SCT 7239-2020 三疣梭子蟹肌孢虫病诊断规程.pdf

SC/T7239-2020三疣梭子蟹肌孢虫病诊断规程1范围本标准给出了三疣梭子蟹肌孢虫病(microsporidiosis caused by Ameson portunus)诊断所需试剂和材料、器材和设备、临床症状，规定了三疣梭子蟹肌孢虫病的采样、组织病理学检测、PCR检测和综合判定。本标准适用于三疣梭子蟹肌孢虫病的鉴定，用于三疣梭子蟹肌孢虫引起的相关疾病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。下列文件对于本文件的应福公尺D2规范性引用文件a的本适用于文件可少的凡是不注日期的用文件，共最新版本包括所有的修改单)适开GB/T6682分析实致室用水规格验去GB/T28630.合征WSD诊断规程第4部分组织病理学SC/T7103K生动地检疫3缩略语下列缩略语适年本件dNTPs:脱氧核核苷三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate)PBS:磷酸缓冲盐溶液(phosphate6 ffer salineEDTA:PCR:聚合酶链式友应polymerase chain reactionPercoll:PercoTaq:水生柄热菌了SEARCH CENTESDS:十二烷基硫Tris:三（羟基甲基4试剂和材料4.1除特别说明外，分析所用武剂均为分析纯实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格4.2DNA提取相关试剂：100%乙醇、95%乙醇、75%乙醇s、HC1、EDTA、NaCl、SDS、蛋白酶K、RNase A(100mg/mL)、苯酚、氯仿、异戊醇4.3PCR检测相关试剂：DNA分子量标准、PBS、Tag DNA聚合酶(5U/L)、PCR反应缓冲液(1OX,20mmol/LMg2+)、dNTPs(2.5mmol/L)、上样缓冲液(6)、电泳缓冲液。常规PCR引物(10umol/L):MI1F:TGGCGACCAGTTCTAAG和MI545R:AAGCCGAACAATCCACA;套式PCR引物（第一轮扩增为常规PCR引物，第二轮扩增为MI230F:CARATAGATAGGGGCAGTAGC MI426R:ATCGGTCACTGCTAGAACTAC).4.4组织病理学检测相关试剂：中性树胶、DAFA固定液、苏木精染色液、1%伊红储存液、1%焰红储存液、伊红焰红染色液、粘片剂、100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、50%乙醇。4.5组织病理学检测用阳性对照为确诊三疣梭子蟹肌孢虫病且显示明显病理变化的蟹肌肉组织切片；PCR检测用对照：阳性对照为确诊三疣梭子蟹肌孢虫病的蟹肌肉组织，一80保存，阴性对照为经套式1