SNT 0669-2011 出口肉及肉制品中庆大霉素残留检测方法 杯碟法.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 代替 出口肉及肉制品中庆大霉素残留检测方法杯碟法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋 狊犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋犆 狔 犾 犻 狀 犱 犲 狉狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准代替 出口肉及肉制品中庆大霉素残留量检验方法杯碟法。本标准与 相比，主要技术变化如下：将原标准由定量检测方法变更为定性检测方法；将原标准名称 出口肉及肉制品中庆大霉素残留量检验方法杯碟法 修订为 出口肉及肉制品中庆大霉素残留检测方法杯碟法；重新核实了原标准的检测低限，由 修订为 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中国海洋大学。本标准主要起草人：刘云国、林洪、刘帅帅、贾俊涛、雷质文、林黎明、李正义、马维兴、唐静、张健、房保海、祝素珍、赵丽青、姜英辉、马云、韩青、李明哲、颜显辉。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：。犛 犖犜 出口肉及肉制品中庆大霉素残留检测方法杯碟法范围本标准规定了出口肉及肉制品中庆大霉素残留检测的杯碟方法。本标准适用于出口鸡肉中庆大霉素残留的筛选检测，阳性结果应用其他方法进行确认。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法试样制备与保存 试样制备将代表性样品中的可食部分放入绞碎机中绞碎。充分混匀，用四分法缩分至不少于 ，作为试样。装入清洁容器内，加封后，标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。试样保存将试样于 以下冷冻保存。原理用磷酸盐缓冲液（）提取试样中的庆大霉素残留物，离心后取上清液作为样液，以表皮葡萄球菌（犛 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 狌 狊 犲 狆 犻 犱 犲 狉 犿 犻 犱 犻 狊）作为指示菌，用杯碟法进行检测。仪器和设备 培养皿：内径、底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，配陶瓦盖，或玻璃盖内嵌入干燥的滤纸。牛津杯：不锈钢圆筒，外径 ，内径 ，高 。克氏瓶：。游标卡尺：测量范围 ，精度 。均质器：转速不低于 。离心机：转速不低于 。恒温水浴锅：，精度。恒温培养箱：，搁板应保持水平。犛 犖犜 高压灭菌锅。半对数坐标纸。旋转蒸发器。可调移动器：，。试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合 的规定。试验菌种表皮葡萄球菌（犛 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 狌 狊 犲 狆 犻 犱 犲 狉 犿 犻 犱 犻 狊），菌号 。培养基 增菌用液体培养及见 。保存及传代用液体培养及见 。检定用液体培养及见 。硫酸庆大霉素标准品已知纯度标准品，密封避光，防潮，保存。磷酸盐缓冲液（狆 犎 ）称取 磷酸二氢钾及 氢氧化钾，溶解于 水中，于 灭菌 。庆大霉素标准储备液准确称取适量的硫酸庆大霉素标准品，用磷酸盐缓冲液配制成浓度为 的标准储备液。保存于冰箱中，可使用个月。庆大霉素标准工作液取一定量庆大霉素标准储备液，用磷酸盐缓冲液稀释成浓度为 的庆大霉素标准工作液，应当日配制。生理盐水称取 氯化钠，溶解于 水中，分装后，于 灭菌 。检测方法 样液制备称取 试样，置于均质杯中，加入 磷酸盐缓冲液，均质 后，室温放置 ，移入离心管中 离心 ，取上清液于作为待测样液。菌悬液制备将试验菌种接种于装有培养基的试管中，于 培养。移 菌液于盛有适犛 犖犜 量培养基的克氏瓶中，使菌液均匀覆盖在琼脂表面，于 培养。然后用适量生理盐水将菌苔洗下，备用。置冰箱中（不宜超过周）。检定平板的制备在测定前，需进行预测试，以求得菌悬液最佳用量。用 庆大霉素标准工作液对加有不同量的菌悬液的平板进行测试，经培养后能使得 标准工作液在平板上产生直径在 以上的清晰、完整的抑菌圈的菌悬液用量为最佳用量。将培养基融化，冷却至 左右，加入最佳用量的菌悬液，使其充分混匀后，取 ，注入灭菌培养皿中，保持水平，凝固后即为检定平板。制备好的平板置冰箱可保存。样液的测定取制备好的检定用平板两个，在平板底部作好标记，把牛津杯适当间隔置于平板上，每个平板最多不超过个，在其中一个牛津杯中加入 庆大霉素标准工作液作为阳性对照，其余牛津杯中加入 样液，冷藏放置 后，培养后开始观察，如果 庆大霉素标准工作液产生清晰、完整的抑菌圈时终止培养，如果无明显抑菌圈，继续观察至。用游标卡尺测量标准工作液和样液的抑菌圈直径大小。每份样品做两个平板上的平行试验。结果判断和报告如样液在平板上无抑菌圈，庆大霉素标准工作液的抑菌圈直径大于，即报告“阴性”。如样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径在 以上，即报告“初筛阳性”。如样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径小于，大于，或者两个平行结果不一致时，视为可疑，应重新测试后判定。阳性样品需要用确证方法进行定性及定量分析。检测限本方法的检测限为 。犛 犖犜 附录犃（规范性附录）培养基犃 培养基胰蛋白胨 牛肉浸膏 氯化钠 水 将上述成分于水中加热溶解，调节 为 ，分装于试管或克氏瓶中，于 灭菌 。犃 培养基胰蛋白胨 牛肉浸膏 氯化钠 琼脂 水 将上述成分于水中加热溶解，调节 为 ，分装于试管或克氏瓶中，于 灭菌 ，灭菌后可制成斜面。犃 培养基蛋白胨 酵母浸膏 牛肉浸膏 葡萄糖 琼脂 水 将各成分加热并溶解于水中，调节 为，于 灭菌 ，临用前用 氢氧化钠溶液，调节 至。犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱 犻 狀犪 犮 犮 狅 狉 犱 犪 狀 犮 犲狑 犻 狋 犺狋 犺 犲犌 犅犜 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犪 狀犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋狋 狅狋 犺 犲犛 犖 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犿 犲 犪 狋犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 犲 狊犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋 犆 狔 犾 犻 狀 犱 犲 狉狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱犌 犲 狀 犲 狉 犪 犾 狋 犲 犮 犺 狀 犻 狇 狌 犲狉 狌 犾 犲 狊犪 狀 犱 狋 犲 狊 狋 犻 狀 犵犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊 犻 狀犛 犖 狑 犲 狉 犲狀 狅 狋 犪 犿 犲 狀 犱 犲 犱犲 狓 狆 犲 犮 狋 狋 犲 狓 狋 犳 狅 狉 犿 犪 狋犪 狀 犱狊 狅 犿 犲 犾 犪 狀 犵 狌 犪 犵 犲犲 狓 狆 狉 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犜 犺 犲犿 犪 犻 狀犮 犺 犪 狀 犵 犲 狊犫 犲 狋 狑 犲 犲 狀狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狀 犱犛 犖 犪 狉 犲犪 狊犳 狅 犾 犾 狅 狑 狊：犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狉 犲 狏 犻 狊 犲 犱狋 狅犪狇 狌 犪 犾 犻 狋 犪 狋 犻 狏 犲狋 犲 狊 狋 犻 狀 犵犿 犲 狋 犺 狅 犱犳 狉 狅 犿犪狇 狌 犪 狀 狋 犻 狋 犪 狋 犻 狏 犲狅 狀 犲 犜 犺 犲狀 犪 犿 犲狅 犳狅 狉 犻 犵 犻 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱“犕 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 犲 狊犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋 犆 狔 犾 犻 狀 犱 犲 狉狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱”狑 犪 狊狉 犲 狏 犻 狊 犲 犱狋 狅“犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 犲 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犆 狔 犾 犻 狀 犱 犲 狉狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱”犜 犲 狊 狋 犻 狀 犵狋 犺 狉 犲 狊 犺 狅 犾 犱狅 犳 狋 犺 犲狆 狉 犻 犿 犪 狉 狔狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊 狉 犲 狏 犲 狉 犻 犳 犻 犲 犱，犿 犵犽 犵狑 犪 狊 狉 犲 狏 犻 狊 犲 犱狋 狅 犿 犵犽 犵 犛 犻 狀 犮 犲狋 犺 犲 犻 犿 狆 犾 犲 犿 犲 狀 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犱 犪 狋 犲，犛 犖 狑 犪 狊犪 犫 狅 犾 犻 狊 犺 犲 犱犪 狋 狋 犺 犲狊 犪 犿 犲狋 犻 犿 犲 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犺 犻 狀 犪犖 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 犚 犲 犵 狌 犾 犪 狋 狅 狉 狔犆 狅 犿犿 犻 狊 狊 犻 狅 狀犳 狅 狉犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔狋 犺 犲犛 犺 犪 狀 犱 狅 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪犪 狀 犱犗 犮 犲 犪 狀犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犔 犻 狌犢 狌 狀 犵 狌 狅，犔 犻 狀犎 狅 狀 犵，犔 犻 狌犛 犺 犪 犻 狊 犺 狌 犪 犻，犑 犻 犪犑 狌 狀 狋 犪 狅，犔 犲 犻犣 犺 犻 狑 犲 狀，犔 犻 狀犔 犻 犿 犻 狀 犵，犔 犻犣 犺 犲 狀 犵 狔 犻，犕 犪犠犲 犻 狓 犻 狀 犵，犜 犪 狀 犵犑 犻 狀 犵，犣 犺 犪 狀 犵犑 犻 犪 狀，犉 犪 狀 犵犅 犪 狅 犺 犪 犻，犣 犺 狌犛 狌 狕 犺 犲 狀，犣 犺 犪 狅犔 犻 狇 犻 狀 犵，犑 犻 犪 狀 犵犢 犻 狀 犵 犺 狌 犻，犕 犪犢 狌 狀，犎 犪 狀犙 犻 狀 犵，犔 犻犕 犻 狀 犵 狕 犺 犲，犢 犪 狀犡 犻 犪 狀 犺 狌 犻 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狉 犲 狆 犾 犪 犮 犲 犱狋 犺 犲狆 狉 犲 狏 犻 狅 狌 狊狏 犲 狉 狊 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狉 犲 犾 犲 犪 狊 犲狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狊犳 狅 犾 犾 狅 狑 狊：犛 犖 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋 狊犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋犆 狔 犾 犻 狀 犱 犲 狉狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犵 犲 狀 狋 犪 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犿 犲 犪 狋犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