NYT 404-2000 脱毒生姜种姜(苗)病毒检测技术规程.pdf

B 1 51/中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准N Y/T 4 0 4-2 0 0 0脱毒生姜种姜(苗)病毒检测技术规程Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d(s e e d l i n g)g i n g e r2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 发布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施中华人民共和国农业部发 布N Y/T 4 0 4-2 0 0 0前言 为了有效地实施对脱毒生姜种姜质量检验和管理，规范脱毒生姜 种姜市场，促 进生姜脱毒技术的 推广，实现脱毒生 姜种姜(苗)病毒检测的规范 化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外生姜病毒检测技术最新研究进展的基础上，结合当前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用斑点酶联免疫吸附检测。本规程内容包括脱毒生姜种姜(苗)病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。本标准由中 华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位:农业部植物脱毒种苗质量监督 检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人:孙作文、任宝珍、李明立、杨勤民、王同伟、商明清。中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准脱毒生姜种姜(苗)病毒检测技术规程N Y/T 4 0 4-2 0 0 0Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d(s e e d l in g)g i n g e r1 范围 本标准规定了脱毒生姜种姜(苗)的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒生姜种姜(苗)的 病毒检测。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。N Y/T 4 0 2-2 0 0 0 脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程3 定义 本标准采用下列定义。3.1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的 再生试管苗，经检测确认不带烟草花叶 病毒(T MV)、黄瓜花叶病毒(C M V)，才确认是脱毒苗。3.2 脱毒种姜 从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖增加种姜数量的种姜生产体系生产出 来的。分原原种、原种、生产用种三个级别。3.2.1 原原种 p r e-e l it e 用脱毒苗在防虫网室、温室条件下生产出的符合质量标准的种姜。3.2.2 原种e l i t e 用原原种作种姜，在良好隔离条件下生产出的符合质量标准的种姜。3.2.3 生产用种。e r t if i e d s e e d 用原种作种姜，在隔离条件下生产出的符合质量标准的种姜。3.3 病毒病株允许率 脱毒种姜繁殖田 中病毒病株的 允许比率。4 检测对象 烟草花叶 病毒(T o b a c c o m o s a i c v i r u s,T MV);黄瓜花叶 病毒(C u c u m b e r m o s a ic v ir u s,C MV),5 抽样5 门组培苗抽样中华人民共和国农业部2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 批准2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施 IN Y/T 4 0 4-2 0 0 05.1.，脱毒核心材料:每株必须检测。5.1.2 扩繁苗:随机抽取 I Y o-2%的扩繁苗检测。5.2 田间抽样5.2.1 原原种和原种抽样:生姜生长前期、中期和后期，在目 测全田的 基础上，采用五点取样法，抽样数量为。.1 h m 2 以下2 0 0 株;0.1 1 1 h m 2 5 0 0 株;超出1 h m，面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。每株取叶片1-5 g，低温保湿存放，2 4 h内 检测。5.2.2 生产用种抽样:子姜膨大期，在目测全田的基础上，采用随机取样法，0.1 h m，以下检验 2点，每点1 0 0株;0.1 1 1 h m 2 检验 5 点，每点 1 0 0 株;1.1-5 h m2 检验1 0 点，每点1 0 0 株;超出5 h m 2 面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。取样方法及 样品 保存同5.2.1,53 商品种姜抽样 没有经过田间检验的种姜必须进行商品种姜检验。5.3.1 根据生姜种姜不同存放方式，采用分层设点或随机取样的方法，抽样量见表 I.表 1 种姜抽样数量标准表种姜总量，k g抽样百分率.%抽样最低数量,k g蕊 1 0 0 0 06 -1 01 0 0 1 0 0 0 03-5注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。5.3.2 将第一次抽取的样品 混合 后，进行二次抽样，随机抽取1 0%的 混合样品检测。6 检测方法 斑点酶联免疫吸附(D o t-E L I S A)检测法按N Y/T 4 0 2-2 0 0 0 中附录A执行。7 质A要求 凡酶联免疫检测呈阳性反应的为带毒种姜(苗)。原原种:病毒病株允许率是。原种:病毒病株允许率-l%.生产用种:病毒病株允许率-5%.