SN 0667-1997 出口肉及肉制品中丙酸睾丸酮残留量检验方法放射免疫法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 6 7 一 1 9 9 7出口肉及肉制品中丙酸辜丸酮残留量 检验方法放射免疫法M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f t e s t o s t e r o n ep r o p i o n a t e r e s i d u e s i n m e a t s a n d m e a t p r o d u c t sf o r e x p o r t-R a d i o i m mu n o a s s a y1 9 9 7-0 8 一 1 5 发布1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 667 一 1 997前言 本标准是 根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准 化工作导则 第1 单元:标准的 起草与表述规则 第1 部 分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中农药、兽药残留量及生物 毒素 检验方法标准编写的基本规定 的要求 进行编写的。其中测定方法是参考国内外有关文献，经研究、改进和验证后而制定的。本标准同时制定了抽祥和制样方法。测定低限是根据国际上对肉中残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的。本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出并归口。本标准由中华人民共和国吉林进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人:荣会、李庆才、牟峻。本 标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品中丙酸辜丸酮残留量 检验方法放射免疫法S N 0 667 一 1 997 M e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t i o n o f t e s t o s t e r o n ep r o p i o n a t e r e s i d u e s i n m e a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t-Ra d i o i mmu n o a s s a y范围本标准规定了出口肉及肉制品中丙酸肇丸酮残留量的抽样、制样和放射免疫测定方法。本标准适用于出口分割牛肉、清蒸牛肉罐头中丙酸肇丸酮残留量的检验。抽样和制样2 门检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1-2 5 1 2 6-1 0 0 5 1 0 1 -2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1-1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 -2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。肉及肉制品(罐头除外):从每件中取一袋作为原始样品，其总量不少于 2 k g，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过2 k g 者，则可用灭菌刀 具在抽出的包件中，每件割取不少于1 0 0 g,混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 k g。加封后，标明标记，及时送交实验室。罐头:从每件中随机取一罐 所抽取的样品应标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 肉及肉制品(罐头除外):从所取全部样品中缩分出有代表性样品约1 0 0 0 9，充 分搅碎，装入洁净容器内。密封，作为试样，标明标记。罐头:将所取罐全部样品 开罐取出后，充分 搅碎、混匀，缩分至 1。9，均分成两份，装入洁净容器中 华人民共和国国家 进出口 商品检验局1 9 9 7-0 8-1 5 批准1 9 9 8-0 1 一 0 1 实施 IS N 0 6 6 7 一1 9 9 7内，作为试样。密封，标明标记。2.5 样品保存 将试样于一1 8 以下冷冻保存。注:在 抽 样 及 制 样 的 操 作 过 程 中，必 须 防 止 样 品 受 到 污 染 或 发 生 残 留 物 含 量 的 变 化。测定方法3.1 方法提要 试样中残留的丙酸翠丸酮采用甲醇提取，提取液经与石油醚、再与乙睛进行液一 液分配。所得乙睛溶液经蒸干，残渣用甲醇一 水溶液(1+D浸出，经 P T-C,.柱净化。用甲醇洗脱，洗脱液经蒸发、定容后，用丙酸皋丸酮放射免疫分析试剂分析，用 7 放射免疫计数仪测定。3.2 试剂和 材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。3.2.1 乙睛:用石油醚饱和。3.2.2 石油醚。3.2.3甲醇。12.4 甲醇一 水(1+1),3.2.5 氯化钠。3.2.6 氯化钠饱和水溶液。3.2.7 P T-C。柱:净化用，2 g,3.2.8 丙酸攀丸酮标准品:纯度)9 9 0 0(美国S I G MA公司提供或相当者)。12.9 丙酸攀丸酮标准储备液:称取一定量(精确至。.0 0 0 1 g)的丙酸肇丸酮标准品，用少量甲醇溶解并准确定容至1 0 0 m L，摇匀，得浓度为。.1 0 0 m g/m L 标准储备液。根据需要再配 制成适用 浓度的标准工作溶液。3.2.1 0 标记物:含1 z，工 放射性标记的丙酸辜丸酮衍生物(有效期内使用)。3.2.1 1 抗血清:含免抗人丙酸肇丸酮抗血清0.2 5/(v/v)的牛血清白 蛋白(B S A),1.0 m g/m L 的脂酶和。.I%(二/v)的叠氮钠。3.2.1 2 P E G一 分离剂。