ICS11.220B41DB34安徽省地方标准DB34/T3660—2020鸭肝炎病毒1型和3型双重RT-PCR检测方法DuplexRT-PCRassayfordetectionofduckhepatitisvirustype1andtype3文稿版次选择2020-08-03发布2020-09-03实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3660—2020I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省动物疫病预防与控制中心、太湖县小池镇农业农村综合服务中心、合肥野生动物园、铜陵市动物疫病预防与控制中心、铜陵市义安区畜牧兽医局。本标准主要起草人：潘孝成、占松鹤、沈学怀、何学丰、郭长进、范萍萍、尹磊、赵瑞宏、戴银、何为俊、吴娟、胡晓苗、侯宏艳、周学利、张丹俊、周迎春、王军。DB34/T3660—20201鸭肝炎病毒1型和3型双重RT-PCR检测方法1范围本标准规定了鸭肝炎病毒1型（DHV-1）和鸭肝炎病毒3型（DHV-3）双重RT-PCR检测方法的技术要求。本标准适用于鸭病变肝组织、接种疑似病料的鸭胚尿囊液或细胞培养物中DHV-1型和DHV-3型核酸的检测。2缩略语下列缩略语适用于本文件。DHV：鸭肝炎病毒(duckhepatitisvirus）RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscription-polymerasechainreaction）RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloneymurineleukemiavirus）PBS：磷酸缓冲液（phosphatebuffersolution）TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（trisacetate-EDTAbuffer）EB：溴化乙锭（ethidiumbromide）3主要仪器3.1PCR扩增仪。3.2台式低温高速离心机（最大离心力12000g以上）。3.3电泳仪。3.4凝胶成像系统。3.5冰箱（-20℃；-80℃）。3.6微波炉。3.7分析天平（感量0.01g）。3.8水浴锅。3.9微量移液器（2.5µL；10µL；200µL；1000µL）。4试剂4.1RNA抽提试剂：Trizol或其他商品化RNA提取试剂。4.2氯仿、异丙醇、无水乙醇，均为分析纯。DB34/T3660—202024.3M-MLV反转录酶。4.4RNA酶抑制剂。4.5DEPC处理的灭菌水。4.6TaqDNA聚合酶。4.7dNTP。4.8DNA分子标准（DNAMarker）。4.9RT-PCR反应试剂。4.10EB（10µg/µL）或核酸染料。4.11磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/L，pH7.2），见附录A中的A...
