DB33T 702-2008 食品中纳他霉素的测定.pdf

ICS 67.040 C 53 浙江省地方标准 DB33DB33/T 702-2008 食品中纳他霉素的测定 Determination of the Natamycin capacity in foods 2008-07-07 发布 2008-08-07 实施浙江省质量技术监督局 发布 DB33/T 7022008 5 前 言 本标准附录A为资料性附录。本标准由浙江省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：浙江方圆检测集团股份有限公司。本标准主要起草人：何乔桑、廖上富、黄丽英、刘敏芳。DB33/T 7022008 5 食品中纳他霉素的测定 1 范围 本标准规定了食品中纳他霉素测定的液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。本标准适用于食品中纳他霉素的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 第一法 液相色谱法 3 原理 试样用甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，反相高效液相色谱测定，保留时间定性，外标法定量。4 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 提取液：甲醇水19。4.3 纳他霉素标准样品：含量99%。4.4 纳他霉素标准储备溶液：精确称取0.0500g纳他霉素于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，纳他霉素含量为1.00mg/mL。4.5 纳他霉素标准工作溶液：移取一定量标准溶液（4.4），用流动相稀释成不同浓度的标准工作溶液。5 仪器 5.1 液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。5.2 分析天平：感量 0.1mg 和 0.01g 各一台。5.3 组织捣碎机。5.4 涡旋混合器。5.5 固相萃取装置。5.6 氮吹仪。5.7 高速台式离心机：转速12 000r/min。5.8 固相萃取柱：Oasis HLB（6mL，200mg）或相当者，使用前分别用 10mL 甲醇和 10mL 水预处理，保持柱体湿润。6 测定步骤 DB33/T 7022008 5 6.1 提取 6.1.1 固态样品：称取 2g 试样(精确至 0.01 g)于 50mL 离心管中,准确加入 20.0mL 提取液（4.2），涡旋混合 2min，于 12000 转/min 离心 10min,移取 l0.0mL 上清液用于净化。6.1.2 液态样品：称取 5g 试样(精确至 0.01 g)用提取液（4.2）定容至 50 mL，摇匀,于 12000 转/min离心 10min,移取 l0.0mL 上清液用于净化。6.2 净化 取上述提取液过固相萃取柱，使提取液以2 mL/min的流速通过，用10mL水清洗固相萃取柱，弃去流出液。用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于试管中，于40氮气吹干，准确加入0.5mL流动相，涡旋混合30秒，过0.22m滤膜，待测。6.3 液相色谱条件 6.3.1 色谱柱：C18 柱，5m,200mm4.6mm，或相当者；6.3.2 柱温：30；6.3.3 进样量：20L；6.3.4 流动相：甲醇水=7030；6.3.5 流速：1mL/min；6.3.6 检测波长：304nm。6.4 测定 按6.3液相色谱条件，测定样品和标准工作溶液，根据保留时间定性，以色谱峰面积按外标法定量。纳他霉素标准溶液的液相色谱图参见附录 A.1。6.5 结果计算 样品中纳他霉素的含量按式（1）进行计算。）（11000100012=VVmVcX 式中：X 样品中纳他霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c 色谱测试液中纳他霉素的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 样品定容体积，单位为毫升（mL）；V1 总提取液体积，单位为毫升（mL）；V2 净化用提取液体积，单位为毫升（mL）；m 样品质量，单位为克（g）。注：计算结果保留小数点后一位小数。6.6 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。6.7 检出限 本方法最低检出浓度为 0.5 mg/kg。6.8 准确度 在线性范围内添加不同浓度的回收率在 80%110%之间。DB33/T 7022008 5 第二法 液相色谱-串联质谱法 7 原理 试样用甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。8 试剂 同 4。9 仪器和设备 9.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。9.2 其他仪器同 5。10 测定步骤 10.1 提取 同6.1 10.2 净化 同6.2。用流动相适当稀释。10.3 测定 10.3.1 液相色谱条件 10.3.1.1 色谱柱：C18 柱，1.7m,50mm2.1mm，或相当者；10.3.1.2 柱温：30；10.3.1.3 进样量：10L；10.3.1.4 流动相：甲醇水=6040；10.3.1.5 流速：0.2mL/min；10.3.2 质谱条件 10.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）；10.3.2.2 扫描方式：正离子扫描；10.3.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）；10.3.2.4 雾化气（Desolvation Gas）、锥孔气（Cone Gas）为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度；10.3.2.4 定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压和碰撞能量见表 1。表 1 纳他霉素的质谱参数 定量离子对（m/z）定性离子对（m/z）采集时间（s）去簇电压（V）碰撞能量（V）666/503 0.100 23.00 14.00 666/503 666/485 0.200 22.00 13.00 10.3.3 液相色谱-串联质谱测定 10.3.3.1 定性测定 在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准物质具有相同的保留时间，且样品图谱中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表4规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。DB33/T 7022008 5 表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 2050 1020 10 允许的最大偏差 20 25 30 50 10.3.3.2 定量测定 外标法定量：对样品和混合标准使用溶液进样，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述条件下标准溶液的离子流图参见附录 A.2。10.3.4 结果计算 试样中纳他霉素的含量按式（2）进行计算。）（11000100012=VVmkVcX 式中：X 试样中纳他霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c 测试液中纳他霉素的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 样品定容体积，单位为毫升（mL）；V1 提取用甲醇和水混合提取液体积，单位为毫升（mL）；V2 净化时取提取液体积，单位为毫升（mL）；m 样品称样量，单位为克（g）；k 测试液稀释倍数。10.4 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。10.5 检出限 本方法最低检出浓度为 0.5g/kg。10.6 准确度 在线性范围内添加不同浓度的回收率在 80%120%之间。DB33/T 7022008 5 附 录 A（资料性附录）标准物质纳他霉素液相色谱图和多反应监测（MRM）色谱图 A.1 纳他霉素液相色谱图，见图A.1。图 A.1 A.2 标准物质纳他霉素多反应监测（MRM）色谱图和总离子流图，见图A.2 图 A.2 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 纳他霉素 2.27min 50 100 2.27 0 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 50 100 2.27 0 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 50 100 2.27 0 纳他霉素 6.82min TIC 666/485 666/503