DB36T 1399-2021 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

1 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of residues of fipronil and its metabolites in animal feather(hair)HPLC-MS/MS method ICS 67.080.20 B 31 DB36 江西省地方标准 DB36/T 1399-2021 2021-04-23 发布 2021-11-01 实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 1399-2021 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器和设备.2 6 试样制备与保存.3 7 测定步骤.3 8 结果与计算.5 9 方法灵敏度、准确度和精密度.5 附录 A（资料性）氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图.6 DB36/T 1399-2021 II 前 言 本文件是按照GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，南昌市农业科学院。本文件主要起草人：徐俊，费丹，赖博文，胡丽芳，周瑶敏，谢敏，张金艳，周军，侯玉洁，张标金，姚瑶，郑小明，闵佳玲。DB36/T 1399-2021 1 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用于猪、牛、羊、鸡畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物的检测。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经乙腈和水混合震荡提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈：色谱纯。4.1.2 甲醇：色谱纯。4.1.3 甲酸：色谱纯。4.1.4 乙酸铵：色谱纯。4.1.5 氯化钠：分析纯，140 烘烤 4 h。4.2 溶液配制 4.2.1 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（4.1.4），加水溶解，转移至 1000 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。4.2.2 5 mmol/L 乙酸铵甲醇溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（4.1.4），加甲醇溶解，转移至 1000 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。4.2.3 5%吐温 80：取 5 mL 吐温 80，加水溶解，转移至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。4.2.4 1%SDS：称取1 g十二烷基磺酸钠，加水溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。DB36/T 1399-2021 2 4.3 标准品 氟虫腈（CAS：205650-69-7）、氟甲腈（CAS：205650-65-3）、氟虫腈砜（CAS：120068-36-2）、氟虫腈亚砜（CAS：120067-83-6），纯度均 98.0%。4.4 标准溶液的配制 4.4.1 标准储备液（1.0 mg/mL）：分别准确称取氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准品各10 mg（精确至 0.1 mg），分别于 10 mL 容量瓶中，用甲醇分别配制成 1.0 mg/mL 的标准储备液，于-18 下保存，有效期 6 个月。4.4.2 标准中间液（10.0 mg/L）：用移液管吸取 1.0 mL 标准储备液（4.4.1）于 100 mL 容量瓶中，用甲醇分别稀释成质量浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 4 下保存，有效期 3 个月。4.4.3 标准工作液（1.0 mg/L）：用移液管吸取上述标准中间液（4.4.2）各 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用甲醇分别稀释成质量浓度为 1.0 mg/L 的标准工作液，临用现配。4.5 材料 4.5.1 乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），粒径 40 m-60 m。4.5.2 十八烷基硅烷（C18），粒径 40 m-60 m。4.5.3 十二烷基磺酸钠（SDS）。4.5.4 微孔滤膜：有机相，0.22 m。4.5.5 吐温 80。5 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾离子源）。5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。5.3 高速离心机：转速5000 r/min。5.4 涡旋仪。5.5 恒温烘箱。5.6 水浴恒温振荡器。5.7 氮吹仪。5.8 超声波清洗器。6 试样制备与保存 6.1 试样制备 取适量代表性试样，用 5%吐温 80（4.2.3）或 1%SDS（4.2.4）清洗羽（毛）30 min，然后用水冲洗干净，再用试纸吸干水，于 45 烘箱中烘 1 h 取出，剪碎成 1 mm-2 mm。