DB15T 2045-2020 甜菜组培快繁技术规程.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 20452020 甜菜组培快繁技术规程 Technical code of practice of culture and rapid propagetion on sug arbeet 2020-12-24 发布 2021-01-24 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 20452020 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本文件主要起草人：白晨、李晓东、张惠忠、张自强、王良、韩平安、张必周、赵尚敏、付增娟、鄂圆圆、郑文哲、张辉。DB15/T 20452020 1 甜菜组培快繁技术规程 1 范围 本文件确立了培养基、外植体的获取、灭菌与萌发、无菌苗获取、甜菜组培扩繁和移栽等技术要求。本文件适用于甜菜组培快繁技术操作的全过程。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 种球 bulb 甜菜的果实。3.2 腋芽 axillary bud 发生于叶的近轴面与茎的夹角处的定芽。3.3 花序 inflorescence 花序轴及其着生在上面的花的通称。4 培养基 4.1 琼脂粉培养基 用于甜菜种球的萌发。成分为（1 L）：琼脂粉7.5 g。4.2 诱导分化培养基 用于甜菜无菌苗诱导分化培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA（萘乙酸）0.7 mg，KT（激动素）1.2 mg，琼脂粉7.5 g。4.3 继代培养基 DB15/T 20452020 2 用于甜菜无菌苗的继代培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA 0.5 mg，KT 0.4 mg，琼脂粉7.5 g。4.4 生根培养基 用于甜菜无菌苗的生根培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA 1.2 mg，琼脂粉7.5 g。5 外植体的获取 5.1 种球的获取+选取健康、籽粒饱满、外观完好的甜菜种球。5.2 腋芽的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取幼嫩主枝或侧枝。5.3 花序的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取现蕾花序的末端约20 cm。6 灭菌与萌发 6.1 灭菌前准备 制备无菌水、75%酒精，0.1%升汞，80%次氯酸钠。6.2 种球消毒 将甜菜种球磨光，用百菌清（烟剂型）密闭熏蒸24 h后，在超净工作台中移至灭过菌的三角瓶中，随后用75%酒精消毒2 min，无菌水漂洗3 次，接着用0.1%的升汞处理20 min，无菌水漂洗3 次，最后将消毒后的种子接种于琼脂粉培养基上，每三角瓶（100 ml）25粒。6.3 腋芽消毒 取回的主枝或侧枝剪成保留12个腋芽小段，装入烧杯放在自来水下冲洗1 h，冲洗后在超净工作台上用75%酒精消毒1 min，无菌水洗3 次，接着用80%次氯酸钠消毒12 min，无菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中，每三角瓶（100 ml）6个小段。6.4 花序消毒 室外取回的花序放入烧杯中，放到自来水下冲洗花序1 h，冲洗后将花序切成1.5 cm左右长度的花序小段，在超净工作台上将花序小段首先用75%酒精消毒1 min，无菌水洗3 次，接着用80%次氯酸钠消毒2 min3 min，无菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中，每三角瓶（100 ml）6个小段。7 无菌苗获取 7.1 种球成苗 DB15/T 20452020 3 置于组培室培养，23 条件下进行培养，7 d10 d即可萌发。待芽长 2.0 cm2.5 cm时，带子叶一起切下，接种到新的继代培养基中。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。培养20 d25 d成苗。7.2 腋芽成苗 在组培室内培养，培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。腋芽培养20 d25 d即可长出新芽，切下新芽接种到新的继代培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。7.3 花序成苗 在组培室内培养，培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间13 h。花序培养30 d40 d即可长出新芽。切下新芽接种到新的继代培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。8 甜菜组培扩繁 8.1 诱导分化培养 在超净工作台上，选取健壮无菌苗，接种于分化培养基中进行分化诱导培养。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时长为14 h。8.2 继代培养 当诱导的丛生芽长到约1 cm2 cm，在超净工作台中将丛生芽分切为单苗，接种于继代培养基中进行继代培养。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。8.3 生根培养 将生长健壮的丛生芽分切成1 cm2 cm单芽，接种到生根培养基中。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。20 d30 d即可诱导出新生根。9 移栽 9.1 炼苗 去掉封口膜，在组培室锻炼2 d3 d。9.2 室内移栽 选择根系生长健壮的组培苗从三角瓶中移出，用自来水浸泡根部12 h，洗净根部残留培养基，移栽到花盆中（育苗土由蛭石和田园土构成，二者比例为1:1），并遮阳，定期浇水，室内培养7 d14 d。9.3 大田移栽 待盆栽幼苗生长至4-6片真叶时，平均气温稳定在10 以上时，选择早上或者傍晚移入大田。