SNT 1573-2013 出口贝类中神经性贝类毒素检测方法 小鼠生物法.pdf

S中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1573-2013代替SN/T1573-2005出口贝类中神经性贝类毒素检测方法小鼠生物法Determination of neurotoxic shellfish poisons in shellfish for export-Mouse biology method2013-11-06发布2014-06-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T1573-20138检测步骤8.1试样提取8.1.1取100g按7.2均质的样品到一个预先称重的500mL烧杯中，加人5g氯化钠和1mL浓HCL。搅拌均匀。边搅拌边加热混合物至沸腾，文火煮5min,冷却。8.1.2将混合物移至500mL离心管中，用50mL乙醚冲洗烧杯，将冲洗液一同移到离心管中。向离心管中再加入100mL乙醚，盖塞，用力振摇。2000g离心15min.8.1.3离心后小心倒出醚层（上层）溶液至1000mL分液漏斗中，用乙醚重复三次抽提离心管中的沉淀，乙醚总量为250L,转移醚层液体至分液漏斗中。轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）及贝肉碎片。8.1.4再将乙醚层移入500mL的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35士1）去除乙醚。8.1.5以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL,充分振摇，制成均匀NSP1%吐温60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的10g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液进行动物实验。8.2小白鼠试验8.2.1选择体重为19g21g的健康ICR品系雄性小鼠6只，随机分2组：检测样品组的空白对照组(1%吐温-60生理盐水)，3只/组。8.2.2分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，连续观测930mi。若小鼠的中位数死亡时间在2h以内，则要用1%吐温-60生理盐水对稀释液进行稀释后重新注射，直到小鼠的死亡时间在2h6h内。9结果的计算和表述9.1待测样品校正鼠单位(CMU)的确定根据待测样品的小鼠死亡时间，见附录A,查出相应的鼠单位数MU:根据小鼠的重量，见附录B,查出其对应的重量校正系数。同一只小鼠的鼠单位与重量校正系数相乘，即得该只小鼠的CMU。选取检测样品受试组中3只小鼠CMU的中位数，即为该样品受试组的中位数CMU,以此值进行6,2的计算。结果表述。9.2毒素毒力的计算与结果表述9.2.1NSP毒力的计算每克样品中NSP的含量按式(1)计算。X=中位数CMUX10 mL X DF/100g(1)式中：X每克样品中NSP的含量，单位为鼠单位每克(MU/g):中位数CMU一检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位；DF稀释倍数。3