DB61T 1472.2-2021 灵芝生产技术规范 第2部分：菌种.pdf

DB61/T 1472.22021I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14符号和缩略语.25质量要求.26试验方法.47检验规则.58包装、运输、贮存.5附录 A（规范性）常用培养基及其配方.6附录 B（规范性）常用原种和栽培种培养基及其配方.7附录 C（规范性）栽培性状检验.8DB61/T 1472.22021II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。本文件灵芝生产技术规范分为五个部分：第1部分：产地环境第2部分：菌种第3部分：液体菌种生产技术第4部分：袋料栽培技术第5部分：段木栽培技术本文件为DB61/T 14722021的第2部分。本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：陕西省微生物研究所、陕西省园艺技术工作站、杨凌康宇生物科技有限公司、陕西国人菌业科技产业园有限公司、陕西崇德生物技术发展有限公司。本文件主要起草人：雷萍、张文隽、吴亚召、马婧嘉、王周平、渠敬峰、陈磊、张伟兵、贾静、王磊、陈惠、钱磊。本文件由陕西省微生物研究所负责解释。本文件首次发布。联系信息如下：单位：陕西省微生物研究所地址：西安市雁塔区西影路76号邮编：710043电话:029-82357027DB61/T 1472.220211灵芝生产技术规范 第 2 部分：菌种1范围本文件规定了食用灵芝菌种的术语和定义、符号和缩略语、质量要求、试验方法、检验规则及包装、运输、贮存。本文件适用于食用灵芝菌种生产、流通和使用。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 12728食用菌术语NY/T 528食用菌菌种生产技术规程NY/T 1742食用菌菌种通用技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1母种stock culture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物。也称一级种，试管种。来源：GB/T 12728-2006,2.5.73.2原种pre-cultur spawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。来源：GB/T 12728-2006,2.5.83.3栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。来源：GB/T 12728-2006,2.5.93.4拮抗现象antagonismDB61/T 1472.220212具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线行边缘的现象。来源：GB/T 12728-2006,2.3.213.5角变sector因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。来源：GB/T 12728-2006,2.5.173.6锁状联合clamp connection一种锁状桥接的菌丝结构，是异宗结合担子菌次生菌丝的双核菌丝体进行细胞分裂时产生的，常发生在菌丝顶端，开始时在细胞上产生突起，并向下弯曲，与上部细胞连接，形如锁状。来源：GB/T 12728-2006,2.2.53.7高温圈high-temperatured line食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。来源：GB/T 12728-2006,2.5.183.8种性characters of variety食用菌的品种特性是鉴别食用菌菌种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状。来源：GB/T 12728-2006,2.5.44符号和缩略语下列缩略语适用于本文件。4.1PDA马铃薯葡萄糖琼脂培养基4.2CPDA综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基5质量要求5.1母种5.1.1容器规格应符合NY/T 528-2010中4.7.1.1规定。DB61/T 1472.2202135.1.2感官要求母种感官要求应符合表1规定。表 1母种感官要求项目要求菌种外观菌丝体特征白色至黄色，后期变褐色或顶端菌丝有褐色线、浓密、短绒状培养物表面菌丝体均匀、平展、无角变、无高温圈、无子实体原基菌丝分泌物无菌落边缘整齐杂菌菌落无拮抗现象无斜面背面外观培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑气味有灵芝菌种特有的清香味，无异味5.1.3菌丝生长速度在PDA培养基上，在遮光、26 2 温度条件下，菌丝8 d12 d长满斜面培养基表面。5.1.4菌种的细菌、霉菌污染感官检验菌种有暗斑、异味等污染现象，检出不用。5.1.5栽培性状所供母种需经出芝试验确证农艺性状和商品性状等种性合格，符合NY/T 1742-2009中3.1.6规定。5.2原种和栽培种5.2.1容器规格应符合NY/T 528-2010中4.7.1.2和4.7.1.3规定。