SN 0698-1997 出口肉及肉制品中莫能菌素残留量检验方法 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 9 8 一 1 9 9 7出口肉及肉制品检验 方 法中莫能菌素残留量液相色谱法M e t h o df o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f mo n e n s i n r e s i d u e sm e a t s a n d m e a t p r o d u c t s f o r e x p o r t-L i q u i d c h r o m a t o g r a p h i c me t h o d1 9 9 7 一 1 2 一 0 1 发布1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布s N 0 6 9 8 一1 9 9 7前言 本标准 是根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标准的起草与表述规则 第1 部分:标准编写的基本规定 及 S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定 的要 求进行编写的。其中测定方法是参考国内 外有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国 际上对肉及肉制品中 莫能菌素残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的.本标准的附录A是提示的附录。本标准由中华人民共和国国家进出口 商品检验局提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人:陈笑梅、施旭霞。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口 商品检验行业标准出口肉及肉制品检 验 方 法中莫能菌素残留量液 相 色 谱 法s x 0 6 9 8 一1 9 9 7 M e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t i o n o f m o n e n s i nr e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -L i q u i d c h r o ma t o g r a p h ic me t h o d范围本标准规定了出口肉及肉制品中莫能菌素残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于出口鸡肉中莫能菌素残留量的检验。抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1-2 5 1 2 6-1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 -2 5 0 0 2 02.3抽样方法 按2.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件中取一袋作为原始样品，其总量不少 于2 k g。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。如每件中无小包装，或有小包装但每袋重量超过 2 k g者，则可用灭菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于1 0 0 9，混合后置于洁净容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不 少于2 k g。加 封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 从所取全部样品中取出有代表性样品约 1 k g，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封并标明标记.2.5 试样保存 将试样于一1 8 C以下冷冻保存。注:在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.月，种，种 种中 华 人 民 共 和 国国 家 进 出口 商 品 检 验 局，9 9 7-1 2-0 1 批 准1 9 9 8-0 4 一 0 1 实 施 1S N 0 6 9 8 一 1 9 9 73 测定方法3.1 方法提要 用甲醇一 水溶液提取试样中的莫能菌素，过滤.滤液用二氯甲烷进行液液分配提取。提取液经浓缩并经硅胶小柱净化。用二氯甲烷一 甲醇洗脱，洗脱液经浓缩后用甲醉定容，供HP L C柱后衍生分析用。莫能菌素与香兰素反应后生成的衍生物，在 5 2 0 n m波长处被检测，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外.试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 甲醇:色谱纯。3.2.2 二氯甲烷。3.2.3 浓硫酸:密度P 约1.8 4 g/m L,3.2.4 磷酸:纯度 8 5%,3.2.5 香兰素:纯度)”%。3.2.6 2化钠溶液:1 0 0 g氯化钠溶于 1 0 0 0 m l水中.3.2.7 提取液:甲醇 一 水(8 5 0+1 5 0),3.2.8 无水硫酸钠:6 5 0 C 灼烧 4 h,置于干燥器中备用。3.2.9 莫能菌素标准品:已知纯度)8 0%,3.2.1 0 莫能菌素标准溶液 准确称取适量的莫能菌素标准品，用甲 醇配成 浓度为1 0 0 p g 莫能菌素/m L的标准储备液.根据需要再用甲醉稀释储备液，配成适当浓度的标准工作液。3.3 仪器和设备3.3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器和柱后衍生化装置。3.3.2 捣碎机。3.3.3 超声波浴。3.3.4 锥形瓶:1 0 0 mL,3.3.5 分液漏斗:2 5 0 m L,3.3.6 旋转蒸发器:备温控水浴。