DB41T 2391-2023 小麦抗赤霉病评价技术规范.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 15 41 河南省地方标准 DB41/T 23912023 小麦抗赤霉病评价技术规范 2023-03-07 发布 2023-06-06 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB41/T 23912023 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 抗性鉴定圃设置.2 5 病原物接种体.2 6 接种方法.2 7 病情调查.2 8 抗性评价标准.3 9 抗性评价.4 10 重复鉴定.4 11 鉴定记载表格.4 附录 A（资料性）小麦赤霉病病原物.5 附录 B（资料性）小麦赤霉病抗性鉴定原始记录及结果鉴定表.6 DB41/T 23912023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由河南省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：河南省农业科学院植物保护研究所、河南省植物保护检疫站。本文件主要起草人：宋玉立、李好海、徐飞、张国彦、杨共强、李铁桩、苏东、李金秀、樊骅、王俊美、冯超红、韩景红、胡玉红、路敏、朱晓红。DB41/T 23912023 1 小麦抗赤霉病评价技术规范 1 范围 本文件规定了小麦抗赤霉病接种体制备、接种方法、病害调查及抗性评价的技术规范。本文件适用于普通小麦、野生小麦和小麦近缘种等。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.111 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 NY/T 1443.4 小麦抗病虫性评价技术规范 第4部分：小麦抗赤霉病评价技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 小麦赤霉病 由禾谷镰孢（Fusarium graminearum Schwabe有性世代为 Gibberella zeae（Schw.）Petch）等镰孢属真菌侵染小麦穗部，引起小麦穗枯，产生红色霉层，同时在籽粒中可产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和玉米赤霉烯酮（ZEN）等多种真菌毒素，造成小麦减产和品质下降的小麦病害。3.2 抗侵染 寄主植物避免、终止或阻滞病原物侵入，减轻发病和损失程度的可遗传特性。3.3 抗扩展 寄主植物阻滞病原物扩展，减轻发病和损失程度的可遗传特性。3.4 抗毒素积累 病原物侵入后寄主植物限制病原物毒素分泌或降解毒素，减少组织中毒素含量的可遗传特性。3.5 严重度 发病植物单元上发病面积或体积占该单元总面积或总体积的百分率，亦可用分级法表示，即将发病的严重程度由轻到重划分出几个级别，分别用一些代表值表示，说明病害发生的严重程度。3.6 病情指数 综合衡量发病率和严重度的病情评价指标。计算公式如下（1）：DB41/T 23912023 2 niiniiiSXSXDI0max0100)(/)(1)式中：DI 病情指数；i 病级数（0n）；Xi i级的单元数；Si i级严重度的代表值；Smax 严重度的最高级值。4 抗性鉴定圃设置 鉴定圃选址 4.1 鉴定圃应设置在小麦赤霉病适发区，选择具备良好的自然发病环境和灌溉条件、地势平坦、地力均匀的地块。鉴定圃不施用任何杀菌剂。鉴定对照品种 4.2 高抗对照品种为宁麦13、中抗对照品种为郑麦9023、中感对照品种为西农979、高感对照品种为矮抗58。种植要求 4.3 种植管理同大田生产。每亩播量为10 kg12.5 kg。鉴定材料顺序排列，重复2次，每50100份鉴定材料设1组高抗、中抗、中感和高感对照品种。鉴定小区行长100 cm150 cm，行距20 cm。每份鉴定材料种植2行。