SCT 7028-2022 水产养殖动物细菌耐药性调查规范 通则.pdf

ICS65.50CCSB50圈E中华人民共和国水产芍于业标准SCT70282022水产养殖动物细菌耐药性调查规范通则SpecificationfOrnonitoringofantinicrobialresistanceinbacteriahomaquatiCaninals-Generaprinciple2023030实施2022发布翱【、中华人民共和国农业农村部发布1SCT7028-2022一目-口本文件按照GBTL12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出。本文件由全国水产标准化技术委员会（SACTC156）归口本文件起草单位:全国水产技术推广总站、中国水产科学研究院珠江水产研究所。本文件主要起草人:刘忠松、邓玉脖、陈艳、陈学洲、姜兰、冯东岳、宋晨光scT7028-2022水产养殖动物细菌耐药性调查规范通则范围本文件界定了水产养殖动物细菌耐药性调查规范的术语和定义,确立了水产养殖动物细菌耐药性调查流程,规定了细菌耐药性调查中样品采集、信息采集、细菌分离鉴定、菌株保存、药物敏感性试验、结果判定利结果记录与乡计的要求,描述了上述各田瓣留冒懒露蹦i匡2引用文们适用于J仅文333333.抗菌药物对菌株的MIC值在高于敏感折点且低手耐药折点的范围内,即菌株对该药物表现为中介3.6耐药resistant抗菌药物对菌株的MIC值等于或高于耐药折点即菌株对该药物表现为耐药4耐药性调查流程细菌耐药性调查按以下流程进行:a）样品采集;b）信息采集;c）细菌分离鉴定;SCT7028一2022菌株保存;药物敏感性试验（微量肉汤稀释法）;结果判定;结果记录与统计。d）e）g）5耐药性调查的实施5样品采集5川采样对象水产养殖动物每尾（个）动物个体为个样品。5.2采样频次每个采样点每年至少3次,每次间隔2个月或以上53采样数量每个采样点每次采集不少于10个样品全年不少于30个样品5.4样品采集保存及运输样品采集后分别放置于清洁、干燥、密封的容器中且存放温度为010。C应在12h内进行细菌分离每个样品分别加贴采样标签注明采样地、采样编号、采样人和采样日期52信息采集采样人员记录养殖场基本信息和样品来源信息按附录A的要求填写采样记录表5.3细菌分离鉴定根据不同细菌分别选择适宜的培养基、培养条件和鉴定方法对样品进行细菌分离培养,采用牛理牛化反应和分子生物学等方法对分离菌株进行菌种鉴定每个样品分离菌株1株2株每个采样点每年分离菌株不少于30株5.4菌株保存分离的菌株若不能及时进行药物敏感性试验应置于04冰箱中保存时间不超过48h;或按照SCT7019的规定,采用甘油保存法或真空冷冻干燥法置于-20或80冰箱中保存55药物敏感性试验采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性测定具体操作方法和步骤按附录B的规定进行5.6结果判定根据不同抗菌药物对受试菌的MIC值结果将菌株判定为敏感、中介或耐药不同细菌的耐药性判定参考值见附录C5.7结果记录与统计将每受试菌的菌株编号、菌利名称、对各种药物的MIC结果以及判定结果记录于药物敏感性试验结果记录表中见附录D按照公式（1）、公式（2）、公式（3）分别计算分离菌株的敏感率、中介率及耐药率。敏感率（敏感菌株数受试菌株总数）100（1）中介率（中介菌株数受试菌株总数）100（2）耐药率（耐药菌株数受试菌株总数）100（3）2SCT7028一2022附录A（规范性）采样记录表采集养殖场基本信息和样鼎来源信息等按表A.1的要求填写表A.采样记录表-、养殖场基本信息电泅联系人场名地养殖面积:I0亩ll亩100亩l00亩养脯年限:1年2年3年5年5年以上主耍养殖品种养殖模式二、样品来源信息样品数最动物品种样品规格:平均体重;平均体长采样部位:发病情况:使）村抗菌药物情况其他情况（疑似病冈判定）p采样人（签名）采样时间:年月日3SCT70282022附录B（规范性）药物敏感性试验（微量肉汤稀释法）B试剂和材料司氟（抗刽量O（B.）B.各蟹盛尊溅.矗酗翻药物名懒撮赡;三甲氧芋呵.1腮r童瞳器【罗粤哪露霍恩诺沙野l:盯趣重i湿腮i5酶霉睡蕾甄露疆硼舱酸多铡素l凹盅色二冀豆歹巳藤5典;戴酝烹蝴珊名稀释剂水水水抿水水唾】重胳B.23溶剂将称取的抗菌蔓中盖解于似m微孔滤膜过滤除菌制备完的药液,渠灌言内露B.2按产品说明用干粉培养司酗霹零虽杏应箍台6682q三级水的要求。针对需要复杂肯养的细菌应在MH肉汤里添B.3质粹菌株大肠埃希氏菌（EChc厂ichtco）ATCC25922B.96孔板官选用规格10.7mm10.0mm169mm、聚苯乙烯材质、U型孔底、带盖、每孔可容纳500队L液体的无菌96孔板。