ICS65.020.30B40DB13河北省地方标准DB13/T2051—2014幼羔体外胚胎生产技术规程2014-07-07发布2014-07-31实施河北省质量技术监督局发布DB13/T2051—2014I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河北农业大学提出。本标准起草单位：河北农业大学、河北省牛羊胚胎工程技术研究中心。本标准主要起草人：田树军、孙树春、金东航、陈晓勇、敦伟涛、贾日东、孟娜娜、刘梦鹤、王春霞、李捷鑫。DB13/T2051—20141幼羔体外胚胎生产技术规程1范围本标准规定了幼羔体外胚胎生产的供体选择、幼羔超数排卵、采集卵丘卵母细胞复合体、体外成熟培养、体外受精、体外胚胎发育培养和胚胎质量检测。本标准适用于利用幼龄羔羊作为供体，进行诱导卵泡发育、活体采集卵丘卵母细胞复合体及体外胚胎生产及科学研究。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1674-2008牛羊胚胎质量检测技术规程3术语及定义3.1供体出生后4～10周龄的雌性羔羊。3.2诱导卵泡发育供体经过外源促性腺激素处理，使其卵巢较在自然状态下有大量卵泡发育的技术。3.3体外胚胎从供体所采集的卵丘卵母细胞复合体经体外成熟、体外受精及体外胚胎发育培养所获得的胚胎。4供体选择要求健康、体况发育良好、系谱资料完整清楚、出生4～10周龄的雌性羔羊。5诱导卵泡发育5.1所使用的生殖激素促卵泡素（FSH）和孕马血清促性腺激素（PMSG）。5.2诱导卵泡发育方法DB13/T2051—20142间隔12h对供体连续4次进行等剂量肌肉注射FSH。FSH的总剂量：FSH（宁波市三生药业有限公司）为280～300IU，FSH（加拿大BIONICHE）为160～200mg。在第一次注射FSH的同时，肌肉注射PMSG500IU。6采集卵丘卵母细胞复合体6.1采集时间于最后一次注射FSH后的12h～16h。6.2采卵前准备6.2.1采卵室及检卵室准备采集前，先将采卵室及检卵室打扫干净，用来苏水等消毒液泼洒地面，关闭门窗，紫外灯照射消毒。采卵室及检卵室适宜温度为20℃～25℃。6.2.2手术器材及药品准备6.2.2.1手术器材6.2.2.1.1手术器械（1套）：手术刀柄1把，20号刀片，直尖手术剪2把，无齿手术镊1把，有齿手术镊1把，止血钳4把（2把弯止血钳、2把直止血钳），持针钳2把（握式持针钳或钳式持针钳），创巾钳6把；止血纱布6块（以上器械用0.1％新洁尔灭溶液在解剖盘内浸泡消毒30min或高压消毒15～20min...
