DB42T 792-2012 猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测方法.pdf

ICS11.220B 41备案号：DB42湖北省地方标准DB42/T 7922012猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测方法Method of the latex agglutination for the detection of antibodies againstswine epidemic encephalitis2012-01-06 发布2012-03-01 实施湖北省质量技术监督局发 布DB42/T 7922012I目次前言.II引言.III1范围.12术语和定义.13实验原理.14实验条件.15实验材料.16样品处理.17实验方法.28结果判定.29注意事项.2附录 A.3DB42/T 7922012II前言本标准按 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由华中农业大学提出。本标准由湖北省农业厅归口。本标准起草单位：华中农业大学动物医学院、武汉科前动物生物制品有限责任公司、湖北省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：曹胜波、金梅林、陈焕春、宋念华、黄少梅、李淑云、董晓辉。DB42/T 7922012III引言乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是一种急性自然疫源性虫媒传播的人畜共患传染病，可对人类的健康造成极大的危害，被卫生部列为乙类传染病。猪是乙型脑炎主要的传染源之一，可与蚊虫一起形成循环传播，严重危害养猪业。国家农业部将猪乙型脑炎归于二类动物疫病。为有效预防和控制乙型脑炎，在加强预防和免疫的同时，临床上急需一种特异、敏感、快速、便于操作的诊断方法，以用于检测猪乙型脑炎病毒的抗体。DB42/T 79220121猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测方法1范围本标准规定了猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测的方法的术语和定义、实验原理、实验条件、实验材料、样品处理、实验方法、结果判定和注意事项等。本标准适用于猪血清、全血和乳汁中猪乙型脑炎病毒抗体的检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。乳胶(latex)：泛指聚合物微粒分散于水中形成的胶体乳液。3实验原理乳胶凝集试验也称间接乳胶凝集试验，是将抗原或抗体结合在聚苯乙烯乳胶微粒表面，然后与相应的抗原或抗体作用，在电解质存在的适宜条件下，微粒发生凝集，从而观察反应的结果。4实验条件4.1实验室实验操作宜在常温（18 25）进行。4.2仪器台式低温高速离心机、微量移液器、冰箱、玻片、吸头。4.3人员注意个人防护和环境保护。5实验材料5.1猪乙型脑炎病毒致敏的乳胶抗原：为乳白色均匀胶状液，如出现分层，使用前轻轻摇匀。5.2猪乙型脑炎病毒阳性对照血清。5.3阴性对照血清。5.4样品稀释液配制见附录 A。6样品处理6.1血清DB42/T 79220122按常规方法采血及分离血清，血清宜清亮。6.2全血用针尖刺破待检动物耳静脉，用吸头吸取血液一滴，置于载玻片上。6.3乳汁按常规方法采集乳汁，经3000 r/min离心10 min，取上清液作样品。7实验方法取样品(血清、全血或乳汁)、阳性对照血清、阴性对照血清、稀释液各一滴，分别置于玻片上。各加乳胶抗原一滴，混匀并晃动1 min2 min，于3 min5 min内观察结果。8结果判定8.1凝集反应可能出现以下几种结果：a)“+”：全部乳胶凝集，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明；b)“+”：大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊；c)“+”：约 50乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊；d)“+”：有少许凝集，液体略显混浊；e)“-”：液滴呈原有的均匀乳状。8.2成立条件30 sec60 sec 内出现如下结果，试验方可成立：阳性对照样品与乳胶诊断液进行乳胶凝集反应，应出现“+”以上凝集；阴性对照样品与乳胶诊断液进行乳胶凝集反应，应不凝集。8.3结果判断30 sec60 sec 内出现“+”以上凝集，判为阳性；30 sec60 sec 内液滴呈原有的均匀乳状为阴性。9注意事项实验过程中注意做好个人的生物安全防护措施，废弃物应做无害化处理。DB42/T 79220123AA附录A（规范性附录）试剂配制A.1样品稀释液的配制氯化钠（NaCl）8.0 g氯化钾（KCl）0.2 g磷酸氢二钠（Na2HPO312H2O）2.9 g磷酸二氢钠（KH2PO4）0.2 g硫柳汞0.2 g加蒸馏水或去离子水定容至1000 mL即可，置2 8 保存备用。B_