NYT 4181-2022 草地贪夜蛾抗药性监测技术规程.pdf

NY/T4181-20224.11丙酮(C3H6O,CAS号：67-64-1).4.12二甲基亚砜(C2H6OS,CAS号：67-68-5)。4.13化学杀虫剂原粉或原油。4.14Bt蛋白：Vip3Aa、CrylFa或Cry1Ab。4.15琼脂。4.161.5%的琼脂：取1.5g的琼脂(4.15)于100mL的去离子水中加热至完全溶解。4.170.05%Triton X-100水溶液：取0.5 g Triton X-100(4.1)加入1000mL水中，混匀。4.180.02mol/L、pH8.0的Tris-HCl:缓冲液：取2.42gTis(4.2)溶于1000mL去离子水中混匀，并用HC1(4.8)调节pH至8.0。4.190.05mol/L、pH11.0的Na2COa缓冲液：取1.59gNa2C03(4.3)和2.94 g NaHC03(4.4)溶于1000mL去离子水中混匀，并用NaOH(4.7)调节pH至11.0。4.200.01mol/1、pH7.4的磷酸盐缓冲液：取8 g NaCl(4.5),0.2gKCl(4.6),1.44gNa2HPO,(4.9)和0.24gKH2PO,(4.10)溶于1000mL的去离子水中混匀，并用HCI(4.8)调节pH至7.4。4.21化学杀虫剂原药母液：取适量化学杀虫剂原药(4.13)，非水溶性药剂用丙酮(4.11)或二甲基亚砜(4.12)等溶解，混匀。4.22化学杀虫剂梯度稀释液：取适量化学杀虫剂原药母液(4.21)，用0.05%Triton X-100水溶液(4.17)逐级稀释为梯度稀释液。4.23Bt蛋白液：将Bt蛋白(4.14)分别溶于0.02mol/L、pH8.0的Tis-HC1缓冲液(4.18)或0.05mol/L、pH11.0的Naz CO3缓冲液(4.19)中配制成1mg/ml.的母液，然后用0.01mol/I、pH7.4的磷酸盐缓冲液(4.20)对Bt蛋白母液逐级稀释为梯度稀释液。5仪器设备5.1电子天平：感量0.1mg。5.2微量点滴器：最小点滴量小于或等于0.2L。5.312孔细胞培养板：直径20mm。5.424孔细胞培养板：直径15.6mm。5.5细菌培养皿：直径9cm。6试样6.1监测对象草地贪夜蛾幼虫。6.2供试植物未接触任何杀虫剂的非转基因玉米。6.3试虫采集选监测地区其有代表性的1周内未施用杀虫剂的玉米田块，按五点随机取样方法，采集草地贪夜蛾幼虫，每点采集幼虫100头以上或卵块10块以上建立供试种群。7试验步骤7.1试虫饲养将采自不同地点的供试种群统一在室内(261)、相对湿度70%士5%、光暗周期16L:8D条件下饲养，在室内不接触任何药剂的情况下采用人工饲料，人工饲料配方见附录A。连续饲养1代3代用于测定。7.2药剂处理2