DB34T 1363-2011 饲料中喹烯酮的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13632011 饲料中喹烯酮的测定-高效液相色谱法 Determination of Quinocetone in feed High performance liquid chromatography 文稿版次选择 2011-03-16 发布 2011-04-16 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 13632011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：刘发全、丁在亮、许世富、刘红云、明文庆、张莉、蔡东东。DB34/T 13632011 1 饲料中喹烯酮的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中喹烯酮检验的制样和高效液相色谱（HPLC）测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中喹烯酮的定量检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 采样，选取有代表性的饲料样品至少 500，四分法缩减至 100，磨碎，全部通过 0.42 mm 分析筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。4 原理 试样中的喹烯酮先用甲醇溶液提取，固相萃取小柱净化，用高效液相色谱仪测定，以外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 除特殊说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。5.2 喹烯酮标准品：纯度 98.0。5.3 乙腈，色谱纯。5.4 甲醇，色谱纯。5.5 磷酸。5.6 提取液：甲醇:水=80:20。5.7 淋洗液 1：0.02 mol/L 盐酸：移取 1.67 mL 盐酸用水定容至 1000 mL。5.8 淋洗液 2：0.1 mol/L 盐酸：移取 8.33 mL 盐酸用水定容至 1000 mL。5.9 洗脱液：甲醇:水=40:60。5.10 固相萃取柱：中性氧化铝，150 mg/6mL。5.11 喹烯酮标准贮备液：500 g/mL。准确称取 100 mg 喹烯酮标准品(精确至 0.00002 g)于 200 mL棕色容量瓶中，用洗脱液（5.8）常温超声溶解，定容至刻度并摇匀，配制成标准贮备液，贮于 4 冰箱中，有效期 90 天。DB34/T 13632011 2 5.12 喹烯酮标准工作溶液：分别吸取（5.10）中标准贮备液 0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mL于 100 mL 棕色容量瓶中，用洗脱液（5.8）溶液定容，配制成 0、2.50、5.00、10.0、20.0、50.0、100 g/mL 标准工作溶液。5.13 流动相：乙腈：甲醇：水=25:20:55，每 1000 ml 混合液中加 2 mL 磷酸。5.14 滤膜：0.45 m 有机滤膜。6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2 分析天平：感量 0.0002 g。6.3 真空泵(0.1 Mpa)。6.4 恒温水浴锅。6.5 旋转蒸发仪。6.6 离心机：5000 r/min。6.7 超声波清洗机。6.8 饲料粉碎机 7 测定步骤 7.1 条件 测定过程应在避光操作及使用棕色容器。7.2 提取 准确称取适量试样(配合饲料 5 g，浓缩饲料 2 g，复合预混合饲料 1 g，精确至 0.0002 g 于离心管中，加入甲醇水溶液（5.8）50 mL，超声提取 30 分钟后，4000 r/min 离心 10 min，上清液过滤备用。7.3 净化 分别用 3 mL 甲醇和水对SPE（5.9）小柱进行活化，取提取液（7.2）3 ml 过小柱，控制过柱速度不超过 1.0 mL/min，分用 3 mL 淋洗液 1（5.6）、淋洗液 2（5.7）淋洗小柱，吹干，用 3 ml 甲醇：水溶液（5.8）洗脱，收集洗脱液过 0.45 m 滤膜(5.13)，上机测定。7.4 色谱条件 色谱柱：C18(4.6250 mm，5 m)，或者相当色谱柱；检测波长：260 nm；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 L。7.5 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8 结果计算与表述 DB34/T 13632011 3 按照下式计算试样中喹烯酮的含量：1000mAs1000VCsAX=.(1)式中：X 试样中喹烯酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V 定容体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法饲料中喹烯酮检测限为 2 mg/kg。9.2 准确度 本方法在添加浓度为 4 mg/kg 的回收率为 80120。9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。DB34/T 13632011 4 A A 附 录 A（资料性附录）喹烯酮标准品高效液相色谱图 图A.1 喹烯酮标准品高效液相色谱图 _