SN 0277-1993 出口粮谷中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2检验方法 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准S N 0 2 7 7 一 9 3出口 粮谷中黄曲霉毒素B l,B 2,G 1,G 2 检验方法液相色 谱法M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f a f l a t o x i n B,B 2,G i,G 2 i n c e r e a l s f o r e x p o r t-L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y1 9 9 3 一 1 2 一 2 8 发布1 9 9 4 一 0 5 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布中华人民共和国进出口 商品检验行业标准出口粮谷中黄曲霉毒素B 1,B 2,G 1,G 2 检验方法 液 相 色 谱 法s N 0 2 7 7 一 9 3M e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f a f l a t o x i n B B 2,GG2 i n c e r e a l s f o r e x p o r t-L i q u i d c h roma t o g r a p h y1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口粮谷中黄曲霉毒索B B,G G 2 检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于出G玉米中黄曲霉毒素 B B L.,G,.G:的检验。大米、小麦等粮谷中黄曲霉毒素的检i _.可参照采用本标准抽样和制样2.1 检验批 以不超if 2 0 0 t 为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。2.2 抽样数量2.2.1 袋装商.lip:按式(I)计算抽样袋数。丫.万式中:抽样袋数;N全批袋数 注:Q值取笠散.小数部分向前进位为整数2.2-2 散积商品 粮堆高度不超过 2 m,按粮堆面积划区设点。四角(距边线 I，。处)5个点。拣增加一 个取徉区，增设 3 个点。.。，1)以 5 0 m,为一个取样区，每区设中心及2.3 抽样工具2.3.1 单管取样器:不锈钢管。全长5 5 c m(包括手柄)，直径 1.5-2.5 c m，沟槽长度应超过袋对角线长度的一半.见图 1,2.3-2 双套管取样器:两根不锈钢管构成。全长 1 5 0 c m(包括手柄)，外管分成多个空腔，内管上有狭缝，内管直径 2.0 2.5 c m，见图22.3.3 取样铲:见图 32.3.4 分样板:见图 4,2.3.5 样品筒(袋):可密封。2.3.6 分样布或适用铺垫物。中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 3-1 2-2 8 批准1 9 9 4-0 5-0 1 实施s N 0 2 7 7 一 9 35 5-图 I 单管取样器1 2C口)(一 1 一 盯1 S ocm图 2 双套管取样器了目U嗡11:砂1 3-1 5亡m图 3 取样铲uv2 7 c m 图 4 分样板 抽祥方法1 袋装抽样.1.1 倒包抽样:从堆垛的各部位随机抽取2.2.1 规定的应抽样件数的1 0 Y O(每批一般不少于3，将 袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧 握袋底两角，提起约成4 5 0 倾倒拖 1 1n以上，使袋内货物全部倒出。检查货物的外观、气味、有无发霉、变质等，并查看袋内和袋间2.42.42.4柳粼2s N 0 2 7 7 一 9 3品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，立即将祥品倒入盛样器内.每袋抽取的样品量应基本一致。2.4.1 2 袋内 抽样:按2.2.1 规定的应抽样件数的9 0，在垛堆四 周上、中、下各层以曲 线形走向，随机抽取。将取样器(2.3.1)管槽朝下，从每袋一角依 斜对角 方向 擂人袋内，然后将管 槽旋转朝上，抽出取样器，立即将样品倒入盛样容器内.每袋抽 取的样品 量应与2.4.1.1 基本一致.每批样品总量应 不少于4 k g,2.4.2 散积抽样 按2.2.2 规定的 取样点，逐点 取样.取样时将取样器(2-3.2)垂直(略带倾斜)擂入取样点的粮堆内，旋转外套管，抽出 取样管，立即 将取出 的祥品倒入盛样器内.从各点中 抽取的样品量应墓本一致，每批样品总 量应不少于4 k g。2.4.3 大样缩分 袋装样品:集中袋内和倒包抽祥所取全部祥品，倒于分样布上，用分样板按四 分法缩分出样品不少于2 k g,置于 盛样器内，加封后标明标 记并及时送交实验室。散积样品:将抽取的全部样品，倒于分样布上，以下按上述袋装样品方法进行。2.5 试样制备 将样品按四分法缩分至1 k g，全部磨碎并通过2 0 目 筛，混匀，均分成两份，装入洁净的容器内，密封，标明标记。2.6 试样保存 将试样于 5 以下避光保存。注在抽样和制祥的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生黄曲.毒未含盆的变化。3 测定方法3-1 方法提要 试样中黄曲 霉毒素用二氯甲 烷提取，提取液经氧化 铝和硅胶柱净化以除去脂肪、色素及杂质，用 液相色谱法荧光检测器测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 所用试剂除注明外均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 二氯甲烷。3.2.2 苯.3.2.3 乙睛。3.2.4 正己烷。3.2.5 无水乙醚。3.2.6 丙酮。3.2.7乙酸。3.2.8 无水甲酸。3.2.9 无水甲醇。3.2.1 0 乙酸乙酷。3.2.1 1 甲苯。32.1 2 无水硫酸钠:经6 5 0 C 灼烧4 h,置于干燥器内备用。