ICS11.220B41DB34安徽省地方标准DB34/T3283—2018副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法MultilocussequencetypingdetectionmethodforHaemophilusparasuis文稿版次选择2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3283—2018I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所、同济大学。本标准主要起草人：李郁、陈章、李雪松、张利亚、黄晓慧、刘晓露、孙裴、汪清峰、张劲松、高亚飞、孟天恺。DB34/T3283—20181副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法1范围本标准规定了副猪嗜血杆菌的分子分型MLST的术语和定义、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、生物安全及防污染措施。本标准适用于副猪嗜血杆菌的分子分型检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫NY/T2417副猪嗜血杆菌PCR检测方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1管家基因house-keepinggenes所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是维持细胞生命活动所必需的，其基因序列高度保守并且在大多数情况下持续表达。4试剂和材料除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。4.1细菌基因组DNA提取试剂盒。4.2普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。4.3TaqDNA酶。4.4dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。4.5引物：扩增引物和测序引物序列见附录A表A.2。4.610×PCR缓冲液：200mmoI/LTris-HCl（pH8.4），200mmol/L氯化钾，15mmol/L氯化镁。4.7琼脂糖凝胶。4.8Gelred核酸染色剂。4.96×溴酚蓝上样缓冲液。DB34/T3283—201824.10分子量标记：1000bpDNAmarker。4.115×TBE电泳缓冲液：445mmoI/LTris，445mmol/L硼酸，10mmol/LEDTA(pH8.0）。使用时稀释为0.5×TBE电泳缓冲液。4.12质控菌株：副猪嗜血杆菌。5仪器和设备5.1离心机：最大转速14000r/min以上。5.2天平：量程2kg，感量0.1g。5.3pH计。5.4涡旋振荡器。5.5PCR仪。5.6电泳仪。5.7凝胶成像仪...
