ICS65.020.01B05DB36江西省地方标准DB36/T1366—2020柑橘黄龙病检测鉴定技术规程Technicalregulationfordetectionof'Candidatusliberibacterasiaticus'usingthePCR2020-12-29发布2021-07-01实施江西省市场监督管理局发布DB36/T1366—2020I前言本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：国家脐橙工程技术研究中心。本文件主要起草人：易龙、黄爱军、苏华楠、赖晓桦、卢占军、钟八莲。DB36/T1366—20201柑橘黄龙病检测鉴定技术规程1范围本文件规定了实验室检测鉴定柑橘黄龙病的PCR技术要求，针对CaLas的PCR检测方法。本文件适用于柑橘类植物感染柑橘黄龙病植株的PCR检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T28062柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法GB/T29393柑桔黄龙病菌的检疫检测与鉴定3术语和定义GB/T28062界定的术语和定义以及下列术语和定义适用于本文件。3.1柑橘黄龙病CitrusHuanglongbing，HLB由革兰氏阴性细菌引起的一种系统性侵染病害，在田间主要通过柑橘木虱、病穗嫁接传播，植株感病后典型症状为叶片斑驳状黄化，果实着色与正常果实相反，又称“红鼻果”，果小质劣，是一种重要的检疫性病害。3.2聚合酶链式反应PolymeraseChainReaction，PCR一种用于体外扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。4柑橘黄龙病菌基本信息柑橘黄龙病菌是一种革兰氏阴性细菌，其暂定分类地位为：变形菌门（Proteobacteria），α-变形菌纲（Alphaproteobacterial），根瘤菌目（Rhizobiales），根瘤菌科（Rhizobiaceae），韧皮部杆菌属（Liberibacter）。该属三种细菌是柑橘黄龙病的病原菌，分别为韧皮部杆菌亚洲种'CandidatusLiberibacterasiaticus'（CaLas），韧皮部杆菌非洲种'CandidatusLiberibacterafricanus'和韧皮部杆菌美洲种'CandidatusLiberibacteramericanus'，目前这三个种均不能人工纯培养，我国发病区及江西省内发病区的病原菌主要为其中的CaLas。DB36/T1366—202025方法原理柑橘黄龙病的病原菌属难培养菌，目前尚无方法进行人工培养，因此无法通过传统微生物培养的方法来鉴定病害。根据CaLas的16S核糖体（16SrDNA）基因序列设计一...