5 病原物接种体 经形态学和分子生物学鉴定为禾谷镰孢（见附录A中A.1），进行致病力测定后，选择强致病力菌株。接种体的制备方法见附录A中A.2。6 接种方法 穗部喷雾接种：于小麦扬花期，采用禾谷镰孢分生孢子悬浮液（浓度为每毫升5104个）喷雾接种，1 m2喷雾50 mL。选取30穗进行保湿，10穗为1组，分别套上透明塑料袋保湿2 d。接种宜选择傍晚进行。单花滴注接种：于小麦扬花期剪去麦穗中部小穗的内外颖壳顶部少许，滴入浓度为每毫升5105个的禾谷镰孢分生孢子悬浮液20L，每个材料接种30穗，每穗接种1个小花，10穗为1组，分别套上透明塑料袋保湿2 d。接种后若遇干旱天气，应及时进行田间灌溉，以满足病害发生所需的条件。7 病情调查 调查时间 7.1 DB41/T 23912023 3 乳熟期调查1次病情，一般为扬花后21 d25 d。调查方法及项目 7.2 调查接种麦穗的严重度，按照NY/T 1443.4计算平均严重度、发病率和病情指数。严重度分级及其对应的症状描述见表1。表1 小麦赤霉病严重度分级及其症状描述 严重度分级 症状描述 0 麦穗无病 1 发病小穗占总小穗数25.0%2 25.0%发病小穗占总小穗数50.0%3 50.0%发病小穗占总小穗数75.0%4 发病小穗占总小穗数75.0%8 抗性评价标准 喷雾接种条件下的抗性评价标准 8.1 8.1.1 喷雾接种条件下的抗性评价 当鉴定圃高感对照品种病穗率达到50%以上，该批次抗赤霉病鉴定视为有效。依据鉴定材料发病程度（病情指数）确定其对赤霉病的抗性水平（见表2）。表2 喷雾接种条件下小麦赤霉病抗性评价标准 病情指数 抗性评价 DI=0 免疫 Immune(I)0DIDICK-HR 高抗 Highly Resistant(HR)DICK-HRDIDICK-MR 中抗 Moderately resistant(MR)DICK-MRDIDICK-MS 中感 Moderately susceptible(MS)DIDICK-MS 高感 Highly susceptible(HS)注：DI：病情指数；DICK-HR：高抗对照宁麦13病情指数；DICK-MR：中抗对照郑麦9023病情指数；DICK-MS：中感对照西农979病情指数。8.1.2 喷雾接种条件下的抗毒素积累评价 收获期将各个品种的麦穗分别装入网袋10穗一组共3组，分别脱粒，进行DON毒素含量测定。DON毒素含量测定按照GB 5009.111。按照表3进行抗毒素积累评价。表3 喷雾接种条件下小麦抗毒素积累评价标准 DON毒素含量(mg/kg)抗性评价 DON1 高抗 Highly Resistant(HR)1DON10 中抗 Moderately resistant(MR)10DON20 中感 Moderately susceptible(MS)DON20 高感 Highly susceptible(HS)DB41/T 23912023 4 单花滴注接种条件下的抗性评价标准 8.2 8.2.1 单花滴注接种条件下的抗性评价 当高感对照品种平均严重度达到3级以上时，该批次材料抗赤霉病鉴定视为有效。依据鉴定材料的病害发生平均严重度确定其对赤霉病的抗性水平，划分标准见表4。表4 单花滴注接种条件下小麦赤霉病抗性评价标准 平均严重度 抗性评价 平均严重度=0 免疫 Immune(I)平均严重度平均严重度CK-HR 高抗 Highly Resistant(HR)平均严重度CK-HR平均严重度平均严重度CK-MR 中抗 Moderately resistant(MR)平均严重度CK-MR平均严重度平均严重度CK-MS 中感 Moderately susceptible(MS)平均严重度平均严重度CK-MS 高感 Highly susceptible(HS)注：平均严重度CK-HR：高抗对照宁麦13平均严重度；平均严重度CK-MR：中抗对照郑麦9023平均严重度；平均严重 度CK-MS：中感对照西农979平均严重度 8.2.2 单花滴注接种条件下的抗毒素积累评价 收获期将各个品种的麦穗分别装入网袋10穗一组共3组，分别脱粒，进行DON毒素含量测定。