DB42T 1918.1-2022 水稻品种抗病性鉴定 第1部分稻粒黑粉病抗性鉴定方法.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 22 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 1918.12022 水稻品种抗病性鉴定 第 1 部分：稻粒黑粉病抗性鉴定方法 Disease resistance identification of rice varieties Part 1:Identification of rice kernel smut resistance 2022-08-31 发布 2022-10-31 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 1918.12022 I 目次 前言.III 引言.V 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 鉴定方法的原理.1 5 仪器设备.1 6 试剂和培养基.2 7 稻粒黑粉病菌采样时间和地点.2 8 感病谷粒选择.2 9 冬孢子的培养.2 10 接种菌液的制备.2 11 稻粒黑粉病菌的人工接种.2 12 病情测定.3 13 稻粒黑粉病抗性评价分级.4 14 鉴定结果与记录档案的保存.4 15 接种和鉴定后材料的处理.4 附录 A（资料性）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）的配制方法.5 DB42/T 1918.12022 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是DB42/T 1918水稻品种抗病性鉴定的第1部分。DB42/T 1918已经发布了以下部分：第1部分：稻粒黑粉病抗性鉴定方法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业科学院粮食作物研究所提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：湖北省农业科学院粮食作物研究所、湖北省农业科学院植保土肥研究所、襄阳市农业科学院、宜昌市农业科学研究院。本文件主要起草人：殷得所、徐得泽、袁斌、李力、赵开荣、查中萍、董华林、郑兴飞、胡建林、王红波。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：；对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院粮食作物研究所，联系电话：027-87389991，电子邮箱。DB42/T 1918.12022 V 引言 水稻品种在全生育期过程中，可能会遭遇各类病害的侵袭，包括各种病毒病、细菌性病害和真菌性病害，给粮食生产带来产量和品质的多重威胁。使用抗性品种是防控水稻病害最经济有效的办法，但水稻品种大田病害发生受环境因素较大，抗病性的鉴定较为困难。编制科学、合理的水稻品种病害鉴定技术规程，对合理使用抗性品种，减少病害发生，保障粮食生产有重要意义。本文件拟由四个部分构成：第1部分：稻粒黑粉病抗性鉴定方法。目的在于规范稻粒黑粉病菌的人工接种鉴定方法，提供 科学准确的抗病性鉴定操作规程，促进抗病育种和抗病品种的推广应用；第2部分：稻瘟病抗性鉴定方法。目的在于规范稻瘟病菌的人工接种鉴定方法，提供科学准确 的抗病性鉴定操作规程，促进抗病育种和抗病品种的推广应用；第3部分：稻曲病抗性鉴定方法。目的在于规范稻曲病菌的人工接种鉴定方法，提供科学准确 的抗病性鉴定操作规程，促进抗病育种和抗病品种的推广应用；第4部分：水稻细条病抗性鉴定方法。目的在于规范水稻细条病菌的人工接种鉴定方法，提供 科学准确的抗病性鉴定操作规程，促进抗病育种和抗病品种的推广应用。DB42/T 1918.12022 1 水稻品种抗病性鉴定 第 1 部分：稻粒黑粉病抗性鉴定方法 1 范围 本文件规定了稻粒黑粉病抗性鉴定方法的原理、仪器设备、试剂和培养基，并规定了稻粒黑粉病菌采样时间和地点、感病谷粒选择、冬孢子的培养、接种菌液的制备、稻粒黑粉病菌的人工接种、病情测定、稻粒黑粉病抗性评价分级、鉴定结果与记录档案的保存、接种和鉴定后材料的处理。本文件适用于对水稻品种和育种中间材料进行稻粒黑粉病抗性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.7 农作物种子检验规程 其他项目检验 GB/T 5519-2018 谷物与豆类 千粒重的测定 GB/T 8321.1-2000 农药合理使用准则 GB/T 17314 籼型杂交水稻三系原种生产技术操作规程 GB/T 17316 水稻原种生产技术操作规程 GB/T 28079 水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。稻粒黑粉菌冬孢子 teliospores of rice kernel smut 稻粒黑粉病菌侵染水稻谷粒后，最后生成黑色的粉末状厚垣孢子菌粒，即为冬孢子，可以在病谷粒、畜禽粪便或散落到土壤中越冬，来年遇到2034气温，萌发产生担孢子或次生担孢子，随气流传至花器、子房或幼嫩谷粒上，萌发侵染。4 鉴定方法的原理 根据稻粒黑粉病菌在自然条件下侵染水稻谷粒的过程，人工模拟病菌侵染和发病的温、湿度及光照条件，让接种的菌孢子在穗部充分发病。5 仪器设备 仪器设备应包括：a)光学显微镜：40200 倍放大倍数；b)恒温培养箱：温度范围 037；DB42/T 1918.12022 2 c)超净工作台：洁净等级 100 级；d)天平：分度值 0.001 g；e)高压灭菌锅：10 L 以上。