DB61T 1620-2022 反刍动物全混合日粮中瘤胃降解淀粉--尼龙袋法的测定.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 20 DB61 陕西省地方标准 DB 61/T 16202022 反刍动物全混合日粮中瘤胃降解淀粉（RDS）的测定 尼龙袋法 Determination of ruminal degradable starch(RDS)for ruminant total mixed rations nylon bag method 2022-11-07 发布 2022-12-07 实施陕西省市场监督管理局 发 布 DB61/T 16202022 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 原理.1 5 试验条件.2 6 试剂或材料.2 7 仪器设备.2 8 采样和试样制备.2 9 分析步骤.3 10 试验数据处理.4 11 试验验证.5 附录 A（资料性）实验室间试验结果.6 DB61/T 16202022 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规则起草。本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：西北农林科技大学、杨凌现代农业产业标准化推广服务中心。本文件主要起草人：曹阳春、姚军虎、雷新建、王腊梅、蔡传江、徐秀容、龚月生、王建国、杨静、张星、张美龙。本文件由西北农林科技大学负责解释。本文件首次发布。联系信息如下：单位：西北农林科技大学 电话：029-87092102 地址：陕西省杨凌农业高新技术产业示范区西农路22号 邮编：712100 DB61/T 16202022 1 反刍动物全混合日粮中瘤胃降解淀粉（RDS）的测定 尼龙袋法 1 范围 本文件确立了反刍动物全混合日粮中瘤胃降解淀粉测定的原理、试验条件、试剂或材料、仪器设备、采样和试样制备、分析步骤、试验数据处理等阶段操作指引。本文件适用于反刍动物全混合日粮中瘤胃降解淀粉尼龙袋法的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20194 动物饲料中淀粉含量的测定 旋光法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 35823 实验动物 动物实验通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 瘤胃可降解淀粉 ruminal degradable starch，RDS 在瘤胃中可被降解的淀粉，是衡量不同饲料来源或不同粒度日粮淀粉含量及组成的有效指标。3.2 瘤胃外流速率 k 单位时间内从瘤胃中流出的固体或液体体积占瘤胃内容物体积的百分比。4 原理 将粉碎到一定粒度的待测全混合日粮装入一定规格的尼龙袋，经反刍动物永久性瘤胃瘘管投入到瘤胃中。按照设定的瘤胃停留时间，取出尼龙袋，测定日粮淀粉在0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h、30 h、36 h、48 h的消失率，拟合动态降解方程，结合瘤胃外流速率，计算淀粉有效降解率。DB61/T 16202022 2 5 试验条件 5.1 试验动物 试验动物按照GB/T 35823的规定执行。5.2 动物 选择安装永久性瘤胃瘘管30 d以上，已经恢复正常采食量的成年健康反刍动物进行试验。试验前两周未使用抗生素等药物治疗。5.3 饲养管理 试验期间每日2次等量饲喂全混合日粮，自由饮水，保持圈舍通风干燥，活动场整洁。如采用拉丁方试验设计，则每期试验应间隔7 d。6 试剂或材料 6.1 本文件所涉及化学试剂为分析纯.6.2 所用水应符合 GB/T 6682 中的二级水。6.3 95%乙醇（C2H5OH）。6.4 甲基红。6.5 36.5%盐酸（HCl）。6.6 Carrez 澄清溶液，按 GB/T 20194 制备。6.7 蔗糖（C12H22O11）。6.8 尼龙袋：羊（长宽为 60 mm100 mm）或牛（长宽为 80 mm120 mm），网眼孔径均为 35 m50 m。7 仪器设备 7.1 植物样品粉碎机。7.2 电子天平：分度值 0.001 g 和 0.0001 g。7.3 电热恒温箱（温度 65）。7.4 高温电阻炉(温度：200 900）。7.5 消煮器：冷凝球 600 mL 高型烧杯或冷凝管三角烧瓶。7.6 抽滤装置：抽滤瓶和真空泵(压强：1105 Pa）。7.7 pH 计：准确至 0.1 pH 单位。7.8 旋光仪：准确至 0.01，200 mm 长旋光管。