NYT 4194.2-2022 化学农药 鸟类急性经口毒性试验准则 第2 部分：经典剂量效应法.pdf

NY/T4194.2-2022头鸭的试验温度应为1527、相对湿度应为45%70%，但试验期间波动应尽可能小。受试鸟饲养和观察室内应通风良好，空气每小时至少交换10次。日本鹌鹑、山齿鹑和绿头鸭每日光照时间为8，其他鸟类可延长至10。应提供充足的饲料和水，并及时更换。可使用商品饲料和维生素，但应符合所用物种的营养需求。试验期间和给药前14d应避免药物治疗。饲料和水应定期测定重金属（如砷、镉、铅、汞、硒等)和持久性农药（如有机氯农药等）等污染物。5.3受试鸟准备每只受试鸟均应有单独标识。试验开始前应在试验条件下预养至少14d,预养期间死亡率5%的鸟类不应用于试验。5.4受试鸟数量5.4.1正式试验和限度试验中，处理组和对照组每组至少使用10只鸟，通常雌雄各半。当研究被试物的化学特异性和部位特异性时，可在完成常规试验的基础上额外开展试验并根据研究目的确定受试鸟的性别和年龄（例如，农药使用方法导致繁殖期雕鸟的风险不可接受，可考虑采用该生长阶段的雌鸟开展试验)。每个处理组（含对照组）应使用同样数量的受试鸟。5.4.2受试鸟应随机分配至各处理组和对照组。同一处理组（含对照组）的受试鸟宜按性别分两笼饲养。随机分配宜在给药前称重时进行，也可在驯养前进行。5.5给药5.5.1被试物置于胶囊中或溶解、分散于合适的载体后，经口灌喂至受试鸟嗦囊或腺胃；对于液体制剂，也可直接经口灌喂至受试鸟嗦囊或腺胃。当被试物可被水溶解或分散时，应首先考虑使用水作为载体，其次可考虑溶解或乳化于玉米油等食用油中，均不可行时再考虑其他载体。使用水以外的载体时，应了解载体的毒性，载体不应引起吐食。注：可用食用色素亮蓝(C八S号：3844-45-9)等与粪使颜色明显不同的无毒染料使饲料染色，以观察是否出现吐食现象。吐食可能与给药技术或被试物性质有关，减少给药体积、使用胶囊或更换载体可能消除或降低吐食频毕。特别是使用雀形日鸟类时，宜先进行预试验来评估受试鸟的吐食习性，如果仍然存在吐食现象应考虑更换另一种鸟类。受试鸟存在吐食现象时不能精确计算出ID,仅能得出被试物的ID大于引发吐食和死亡的最低剂址。5.5.2每只鸟的给药剂量应根据给药前24h内该鸟所测个体体重确定。给药体积应尽量小，不应超过1mL/100g体重，处理组和对照组的所有受试鸟的给药体积/体重比应相同。给药前一晚受试鸟应禁食12h15h,日本鹌鹑等较大的受试鸟宜整夜禁食，体重50g的受试鸟应禁食2h。5.6观察5.6.1给药后按以下要求确定观察频率和时间：a)给药后0h2h应持续观察受试鸟的中，症状及是否出现吐食；b)给药后2h1d应在光照期内至少等间隔观察3次中毒症状；c)给药后1d14d每日应至少观察1次中券症状；d)给药后14d仍能观察到中症状或死亡时，应延长观察时间至无中毒症状。5.6.2应观察记录每只受试鸟的吐食、中荷症状及缓解表现、异常行为、体重，受试鸟出现死亡时应记录死亡时间。5.6.3物理损伤等明显不是被试物导致的偶然死亡应在结果计算中排除。5.6.4应在给药前（确定给药剂量时）及给药后3d、7d和14d测定受试鸟的体重；给药后0d3d应每H测定食物消耗量，其后应测定3d7d和7d14d的食物消耗量。若延长观察时间，最后1次体重和食物消耗量应在试验结束时测定。建议给药前7d额外测定1次受试鸟体重以提供基线数据。5.6.5所有死亡受试鸟应进行大体解剖，试验结束时还应从处理组未死亡受试鸟中随机选取足够数量进行大体解剂。对照组未死亡受试鸟应至少随机选择3只进行大体解剂。处理组和对照组均未出现死亡和明显中毒症状时可不解剂。5.6.6试验期间，按附录A判断受试鸟状态，其有明显的疼痛或处于颜死状态时，经试验项目负贵人评估继续观察不能得出对试验有用的信息时，应实施安乐死并计入死亡数。NY/T4194.2-20226试验程序6.1预试验应开展预试验确定正式试验的给药剂量，当已知被试物的大致毒性时可不开展预试验。按正式试验的条件，用少量受试鸟以较大的间距设置3个5个处理组，建议设置为2g被试物/kg体重、20mg被试物/kg体重、200mg被试物/kg体重和2000mg被试物/kg体重，给药后观察并记录鸟类中毒症状和死亡情况。6.2正式试验正式试验应至少设置5个处理组和1个对照组。处理组应按一定的几何级数设置，以充分描述整个剂量效应曲线。至少应有3个处理组的受试鸟死亡率介于0%100%。给药后观察（见5.6）并记录受试鸟中毒症状和死亡情况。6.3限度试验对嵛性可能较低的被试物，宜开展限度试验。限度试验设置1个处理组和1个对照组。限度剂量为2000mg被试物/kg体重或按NY/T2882.3计算出的鸟类PED的10倍（取高值）。给药后观察（见5.6)并记录受试鸟中毒症状和死亡情况。若处理组受试鸟均未死亡，表明在95%置信水平下被试物的LDo限度剂量，试验可终止。7数据处理7.1环境条件应计算试验期间温度和湿度的平均值、标准偏差、相对标准偏差、最小值和最大值。7.2死亡数应以表格形式给出各处理组和对照组每次观察的累积死亡数。若同时使用了雌鸟和雄鸟，应分别提供。7.3体重按公式(1)计算每只受试鸟在2次称重期间的体重变化和试验期间的总体重变化。应计算出各处理组和对照组在各次称重期间及试验期间体重变化的平均值和标准偏差。若同时使用了雌性和雄性受试鸟，应分别提供。d-j=U防一w好()式中：d:-一第i和第j次称重期间的受试鸟体重变化的数值，单位为克(g)；w;一第j次称重时，受试鸟体重的数值，单位为克(g);w:一一第i次称重时，受试鸟体重的数值，单位为克(g)。7.4食物消耗量应计算各处理组和对照组受试鸟在各次观察期间和试验期间的平均食物消耗量，单位为克饲料每只鸟每天g饲料/（只d)。7.5中毒症状应以表格形式给出各处理组和对照组在每次观察时出现中毒症状的受试鸟数量和观察到的中毒症状，若同时使用了雌鸟和雄鸟，应分别提供。同时，记录存活受试鸟的中毒症状恢复和异常行为停止情况。7.6大体解剖应以表格形式给出各处理组死亡或存活受试鸟大体解剖的数量及观察到的症状，若同时使用了雌鸟和雄鸟，应分别提供。7.7死亡率试验结束时应计算处理组和对照组的累积死亡率。对照组出现死亡时，应计算校正死亡率。7.8剂量效应曲线、斜率和LDs0