6 试剂和培养基 试剂 75%医用酒精。培养基 马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）的配制方法参见附录A。7 稻粒黑粉病菌采样时间和地点 从稻粒黑粉病自然发病区采集稻粒黑粉病样品，采样时间范围，自当年8月下旬开始田间发病至第二年春耕季节，都可采样。在发病田块的稻穗上，采集感病谷粒。8 感病谷粒选择 选择闭合完整、黑色粉状物没有散出的黑粉病稻粒6粒8粒,应符合GB/T 3543.7和GB/T 28079 的要求。非闭合完好的谷粒容易受其他真菌混杂，导致后续病菌分离失败。9 冬孢子的培养 病粒种子的处理 经过75%酒精溶液表面清洗消毒30 s后，再用无菌水冲洗3次。制备冬孢子悬浮液 冲洗干净的病粒种子，用无菌解剖针挑开谷壳，挑出黑色冬孢子，悬浮在装有无菌水的培养皿或烧杯中，封口，置于28、12 h光照与12 h黑暗间隔的恒温箱中，静置培养24 h。10 接种菌液的制备 吸取冬孢子悬浮液 100 ul，均匀涂布于马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）上，用光学显微镜每隔24 h观察冬孢子形态及萌发情况，长出菌丝后，挑取单菌落接种至新的PSA培养基上。32培养24 h后，挑取菌落于装有10 ml无菌水的试管中，充分混匀，制成含量为106个孢子/毫升的孢子悬浮液。所有的操作均在超净工作台上进行。制备好的接种菌液应在48 h内使用完，逾期要接种应重新制备新的接种菌悬浮液。11 稻粒黑粉病菌的人工接种 水稻接种材料和品种的选择 DB42/T 1918.12022 3 对于可育水稻材料或品种，可以直接进行孢子接种。不育材料要保证有充分的授粉条件，应安排花期相遇的父本材料，保证有充足的花粉，再安排接种，应按照GB/T 17316的规定执行。两系不育系繁殖期间，因温度较低（22以下），无法满足病菌生长要求，不宜进行接种鉴定。抗病对照品种为江城3A，感病品种为培矮64S。接种方法和注意事项 准备进行接种鉴定的水稻品种，要确保近期没有喷施各种杀菌剂，尤其是真菌防治类农药。用医用注射器给水稻单株接种菌液，将菌液注入苞叶内的幼穗中。以1 ml无菌水注射水稻幼穗作为对照。接种时间 在水稻处于孕穗期第6期（抽穗前5d7d）阶段，晴天的傍晚（17:0019:00）或早上(6:008:00)。水稻幼穗发育时期的划分应符合GB/T 17314的规定。接种温度和湿度 气温在28为宜，不宜超过32，或低于20。雨天不宜进行大田接种。室内接种后，75%以上湿度持续保湿24 h以上，使用自然光照条件即可，不能使用紫外光源照射。接种部位 水稻剑叶鞘包裹的幼穗。接种菌量 水稻单穗用2.5 ml一次性医用注射器注射1 ml调制好的接种菌液。接种穗数 进行抗性鉴定的品种，每品种接种不少于20个单穗；单株鉴定，每株不少于3穗。12 病情测定 病情统计时间 接种后，待接种稻穗生长进入黄熟期，且病情稳定后，统计各品种的单穗平均病粒数和平均千粒重接种的发病结果，参比高抗对照品种江城3A和高感病品种培矮64S。病粒种子计数 将单个稻穗的所有种子脱粒到种子盘中，选择有明显孢子感染、闭合完整、黑色粉状物没有大量散出的黑粉病稻粒，进行计数。非闭合完好但感染的谷粒不能作为感病谷粒计算。统计时，瘪粒（未授粉颖花）不纳入病粒种子统计。种子千粒重 将单穗种子脱粒晒干后，千分之一天平测量非瘪粒种子的重量，计算千粒重可按照GB/T 5519-2018中6.1的规定执行。单穗病粒率和产量损失率 DB42/T 1918.12022 4 单穗病粒率按公式（1）进行计量：A=B/C100%(1)式中：A单穗病粒率%；B签订的单穗上的病粒数，单位：粒；C单穗上总的实粒数，单位：粒。产量损失率按公式（2）进行计量：Z=M/N 100%(2)式中：Z产量损失率%；M对照处理的千粒重，单位：g；N接种处理的千粒重，单位：g。13 稻粒黑粉病抗性评价分级 接种稻粒黑粉病菌后，以水稻品种单穗病粒数、单穗病粒率并参考产量损失率为标准评价不同水稻品种的抗病水平，稻粒黑粉病抗性分级标准以单穗病粒数和单穗病粒率为单位，参考水稻其他抗病鉴定国内和国际标准，按表 1 中的 0 级9 级标准进行稻粒黑粉病抗性的划分。表1 稻粒黑粉病抗性评价分级指标 抗性分级 单穗平均病粒数/个 单穗病粒率/%平均产量损失率/%抗性表现 0 0 0 R1%高抗 1 15 1R3%1%R3%抗病 3 610 3%R5%3%R5%中抗 5 1115 5%R10%5%R10%中感 7 1620 10%R20%10%R0%感病 9 21 R20%R20%高感 14 鉴定结果与记录档案的保存 根据抗病性鉴定结果进行记录，所有记录应真实、准确、规范，并具有可追溯性；档案应有专人专柜保管，鉴定结果的电子和纸质档案至少保存3年。15 接种和鉴定后材料的处理 接种和鉴定完成后，菌液作灭菌处理，按照GB/T 8321.1-2000中3.3的规定执行，对稻株作无害化处理。DB42/T 1918.12022 5 A A 附录A （资料性）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）的配制方法 A.1 配制 A.1.1 用天平分别称取马铃薯200 g,蔗糖20 g,琼脂粉15 g，用量筒量取蒸馏水1000 ml。A.1.2 将马铃薯去皮、切片后蒸馏水利用电磁炉在金属锅中，煮沸30 min，冷却后，用纱布过滤煮沸液体。A.1.3 过滤液与上述蔗糖、琼脂粉在烧杯中充分混匀，再转入三角瓶在121下高压灭菌20分钟。A.1.4 灭菌后的培养基在超净工作台自然冷却至60后，倒入无菌培养皿，待用。A.2 存储 倒入培养皿的固体PSA培养基，暂时不用，可以用无菌保鲜膜封口，在4低温无菌条件放置2个月。