典型纺锤形病斑，为害面积大于叶面积的75.0%注：叶片上无叶瘟，但有叶枕瘟发生的记作5级。4.1.6 室内叶瘟抗谱（抗性频率）计算 4.1.6.1 抗谱（抗性频率）按式（1）计算。抗谱（抗性频率）（%）=抗病菌株数 接种总菌株数 100 (1)4.1.6.2 总抗谱。全部接种菌株的抗性频率。4.1.6.3 群抗谱。将接种菌株按鉴别品种划分的小种群进行分组（即 ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG），以每个小种群为计算单位，分别计算各群的抗性频率。4.2 田间成株期穗瘟抗性鉴定 采用田间病圃自然诱发方法对参试材料进行稻瘟病抗性鉴定试验。主要进行水稻黄熟期穗瘟抗性鉴定试验，同时观测分蘖期叶瘟抗性情况。4.2.1 病圃选择 4.2.1.1 根据当地历年的发病情况，病圃宜设置在雾露重、寡日照、昼夜温差大、结露时间长、土壤肥力中等、排灌方便的田块。田块选好后，应尽量保全其原生态环境，避免小环境的人为改变。4.2.1.2 病圃应在小种多样性丰富、代表性好、年度间鉴定结果稳定可靠、可持续开展试验的不同水稻生态区域进行多点设置。宜在省内的粤北、中北、中南和西南稻作区进行合理设置。4.2.1.3 若条件允许，病圃宜安装适当的喷水雾设施以增加相对湿度利于发病；宜安装小型气象自动记录仪。4.2.2 病圃参试材料插植 4.2.2.1 参试材料经浸种、催芽后，按照常规方法进行育秧。约 6 片7 片叶时进行移栽。4.2.2.2 本田每个参试材料栽 5 行，每行 6 穴，每穴 2 棵4 棵基本苗，株行距为 16.6 cm 20.0 cm或按当地生产实际情况进行设置。4.2.2.3 每幅参试材料四周种植 1 行诱发品种，使整个病圃菌源量分布均匀，让每个参试材料都与诱发品种相邻，参见附录 A 图 A.1。诱发品种要注意早、迟熟品种的搭配，满足不同熟期鉴定