DB21T 1688-2008 生鲜蛋中三聚氰胺的测定.pdf

DB21/T1688-2008生鲜蛋中三聚氰胺的测定1范围本标准规定了生鲜蛋中三聚氰胺残留检测的制样和酶联免疫(ELISA)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)测定方法。本标准适用于生鲜鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋中三聚氰胺残留检测。本标准中的酶联免疫法为筛选方法，筛选结果为阳性的样品需要用仲裁法确证，高效液相色谱法和气相色谱-质谱法为定量方法，其中气相色谱-质谱法为仲裁法。酶联免疫法定量限为0.20mg/kg,高效液相色谱法定量限为0.20mg/kg,气相色谱-质谱法定量限为0.10mg/kg。2规范性引用文件下列文件的条艺通过本标的恐面疗花萨推数公期的闲文件，其随后所有的修改单（不包括勘关的内容）或牙版不适用于木标准，然鼓根据本准达成协议的各方研究是否可使用这女件最顺本。凡是不注日期的引用文件，其最新服本憩于标准GB/T6682坎验室用水规则和试验DB21开3样3.1试样的制备取适量新鲜的高蛋，将蛋清和蛋黄搅拌使均匀。3.2试样的保存-20以下贮存。4酶联免疫法4.1原理本方法基于酶联免疫法中的竞争性测定法原理，通过样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，除去未结合的三聚氰胺酶标记物后，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质，加终止液后在450m下读取各微孔吸光度值。吸光度值与样品中的三聚氰胺含量成反比。4.2试剂和溶液4.2.1除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GB/T6682二级水的规定。4.2.2三聚氰胺试剂盒（附系列标准品溶液，酶标记物，清洗液、底物，终止液，说明书）。4.2.3正己烷(CH)4.2.410%甲醇/20 mMPBS:称取0.62 gNaH-P0,H0,5.73 gNa-HP0,12H0和9gNaC1用蒸馏水溶解，并定容至1000mlL,取此溶液900ml,加入100mL甲醇混匀即得。4.3仪器和设备4.3.1酶标仪（带450nm滤光片）。4.3.2涡旋混合器。4.3.3冷冻离心机。4.3.4微量加样器：20mL、50L、100叫L、150叫、250叫L。DB21/T1688-20085.2.100.058mo1/L乙酸铅溶液：准确称取乙酸铅22g于1000mL容量瓶中，用水溶解后定容至刻度。5.2.1120%甲醇溶液：准确量取20mL甲醇(5.2.4)于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。5.2.125%氨化甲醇溶液：准确量取5mL氨水(5.2.7)于100mL容量瓶中，用甲醇(5.2.4)定容至刻度，现用现制。5.2.13离子对缓冲溶液：称取2.02g庚烷磺酸钠(5.2.5)和2.10柠檬酸(5.2.6)于1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。5.2.14三聚氰胺标准储备液：精确称取约50mg三聚氰胺标准品(5.2.1)，精确到0.0001g,置50ml棕色容量瓶中，用20%甲醇溶液(5.2.11)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4避光保存。5.2.15三聚氰胺标准中间液：用移液管准确吸取5.00mL标准贮备液(5.2.14)于50mL棕色容量瓶中，用20%甲醇溶液(5.2.11)定容至刻度，配成浓度为100g/mL的标准中间液。5.2.16三聚氰胺标准工作液：分别准确吸取0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、10.00mL的标准中间液(5.2.15)于100mL容量瓶中，用20%甲醇溶液(5.2.11)定容至刻度，配制浓度为0.50、1.00、2.50、5.00、10.00g/mL的标准工作液。5.3仪器和设备5.3.1高效液相色谱仪（配紫外险测器）5.3.2色谱柱：SB-C或SB-C柱5.3.3分析天乎5.3.4天平智地方标准全文公刀感量5.3.5组织匀浆5.3.6浆杯5.3.7离心机5.3.8离管：DB2150m5.3.9混合型阳高子交换固相萃取柱：60mg/3mL。5.3.10固相本取装置5.3.11氮气吹干仪5.3.12涡旋混合器。5.3.13振荡器。5.3.14微孔滤膜：0.45m。5.4测定5.4.1提取取(20.05)g试料(3.1)，置50mL离心管中，依次加入10mL三氯乙酸溶液(5.2.9)、2mL乙酸铅溶液(5.2.10)、3ml三氯甲烷(5.2.2)，涡旋30s使其充分混匀，中速振荡提取10min,10000r/min离心5min,取上清液备用。5.4.2净化依次用3mL甲醇(5.2.4)、3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱(5.3.9)，取备用上清液(5.4.1)全部过柱，再依次用3mL水、3mL甲醇(5.2.4)淋洗，抽干。用5mL氨化甲醇溶液(5.2.12)洗脱，收集洗脱液置试管中。于60下用氮气吹干，加入1.00mL甲醇溶液(5.2.11)于试管中，涡旋10s,用微孔滤膜(5.3.14)过滤，滤液供高效液相色谱仪分析。5.4.3测定5.4.3.1色谱条件色谱柱：SB-C或SB-C柱，粒度5m,25cm4.6mm(TD)。流动相：900mL离子对缓冲溶液(5.2.13)：100mL乙睛(5.2.3)，摇匀。检测波长：240nm。3