5.2.2感官要求原种和栽培种感官要求应符合表2规定。表 2原种和栽培种感官要求项目要求菌种外观菌丝体特征白色，浓密，短绒状培养物表面菌丝体均匀，平展，无角变，无高温圈培养基及菌丝体菌种紧贴瓶（袋）壁，无干缩培养物表面分泌物无杂菌菌落无虫（螨）体无拮抗现象无子实体原基无气味有灵芝菌种特有的清香味，无异味DB61/T 1472.2202145.2.3菌丝生长速度在适宜培养基上，在遮光、适温（26 2）条件下，原种30 d35 d菌丝长满容器，栽培种40 d45 d菌丝长满容器。5.3菌种的生物学指标母种、原种和栽培种的菌丝形态白色后变黄色、浓密、均匀（接种块部分除外），有锁状联合，无杂菌，无害虫。6试验方法6.1感官检验感官要求检验方法按表3逐项进行。表 3感官检验方法项目检验方法菌丝体特征肉眼观察菌丝分泌物、菌落边缘、虫（螨）体肉眼观察杂菌菌落肉眼观察，必要时用5放大镜观察菌种背面外观肉眼观察拮抗现象肉眼观察气味鼻嗅6.2细菌、霉菌检验6.2.1细菌检验将检验样本按无菌操作接入附录A营养肉汤培养液中，在温度25 28 振荡培养1 d2 d，观察培养液是否混浊，培养液混浊，为有细菌污染；培养液澄清，为无细菌污染。6.2.2霉菌检验将检验样本按无菌操作接种于PDA培养基上，在温度26 1培养3 d5 d，菌落出现灵芝菌以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。6.3菌丝生长速度6.3.1母种按附录A中配方任选其一配制，无菌操作接种，在温度26 2 条件下培养，记录长满斜面所需天数。6.3.2原种和栽培种按附录B中配方任选其一配制，无菌操作接种，在温度26 2 条件下培养，记录长满容器所需天数。6.4农艺性状DB61/T 1472.220215将被检母种制成原种和栽培种。按照附录B规定的配方任选其一，制作出芝菌袋45个。接种后平均分3组进行常规管理，按附录C格式做好记录，统计检验结果。同时将该母种的出发菌株设为对照，亦做同样处理。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种的任何一项时间较对照菌株推迟5 d以上（含5 d）者，为不合格；产量显著低于对照菌株者，为不合格；子实体外观形态与对照明显不同程度或畸形者，为不合格。6.5留样各级菌种都应留样备查，留样的数量应每个批号菌种3 支5支，于4 6 下贮存6个月。6.6菌种的微生物学指标检验方法6.6.1菌丝形态肉眼观察母种、原种和栽培种菌丝形态，粗壮、丰满、均匀（接种块部分除外）并且大部分有锁状联合为合格，否则不合格。6.6.2杂菌肉眼观察母种、原种和栽培种无杂菌污染为合格。7检验规则7.1组批与抽样7.1.1母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品。检验项目为本文件规定的所有质量要求。7.1.2母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的 5、2、1。但每批抽样数量不得少于 10 支（瓶、袋）；超过 100 支（瓶、袋）的，随机取样 100 支。7.2判定规则按质量要求进行检验。检验项目全部符合质量要求者，为合格菌种；其中任何一项不符合要求，均为不合格菌种。8包装、运输、贮存按照NY/T 1742的要求执行。DB61/T 1472.220216AA附录A（规范性）常用培养基及其配方A.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL。A.2CPDA培养基（综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁0.5 g，水1000 mL。A.3加富马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，蛋白胨5 g，琼脂20 g，VB110mg，水1000 mL。A.4马铃薯麸皮葡萄糖琼脂培养基马铃薯200 g（用浸出汁），麸皮50 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL。A.5营养肉汤培养液蛋白胨10 g，氯化钠5 g，牛肉膏5 g，水1000 mL，pH7.4。DB61/T 1472.220217BB附录B（规范性）常用原种和栽培种培养基及其配方B.1杂木屑棉籽壳培养基杂木屑40，棉籽壳40，麸皮18，石膏1，蔗糖1，料水比11.211.4。B.2木屑培养基杂木屑78，麸皮20，蔗糖1，石膏1，料水比11.211.4。B.3木屑培养基杂木屑78，麸皮13，玉米粉7，蔗糖1，石膏1，料水比11.211.4。B.4棉籽壳培养基棉籽壳88，麸皮10，石膏1，蔗糖1，料水比11.211.4。B.5木屑米糠培养基杂木屑70，米糠10，麸皮15，蔗糖1，尿素0.2，过磷酸钙2，石膏2，料水比11.211.4。DB61/T 1472.220218CC附录C（规范性）栽培性状检验项目C.1栽培性状检验项目见表C.1表 C.1栽培性状检验项目检验项目检验结果母种长满所需时间（d）原种长满所需时间（d）栽培种长满所需时间（d）菌种萌发所需时间（h）菌丝体长满培养基所需时间（d）出第一潮芝所需时间（d）第一潮芝产量（kg）总产（kg）平均单产（kg）生物学效率（）_