3.3.7 浓缩瓶:具磨口，1 0 0 m L,3.3.8 硅胶小住:S e p-P a k P T 一 硅胶小柱(2 g),3.4 测定步骤3.4.1 提取和净化 称 取试样约 1 0 g(精确至0.1 g),置于 1 0 0 m L锥形瓶中，加7 5 m L提取液，搅拌后，超声提取5 mi n,将提取液过滤到分液漏斗中，加5 0 m L氯化钠溶液，用2 X3 5 mL二氯甲烷萃取。收集二氯甲烷层，过无水硫酸钠柱滤入浓缩瓶中。于 4 5 C浓缩至干。加 7 mL二氯甲烷以溶解残留物，过硅胶小柱(d,柱预先用 3 ml二氯甲烷浸润)，流速小于 5 ml./mi n.再加3 MI二氯甲烷淋洗浓缩瓶，一并过柱，弃去流出液。用 1 0 mL二氯甲烷淋洗小柱，弃去流出液。然后用5 m L二氯甲烷一 甲醇(9 5-5)溶液洗脱柱上的莫能菌素。洗脱液收集于浓缩瓶中，在4 5 C旋转蒸发至干。用甲醇定容至1.0 mL,溶液供液相色谱测定。3.4.2 测定3.4.2.1 液相色谱条件 a)色谱柱:p B o n d a p a k C,ti,3 0 0 m m X3.9 m m(内 径),5 J A M，或相当的色 谱住;b)流动 相:甲 醇一 水一 磷酸(9 4 0+6 0+1),0.7 m L/m i n;c)柱后衍生试剂:边搅拌边将2 0 m L 浓硫酸慢慢加到9 5 0 m L甲 醇中，冷却至 室温，加3 0.0 g 香兰素，搅拌至 溶解。流速:。.7 m L/m i n;s N 0 6 9 8 一 1 9 9 7 d)柱后反应室:体积1.4 m L不锈钢管 3 0 0 c m X 1 m m(内径)，柱后反应温度,9 0 C;e)检测波长:5 2 0 n m;f)进样量:1 0 0 ft L,3.4-2.2 色谱测定 根据样液中莫能菌素含量的情况选定峰面积相近的标准 工作溶液。标准溶液和样液中莫能菌素的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准溶液和样液等体积参擂进样测定。在上述色谱条件下莫能菌素衍生物的保留时间约为 6.5 mi n。标准品色谱图见附录 A中图Al.3.4.3 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。3.4.4 结果计算和表述 按式(1)计算试样中莫能菌素的残留含量:A,从(1)式中:X 试祥中莫能菌素的残留含量,m g/k g;A 样液中莫能菌素衍生物的峰面积,mm;A,标准工作液中莫能菌素衍生物的峰面积,m m;标准工作液中莫能菌素的浓度，p g/m L;V 样液最终定容体积，mL;二 最终样液所代表的试样量，9。注:计算结果需扣除空白值。测定低限、回收率 测定低限本 方法的 测定低限为。.0 2 0 m g/k g,回收率鸡肉中莫能菌素添加浓度及其回收率的实验数据:在0.0 2 0 m g/k g，回收率为9 4.6%;在 0.0 5 0 mg/k g，回收率为 9 3.6%;在 0.2 0 0 mg/k g，回收率为 9 5.7%.s N 0 6 9 8 一1 9 9 7 附录A(提示的附录)标准品色谱图6.6 7其 能菌 素衍生 物图A 1 莫能菌素标准品衍生物的液相色谱图S N 0 6 9 8 一1 9 9 7Fo r e wo r d T h e s t a n d a r d w a s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e w i t h t h e r e q u i r e m e n t s o f G B/T 1.1-1 9 9 3 D i r e c t i v e s f o rt h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n-Un i t 1:D r a f t i n g a n d p r e s e n t a t i o n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a l r u le sf o r d r a f t i n g s t a n d a r d s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d m e t h o d s f o r t h ed e t e r m i n a t i o n o f p e s t i c i d e,v e t e r i n a r y d r u g r e s i d u e s a n d b io t o x i n s i n c o mm o d i t i e s f o r e x p o r t .T h em e t h o d o f d e t e r m in a t i o n o f t h is s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y r e f e r r i n g t o r e l e v a n t d o m e s t i c a n d f o r e ig n l it-e r a t u r e s t h r o u g h r e s e a r c h,m o d if i c a t i o n a n d v e r i f i c a t i o n.B e s i d e s,me t h o d s o f s a mp l i n g a n d s a mp l ep r e p a r a t io n a r e a l s o s p e c i f i e d i n t h i s s t a r d a r d.Th e l i mi t o f d e t e r mi t a t io n i n i n t h i s s t a n d a r d i s d e f i n e d o n t h e b a s i s o f t h e c u r r e n t in t e r n a t i o n a lm a x i mu m l i mit f o r m o n e n s i n r e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s a n d t h e s e n s i t i v i t y o f t h i s m e t h o d.An n e x A o f t h is s t a n d a r d i s a n i n f o r ma t i