3.2-1 3 中性氧化铝:层析用，粒度 1 0 0 -2 0 0目，经 1 3 C活化2 h,置于千燥器内备用。3-2-1 4 硅胶:层析用，拉度6 0 -3 2 5 目，经1 1 0 C 活化2 h，并加1 写(二/m)水减活。3.2.1 5 黄曲霉毒素 B B G G z 标准品:含量均在”%以上。3.2-1 6 黄曲霉毒素标准溶液:称取黄曲霉毒素 B B G G:各 1.0 mg，分别以苯一 乙睛(9 8 十2)馄合s!v 0 27 7一 93溶荆定容于1 0 0 m L徐色容最瓶中，配成标准储备溶液，浓度均为I f)F 9 9 i 与 .3.2.1 6 Af l a t o x i n s t a n d a r d s o l u t i o n s;We i g h 1.0 t n g o f e a c h a f l a t o x i n B,.B,.G,.G,a n d d is s o l v e s e p a-l a t e l y w i t h b e n z e n e-a c e t o n i t r il e(9 8-2)mi x t u r e i n 1 0 0 mL b r o w n v o l u m e t r ic f l a s k s a n d d il u t e t o、-l u m e a s t h e s t a n d a r d s t o c k s o l u t io n s.T h e c o n c e n t r a t i o n o f e a c h s t o c k s o l u t io n i s 1 0 p m/m L.Mix t h es t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n s in a 1 0 mL b r o w n v o l u m e t r i c f l a s k w i t h t h e v o l u me r a t io o f 4:3 1 2:1(B,:B:G,:G,)a s t h e m i x e d s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n.T h e c o n c e n t r a t i o n s o f d i f f e r e n t a f l a t o x i n s in t h i s mi x e ds t a n d a r d s t o c k s o l u t io n a r e B,:4.0 p m/m L,B,3.0 p m/m L.G,:2.0 Fa m/m L,G,:1.0 Fa m/m L r e s p e c-t i v e l y.A c c o r d i n g t o t h e r e q u i r e m e n t.p r e p a r e a mi x e d s t a n d a r d w o r k i n g s o l u t i o n o f a p p r o p r i a t e c o n c e nt r auon.3.3 A p p a r a t u s a n d e q u i p m e n t3.3.1 L i q u i d c h r o ma t o g r a p h,e q u ip p e d w i t h f l u o r e s c e n c e d e t e c t o r.3.3.2 G r i n d e r.I 1 3 S h a k e r.I 1 4 R o t a r y e v a p o r a t o r w i t h 1 5 0 m L.2 5 0 m l.r o u n d-b o t t o m f l a s k.3.3.5 G l a s s v a c u u m f i l t r a t io n d e v i c e.3.3.6 F i l t r a t i o n me mb r a n e,F o r o r g a n i c s o l v e n t.0.4 5 p m3.3.7 Mi c r o p o r o u s m e mb r a n e f i l t e r:F o r o r g a n i c s o l v e n t,0.5 p m.3.3.8 C h r o m a t o g r a p h ic c o l u mn:3 0 0 m m X2 0 m m(id)g la s s c o l u m n w i t h s t o p c o c k.P a c k t h e c o l u mni n t h e f o l l o w i n g o r d e r:a s m a l l p l u g o f g l a s s w o o l a t t h e b o t t o m,5 g o f a n h y d r o u s s o d i u m s u l f a t e,1 0 go f s i l ic a g e l,5 g o f n e u t r a l a l u mi n a.1 0 g o f a n h y d r o u s s o d iu m s u l f a t e.t h e r e a g e n t s b e i n g mo is t e n e dwit h n-h e x a n e wh i l e f i l l e d i n.3.3.9 S a m p l e v i a l:2 mL,w i t h t i g h t c o v e r.3.4 P r o c e d u r e.3.4.1 E x t r a c t i o n We i g h 3 0 g(a c c u r a t e t o 0.1 g)o f t h e m i x e d a n d g r o u n d t e s t s a m p l e i n t o a 2 5 0 mL E r le n me y 9S N 0 2 7 7 一9 3f l a s k wit h s t o p p e r,a d d e x a c t l y 1 0 0 m L o f d i c h l o r o me