DB15T 1713-2019 “内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程.pdf

ICS 67.080.20 B 31 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 17132019 “内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种 生产技术规程 Technical Regulations for Production of Auricularia auricula Species in Daxingan Ling Mountains in Inner Mongolia 2019-11-05 发布 2019-12-05 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 17132019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 一级菌种.1 3 液态菌种.1 4 三级菌种.2 DB15/T 17132019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。本标准由内蒙古大兴安岭重点国有林管理局提出。本标准由内蒙古自治区林业标准化技术委员会（SAM/TC 18）归口。本标准起草单位：中国内蒙古森林工业集团有限责任公司、内蒙古大兴安岭林业科学技术研究所、内蒙古自治区林业科学研究院、根河市满归森华食用菌种植农民专业合作社、内蒙古克一河林业局、内蒙古阿里河林业局、阿荣旗卫生和健康委员会、根河市利民食用菌产销专业合作社、内蒙古自治区园艺研究院、内蒙古自治区标准化院。本标准主要起草人：赵旭、李杰、李慧、张幼军、王志臣、胡世德、李世繁、韩怀彦、李楠楠、姜娜、余涛、韩立明、印迪、张娟。DB15/T 17132019 1“内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了“内蒙古大兴安岭黑木耳”一级菌种、液态菌种、三级菌种。本标准适用于“内蒙古大兴安岭黑木耳”各级菌种生产。2 一级菌种 2.1 常用配方 水1000 ml、麦麸50 g、去皮马铃薯200 g、蛋白胨2 g、维生素B2 10 mg、磷酸二氢钾2 g、葡萄糖20 g、硫酸镁0.5 g1 g、琼脂10 g20 g。2.2 灭菌 压力升至0.11 MPa0.13 MPa,稳定25 min30 min，温度降至80 以下，取出试管摆斜面。2.3 接种培养 在无菌环境下进行操作，25 恒温暗培养10 d15 d。3 液态菌种 3.1 摇瓶制作 3.1.1 常用配方 水1000 ml、麦麸50 g、去皮马铃薯200 g、蛋白胨2 g、维生素B2 10 mg、磷酸二氢钾2 g、葡萄糖10 g、硫酸镁2 g、赤砂糖15 g、消泡剂1滴。3.1.2 灭菌 压力升至0.11 MPa0.13 MPa,稳定25 min30 min，温度降至90 以下，取出三角瓶。3.1.3 接种培养 在无菌环境下进行，每100 ml摇瓶中加入2 3 一级菌种块710块，120 r/min150 r/min，25 恒温暗摇7 d。3.2 液态菌罐 3.2.1 常用配方（罐容量 600L，接菌数 25000 袋30000 袋）菌罐加水2/3，面粉0.67%、豆粉2650 g、赤砂糖4000 g、消泡剂100 ml、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%。DB15/T 17132019 2 3.2.2 制作过程 按下列步骤完成：a)菌罐内注水 2/3，加温至 40 时适当放出水与培养基一起用搅拌机搅拌均匀；b)水温到 90 后倒入搅拌均匀的培养基、消泡剂，菌罐盖封紧，加热至 121 123 后保持50 min；c)菌罐夹层里注入凉水降温，罐内温度降到 28 时开始接菌，接菌前房间应净化杀菌；d)菌罐的注料口处用酒精棉圈套好点燃棉圈，在燃烧状态下快速倒入两瓶三角瓶菌种，封闭注料口熄灭火焰；e)菌罐温度 24 26，洁净培养 4 d6 d；f)每天观察菌球的生长状态是否正常，正常的继续培养，不正常的终止培养。4 三级菌种 4.1 常用配方 柞桦木屑79%、麦麸16%、豆粉3%、白灰1%、石膏1%。4.2 制作 培养基选料和配制上应把握好以下各点：a)边搅拌边加水，搅拌均匀后含水量 6062%，PH 值在 7.58.5，装袋灭菌；b)菌包要装实，上下松紧一致，料面平整无散料，袋料紧贴，料袋无褶皱。4.3 灭菌 高温蒸汽灭菌要求：a)常压蒸汽灭菌：温度 100 保持 8 h10 h，焖锅 2 h3 h；移入冷却室冷却；b)高压灭菌：温度 121 123 保持 2.5 h3 h；自然降温至 80 以下，出锅冷却。4.4 接菌 4.4.1 基本要求 基本要求包含如下内容：a)接菌室的基本要求：接菌室设在灭菌室与培养室之间，高 2.5 m，接菌室外设缓冲间，供工作人员换衣帽鞋等；接菌室墙壁、屋顶、地面平整、光滑、密封，便于彻底消毒，接菌室与缓冲室上方各装一只 30 W 的紫外线灯，接种前后照射 30 min60 min；b)接种人员卫生要求：工作人员取得健康合格证后方可上岗；进入接菌室时应穿戴整洁的工作服，帽、鞋、戴胶套，不得化妆、佩戴饰品、喷洒香水。4.4.2 接菌前准备 按以下步骤完成：a)接菌室清扫卫生后，将菌种、消毒棉、丁腈手套、海绵塞、接种工具等所用物品全部拿入室内，打开紫外线灯后人员退出；b)1 h 后，关闭紫外线灯，打开排气设备 10 min 后，工作人员进行接菌。DB15/T 17132019 3 4.4.3 接菌 按以下步骤完成：a)先用酒精浸泡后的消毒棉擦拭接菌枪头，在酒精灯火焰上均匀烧片刻，开始接菌，每段菌袋注入液态菌量准确控制在 15 ml20 ml；b)在接菌过程中，每完成一筐，应在酒精灯火焰上消毒接菌枪，避免菌枪被杂菌污染；c)接菌枪枪头探进袋底，准确注入 15 ml20 ml 液态菌后，快速收回，塞好棉塞，操作人员做到相互配合、动作连贯。4.5 培养环境要求 应符合以下要求：a)接菌后的三级菌袋要迅速移入培养车间，车间上、下方设有通风口、换气窗；b)三级菌袋整齐的摆放在培养架上，保证菌袋间通气均匀；c)培养初期菌袋间温度控制在 25 28；d)培养中期（11 d20 d）袋温应该控制在 23；e)培养后期（菌丝长满 2/3 袋）袋温应该控制在 20 左右；f)培养过程中，发现有杂菌感染的菌袋应取出，另行处理；g)每天上午打开换气窗通风 30 min，保证发菌均匀；h)三级菌袋培养过程中，保证黑暗保温、定时通风。4.6 优质菌种判定 判定应符合以下标准：a)菌丝洁白无杂菌，棉塞纸盖均无霉点，菌丝长满袋后，表面分泌茶色液滴，有少数原基形成，可视为正常；b)打开海绵塞有黑木耳独特的香味，无霉味和酸臭味；c)从菌袋中随机挖取一块菌种，成块而有韧性，不松散；d)菌种块接于新的培养基上，在 25 下培养 24 h28 h 菌种块萌发正常。_