B2仪器设备恒温培养箱、恒温摇床、高压灭菌锅、分析天平、电热鼓风干燥箱、冰箱、移液器、超净工作台等B.3抗菌药物稀释1仅灭菌MH肉汤,在无菌96孔板的第1孔加人160件L,在第2孔至第10孔中分别加人100似L在第1孔中加人抗菌药储备液40队L吹打混匀;取第1孔中的含药肉汤100队L至第2孔中吹打混匀吸取4SCT7028-2022第2孔中的100件L含药肉汤至第3孔中吹打混匀重复上述操作,将药物进行2倍倍比稀释,当第10孔稀释完后弃去吸出的含药肉汤l00似L使含有药物的MH肉汤每一孔均为l00队L。B,4细菌MO值测定B4.菌悬液制备根据不同细菌分别选择适宜的培养基和培养条件,将纯化的受试菌株接种于适宜的培养基中,取对数生长期的培养物用比浊仪或麦氏比浊管测定校正菌液浊度为0.251麦氏浊度标准,再用MH肉汤稀释200倍制备成用于接种的菌悬液（菌悬液浓度为l.0l05CFUmL1.6106CFUmL）B4.2对照设立配制的菌悬液应在15mln内川人已稀释好抗菌药物的96孔板第1孔至第10孔中,每孔各100队L设不含抗菌药物的菌悬液作为阳性对照设不含药物和菌悬液的MH肉汤作为空白对照。每受试菌株单独使用块96孔板接种后每孔抗菌药物的终浓度见表B.2接种后菌液的终浓度为2.0105CFUmL8.0105CFUmL表B2抗菌药物在96孔板中各孔的终浓度行列数药物浓度,似gmI.药物名称l223456789l0阳性对照空口对照氟苯尼考32680250.2500642（）.5空白对照盐酸多阿环素旧件对照）l682（）50.250250.（）6（）.03磺胺间甲氧啼陡阳件对照空白对照C2048l02522562862684磺胺甲恶哑甲氧苇淀3046l528764l9.30.25l.20.06阳性对照窄口对照608323829.5（）.52.40.2D窄白对照旧性对照恩诺沙星8202502500625005（）.5（）.（）3注:“阳性对照”为不含药液的荫悬液;“空臼对照”为不含药液和不含菌悬液MH肉汤B.4.3孵言加样完毕后,盖好板盖将96孔板置于恒温培养箱中孵育,重叠放置不应超过4块96孔板不同细蔚分别选择适宜的培养条件B4qMO值判读空白对照孔不得有细菌生长阳性对照孔有明显的浑浊才可判读没有细菌生长的孔所对应的最低浓度为MIC值如存在一个跳孔现象时应读最高的MIC值,多于个跳孔时应重测B.5质呈控制测定每一批次受试菌前,应测定质控菌株大肠埃希氏菌ATCC25922对试验药物的MIC值,对配制的药物及药物稀释过程进行质量控制测定方法见B.4不同抗菌药物的质控范围见表B.3如果质控菌株的结果明显偏离质控范围,应查找原因重新配制药物进行测定或从指定菌种保藏机构更换新的标准菌株表B.3大肠埃希氏菌ATCC25922质控范围药物名称狐苯尼考多环素磺胺甲曙陛甲氧节陡磺胺间甲氟嚼淀恩诺沙星药物类别酚胺醇类四环素类MIC质控范闹,队gmL0.60.034.80.258320.0080.03磺胺类隆诺酮类5SCT7028-2022附录C（资料性）细菌耐药性判定参考值表C.1给出了细菌对不同抗菌药物的耐药性判定参考值。表C.细菌耐药性判定参考值折点,儿gmI中介48b9l382l-2药物类别药物名称敏感24l.3829.50。52560.5耐药8l6276476524酷胺醇类氟苯尼考四环素类排酸多q环素俄胺甲鹏陛甲氧桨吮俄胺类磺胺间甲氧啼淀恩诺沙星峰诺酮类,只适用链球菌,除盐酸多环素利磺胺甲晤坠甲制干陡外,其他药物暂无判定参考值b“”表示无折点6SCT7028-2022附录D（资料性）药物敏感性试验结果记录表表D1给出了药物敏感性试验中受试菌对不同抗菌药物MIC值及判定结果的记录信息表D.水产养殖动物细菌药物敏感性试验结果记录表采样时间采样点名称磺胺间甲氧密淀磺胺甲惩挫甲氧节陡舶酸多）q环素恩诺沙星腻苯尼考懒株绷号硝种名称MlC值队gmI.MIC值似gmI判定结果MIC值尸gmL判定结果MlC们似gmI.判定结果MIC值似gmL判定结果判定结果敏感率中介率耐药率7剧忌田尺曰叼中华人民共利国水产行业标准水产养殖动物细菌耐药性调查规范水产养殖动物细菌耐药性调查规范通则SCT7028-2022并兴兴中国农业出版社出版（北京市朝阳疯麦子店街18号楼）（l政编码:100125网址:www.ccap。）北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销并兴升开本880mm1230mm116印张0.75字数15千字2023年2月第1版2023年2月北京第1次印刷书号:161099185定价:24.00元 上版权专有侵权必究举报电话:（00）599426SO丁7028202