6.2 试样保存 常温下放干燥器中保存。7 测定步骤 DB36/T 1399-2021 3 7.1 提取 准确称取 0.2 g（精确至 0.1 mg）上述处理的羽（毛）样品于 15 mL 具塞离心管中，加入 3 mL 乙腈（4.1.1）和 3 mL 水混合，涡旋 1 min，45 水浴震荡 4 h，超声 10 min，加入 4 g 氯化钠，涡旋 1 min，在 5000 r/min 下离心 5 min，转移上清液于另一离心管中，离心后的残渣加入 3 mL 乙腈和 3 mL 水重复提取一次，合并上清液，混匀。7.2 净化 将7.1所得合并上清液加入50 mg PSA和50 mg C18吸附剂，涡旋1 min，然后在5000 r/min下离心5 min，收集上清液至离心管中并在45条件下氮气吹至近干，残渣用1 mL水溶解，过0.22 m滤膜，供测定。7.3 色谱质谱参考条件 7.3.1 液相色谱参考条件如下：a）色谱柱：C18（100 mm 2.1 mm，1.8 m），或性能相当者。b）流动相：5 mmol/L乙酸铵溶液（A相），5 mmol/L乙酸铵甲醇溶液（B相）。c）流速：0.3 mL/min。d）柱温：35。e）进样量：5.0 L。f）流动相和梯度洗脱条件见表1。表 1 梯度洗脱程序 时间，min 流动相A，%流动相B，%0.0 30 70 1.5 30 70 3.0 0 100 4.0 0 100 4.5 30 70 7.0 30 70 7.3.2 质谱参考条件如下：a）扫描方式：负离子扫描（ESI-）；b）毛细管电压：3000 v；c）干燥气温度：150；d）干燥气流量：15 L/min；e）雾化气压力：30 psi；f）鞘气温度：300；g）鞘气流量：12 L/min；h）检测方式：多反应监测（MRM），监测条件见表2。DB36/T 1399-2021 4 表 2 氟虫腈及其代谢物质谱参数 待测物名称 母离子，m/z 子离子，m/z 碎裂电压，V 碰撞能，eV 氟虫腈 434.9 329.5*380 10 249.6 380 30 氟甲腈 387.0 281.7*380 35 350.8 380 35 氟虫腈砜 451.0 414.9*380 20 281.8 380 15 氟虫腈亚砜 419.0 261.9*380 35 382.8 380 20 注：*为定量离子对。7.4 标准工作曲线 吸取一定量的标准中间溶液，用水逐级稀释成质量浓度为0.1 g/L、0.2 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L的标准系列工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以目标物定量离子峰面积为纵坐标、标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.5 定性及定量 7.5.1 保留时间 被测试样中目标物色谱峰保留时间与相应标准色谱峰保留时间相比较，相对误差应在 2.5%之内。7.5.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱中，目标物的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，样品中目标物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表 3 定性确证时相对离子丰度最大允许偏差 相对丰度（基峰）50 2050（含）1020（含）10 允许的最大偏差 20%25%30%50%7.5.3 试样溶液的测定 将标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中目标物的响应值在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。在上述色谱-质谱条件下，氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图参见附录A。7.6 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。DB36/T 1399-2021 5 8 结果与计算 试样中氟虫腈及其代谢物残留量按式（1）计算。10001000mVX （1）式中：X试样中氟虫腈及其代谢物残留量的含量，单位为微克每千克(g/kg)；从标准曲线中查得的试样提取溶液中氟虫腈及其代谢物残留量的浓度，单位为微克每升(g/L)；V样液最终定容体积(mL)；m所取试样的量，单位为克(g)；注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法对氟虫腈及其代谢物的检出限为0.2 g/kg。本方法对氟虫腈及其代谢物的定量限为0.5 g/kg。9.2 准确度 氟虫腈及其代谢物在0.5 g/kg 5.0 g/kg添加浓度水平上的回收率为70.89%107.40%。9.3 精密度 在重复性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%。DB36/T 1399-2021 6 A A 附录 A（资料性）氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图 图A.1 氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液标准品(10.0 g/L)定量离子色谱图 1-氟虫腈定量离子色谱图（434.9329.5）2-氟甲腈定量离子色谱图（387.0281.7）3-氟虫腈砜定量离子色谱图（451.0414.9）4-氟虫腈亚砜定量离子色谱图（419.0261.9）_