DON毒素含量测定按照GB 5009.111。依据表5进行抗毒素积累评价。表5 单花滴注接种条件下小麦抗毒素积累评价标准 DON毒素含量(ppm)抗性评价 DON1 高抗 Highly Resistant(HR)1DON5 中抗 Moderately resistant(MR)5DON10 中感 Moderately susceptible(MS)DON10 高感 Highly susceptible(HS)9 抗性评价 应选择一种或多种方法进行抗性评价。若用两种接种方法综合确定抗性水平时，通常以最高级别（病情指数或平均严重度）为准。10 重复鉴定 鉴定中表现为高抗、中抗和中感的材料，次年重复鉴定。当两年抗性鉴定结果不一致时，以记载的最高病情级别（病情指数或平均严重度）为准。11 鉴定记载表格 小麦抗赤霉病鉴定原始记录及结果记载表格见附录B。DB41/T 23912023 5 附录A （资料性）小麦赤霉病病原物 A.1 接种菌株的分离、鉴定和选择 从发病麦穗上，切取病组织（颖、籽粒或穗轴等），用75%的乙醇表面消毒3 min5 min后，于马铃薯蔗糖琼脂（PDA）平板上进行培养，分离物经形态学和分子鉴定后，通过分离物纯化及致病性测定，筛选强致病力菌株，冷藏保存备用。形态学鉴定：无性态为禾谷镰孢 Fusarium graminearum Schwabe，属半知菌类镰孢属（Fusarium）真菌。其大型分生孢子镰刀形，有隔膜37个，顶端钝圆，基部足细胞明显，单个孢子无色，聚集在一起呈粉红色黏稠状。小型孢子很少产生。有性态为玉蜀黍赤霉Gibberella zeae(Schiwein)Petch，属子囊菌门（Ascomycotina）、核菌纲（Pyrenomycetes）、肉座菌目（Hypocreales）、肉座菌科（Hypocreaceae），赤霉属（Gibberella）真菌。子囊壳散生或聚生于寄主组织表面，略包于子座中，梨形，有孔口，顶部呈疣状突起，紫红或紫蓝至紫黑色。子囊无色，棍棒状，大小70.0 m74.2 m8.9 m9.2 m，内含8个子囊孢子。子囊孢子无色，纺锤形，两端钝圆，多为3个隔膜，19.6 m22.4 m3.6 m4.6 m。分子生物学鉴定：收集菌丝并提取DNA，然后用禾谷镰孢特异性引物Fg16F/R（Fg16F:5-CTCCGGATATGTTGCGTCAA-3，Fg16R:5-GGTAGGTATCCGACATGGCAA-3）进行扩增，条带大小为400 bp500 bp；或用EF-1（EF1:5-ATGGGTAAGGA(A/G)GACAAGAC-3，EF2:5-GGA(G/A)GTACCAGT(G/C)ATCATGTT-3）扩增测序，序列比对参照GenBank登录号:AF212455(禾谷镰孢菌株NRRL5883)。推荐使用保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心的5个代表性强致病力菌株（表A.1）。表A.1 标准菌株（保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心）菌株编号 来源 名称 保存编号 14AY1-2 河南省安阳市 禾谷镰孢 CGMCC3.20314 14KF3-8 河南省开封市 禾谷镰孢 CGMCC3.20318 14LY9-2-4 河南省洛阳市 禾谷镰孢 CGMCC3.20317 14YY1-3 河南省新乡市 禾谷镰孢 CGMCC3.20315 14ZK1-4 河南省周口市 禾谷镰孢 CGMCC3.20316 A.2 接种体的制备 分生孢子接种体制备：称取一定量的绿豆，按绿豆：水=6:100比例加入水，加热煮沸，换小火继续加热10 min，分装至三角瓶中，在121 下灭菌30 min，冷却后即制成绿豆培养液。将PDA培养基平板活化培养的病菌接种于经高压灭菌的绿豆培养液中，在25 下振荡培养（150 r/min），4 d5 d后进行镜检，确认大量产生分生孢子后，配制接种悬浮液。悬浮液中分生孢子浓度调至每毫升5105 个和5104 个，分别用于单花滴注接种和