3.2.1 3 磷酸二氢钠溶液:取 5.5 2 g 磷酸二氢钠(含 1 2 个结晶水)，于 2 0 0 mL水中溶解。3.2.1 4 磷酸氢二钠溶液:取3 5.8 3 g 磷酸氢二钠(含1 个结晶 水)，于5 0 0 m L 水中 溶解。3.2.1 5 磷酸盐缓冲溶液:取4 0 0 m L 磷酸氢二 钠溶液、1 0 0 m L 磷酸二氢钠溶液、9 g 氯化钠及5 0 0 m L水，混匀(p H7.0-7-2).3.3 仪器和设备3.3.1 Y 一 放射免疫计数仪。a)温度:4 1 0 C;b)相对湿度:3 0 0 0 8 0 0 0;c)使用地点:远离所有放射源。13.2 低温离心机:转速不低于1 0 0 0 0 r/m i n,3.3.3 高速组织捣碎机:转速不低于 1 0 0 0 0 r/m i n.3.3.4 电热恒温器。3.4 测定步骤3.4 门提取 称取试样约2 0 g精确至。.1 g)于1 5 0 m L 具塞锥形瓶中，加人5 0 m L甲 醇，振荡提取3 0 m i n。将提取液过滤于分液漏斗中，并用 5 0 mL甲醇分二次洗涤残渣，合并滤液于上述分液漏斗中。加入 1 0 mL氯S N 066 7一 19 97化钠饱和水溶液，用3 X2 0 mL石油醚提取，合并石油醚层于另一分液漏斗中。用 3 X2 0 mL石油醚饱和的乙睛提取，合并乙睛层于梨形瓶中，于 4 0 水浴中减压浓缩至近干，再用氮气流吹干。加人 5 mL甲醇一 水(1+1)以溶解残渣。3.4.2 净化 用1 0 mL甲醇一 水(1 十1)预洗 P T-C,柱，将上述溶液注人接有P T-C,a 柱的玻璃注射器中过柱，然后依次用 1 0 mL甲醇一 水(1+1),1 0 mL水、1 0 m L石油醚淋洗，弃去流出液。用氮气流吹干 P T-C,a 柱后，用 1 0 m L甲醇洗脱，收集洗脱液于试管中，于 4 0 水浴中用氮气流吹干，加入。.0 5 mL甲醇以溶解残渣，备用。3.4.3 测定3.4.3 门标准曲线绘制 a)取二支空白管，每管各加1 0 0 I L-1 一 丙酸肇丸酮,1 0 0 K L抗血清和 1 0 0 p L P E G 一 分离剂(3.2.1 2),测其放射计数，取平均值即为。标准管计数(B o);b)取二支空白管，每管分别加1 0 0 I L 2 1-丙酸肇丸酮,1 0 0 I L P E G 一 分离剂(3.2.1 2),测其放射计数，取平均值，即为非特异结合计数(N S B);c)应用2 5 工 一 丙酸皋丸酮试剂，分别准确移取一定体积的丙酸肇丸酮标准工作液于一组具塞试管中，相当于丙 酸辜 丸酮含量为1 0,2 0,4 0,1 0 0,2 0 0 n g，通入氮 气流吹干，加入。.0 5 m L甲 醇以溶解残渣。加入 0.0 5 mL磷酸盐缓冲液，再加入0.1 mL.工 一 丙酸辜丸酮标记物和 0.1 mL抗血清，充分混匀，于(3 7 士1)恒温水浴中放置 6 0 mi n。加入 1.0 mL P E G 一 分离剂，充分混匀2 m i n后，于 3 5 0 0 r/m i n下离心2 0 mi n，弃去上清液。置待测管于仪器中，测定不同浓度的标准管计数，然后分别减去NS B，差值记为B。以B/B,(o o)为纵坐标，丙酸肇丸酮的量为横坐标，在半对数或对数值一 对数坐标纸上绘制标准曲线。3.4.3.2 样液测定 将全部样液(3.4.2)应用 z s 1 一 丙酸翠丸酮试剂，按 3.4.3.l c)操作步骤进行测定，求出BI B。值，并从标准曲线中查得丙酸辜丸酮含量3.4.4 空白试验 使用经脱激素的样品为空白样品，按上述测定步骤进行。3.5 结果计算和表述 按式(1)计算B I B o(o o)值 BI B,=式中:B I B,结合率，%;B 样液每对双管计数均值;B,。标准双管计数均值;NS B非特异结合双管计数均值。按式(2)计算试样中丙酸塞丸酮残留含量B 一 NSBB。一 NS BX 1 0 0(1)(2)竺m -X式中:X 试祥中 丙酸肇丸酮残留含量，R g/k g;二从标准曲线中查得丙酸肇丸酮的量，11 9;m 试样量，k g 注:计算结果需将空白值扣除4 测定低限、回收率4.1 测定低限 本 方 法 的 测 定 低 限 为0.5 K g/k g.S N 066 7一 19 974.2 回收率4.2，分割牛肉中丙酸辜丸酮的添加浓度及其回收率的实验数据:0.5 p g/k g时，为 9 7.6%;5.0 p g/k g时，为 9 6.O o/n;5 0.0 p g/k g 时，为9 7.9%.4.2.2 清蒸牛肉罐头中丙酸辜丸酮的添加浓度及其回收率的实验数据:0.5 p g/k g 时，为9 6.5 0 x;5.0 p g/k g时，为 9 8.4 0 o;5 0.0 p g/k g时，为9 5.3 0 o,S N 0 667 一 1 997F o r e wo r d T h is s t a n d a r d w a s d r a f t e d in a c c o r d a n c e wit h t h e r e q u i r e m e n t s o f G B/T 1.1-1 9 9 3 D i r e c t i v e s f o rt h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n-U n i t 1:D r a f t i n g a n d p r e s e n t a t io n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a l r u le sf o r d a r f t i n g s t a n d a r d s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e n e r a l r u le s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d me t h o d s f o r t h ed e t e r m i n a t i o n o f p e s t ic id e,v e t e r i n a r y d r u g r e s i d u e s a n d b io t o x in s i n c o m mo d it i e s f o r e x p o r t .Th