8 采样和试样制备 8.1 样品采集 鲜样采集按照GB/T 14699.1的规定执行。DB61/T 16202022 3 8.2 试样制备 8.2.1 试样采集 试样采集按照GB/T 20195的规定执行。8.2.2 全混合日粮试样 采集鲜样500 g，65 烘干48 h，粉碎后全部通过2.5 mm分析筛,用四分法缩分至200 g左右备用。8.2.3 尼龙袋测定试样 称取3 g5 g全混合日粮试样装入尼龙袋中。8.2.4 瘤胃降解残渣试样 将从尼龙袋取出后的样品置于65 烘箱中烘干48 h，备用。9 分析步骤 9.1 干物质测定 采集500 g左右鲜样。水分测定按GB/T 6435执行，根据水分含量计算干物质含量。9.2 淀粉含量测定 按照GB/T 20194的规定执行。9.3 尼龙袋法测定瘤胃降解率 9.3.1 尼龙袋固定 对尼龙袋进行编号，用涤纶线双线将尼龙袋固定在直径为0.5 cm0.8 cm，长约12 cm（羊）或50 cm（牛）的半软塑料管上。晨饲后1 h将尼龙袋放入安装有永久性瘤胃瘘管的动物瘤胃腹囊处，另一端固定于瘘管塞上，尼龙袋应始终浸于瘤胃食糜中。9.3.2 尼龙袋放置 将半软塑料管放置于试验动物瘤胃内,开始记录放置后尼龙袋在瘤胃内的停留时间。每个培养时间至少设置2个平行袋及1个空白袋。9.3.3 尼龙袋取出 根据投放尼龙袋后在瘤胃内停留时间,按照试验设计的时间点取出尼龙袋,直至所有尼龙袋全部取出为止。取出的尼龙袋立即在自来水（孔径25 mm，流速2.0 m/s）下冲洗至澄清，然后放入自来水中浸泡55 min，再在中等流速（1.0 m/s）的自来水下漂洗1 min；水洗后的尼龙袋（连同饲料样品残余物）置于65 烘箱中烘干48 h至恒重，备用。DB61/T 16202022 4 10 试验数据处理 10.1 淀粉含量的计算 按GB/T 20194计算。10.2 瘤胃降解淀粉（RDS）的计算 10.2.1 淀粉在不同时间的降解率 dp 计算见式（1）。%100=trtwwwdp.(1)式中：dp某时间点全混合日粮瘤胃淀粉降解率，（%）；Wt全混合日粮中淀粉含量，（g/kg）；Wr某时间点全混合日粮瘤胃降解残渣中淀粉含量，（g/kg）。10.2.2 淀粉降解参数 a、b、c 计算公式见（2）。()ctebadp+=1.(2)式中：dp某时间点全混合日粮瘤胃淀粉降解率，（%）；a全混合日粮中淀粉快速降解部分，（%）；b全混合日粮中淀粉慢速降解部分，（%）；cb部分的降解速率，（%/h）；t全混合日粮在瘤胃中停留时间，（h）。10.2.3 淀粉有效降解率 P 计算公式见（3）。kcbcaP+=.(3)式中：P全混合日粮淀粉有效降解率，（%）；a全混合日粮中淀粉快速降解部分，（%）；b全混合日粮中淀粉慢速降解部分，（%）；cb部分的降解速率，（%/h）；k全混合日粮瘤胃外流速率常数，(k=0.05%/h)。10.2.4 瘤胃降解淀粉 RDS 计算公式见（4）。10PwRDSt=.(4)式中：RDS瘤胃降解淀粉，（%）；Wt全混合日粮中淀粉含量，（g/kg）；P全混合日粮淀粉有效降解率，（%）。DB61/T 16202022 5 11 试验验证 11.1 试验验证内容 包括试验（或验证）精密度、重复性、再现性的分析和说明，试验报告等。11.2 精密度 见附录A。11.3 重复性 用相同的方法，对同一试样，在同一实验室内，由同一操作人员用相同的设备，在短时间内得到的两个独立的试验结果误差不超过10%。11.4 再现性 用相同的方法，对同一试样，在不同的实验室内，由不同的操作人员，用不同的设备得到的两个独立的试验结果误差不超过10%。11.5 试验报告 试验报告应包括但不限于：鉴别样品所必需的信息；如果已知采样方法，应说明使用的采样方法；采用的测定方法；所有本标准未规定的、或认为是非强制性的、以及可能影响测定结果的全部细节；获得的测定结果，如果检查了重复性则提供两个测定结果。DB61/T 16202022 6 A A 附 录 A（资料性）实验室间试验结果 表A.1列出了试验的统计结果。表A.1 统计结果 样品 参数 1 2 3 4 5 全混合日粮中淀粉含量（Wt）/（g/kg）214 225 226 302 306 全混合日粮中淀粉快速降解部分（a）/（%）24.7 20.0 15.3 5.9 2.6 全混合日粮中淀粉慢速降解部分（b）/（%）73.4 75.2 77.7 91.3 96.2 b 部分的降解速率（c）/（%/h）5.9 10.5 18.3 2.8 1.2 全混合日粮淀粉有效降解率（P）/（%）61.1 67.8 73.7 62.3 72.1 全混合日粮中瘤胃降解淀粉（RDS）/（%）13.1 15.3 16.7 18.8 22.1 _