DB36T 1527-2021 常见作物寄生线虫形态学鉴定方法.pdf

ICS 67.040 B 16 DB36 江西省地方标准 DB36/T 15272021 常见作物寄生线虫形态学鉴定方法 Morphological identification methods of parasitic nematodes in common crops 2021-12-14 发布 2022-06-01 实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 15272021 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 主要设备.1 5 样品采集与分离.1 6 鉴定方法.2 7 结果判定.2 附录 A（资料性）20 属常见作物寄生线虫的主要寄主、常见种及为害症状.3 附录 B（规范性）20 属常见作物寄生线虫形态学特征.7 附录 C（资料性）19 属常见作物寄生线虫形态特征图.11 DB36/T 15272021 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：江西省农业科学院农业应用微生物研究所、吉安市农业科学研究所、吉安市永丰县蔬菜产业发展中心、吉安市泰和县塘洲镇人民政府。本文件主要起草人：范琳娟、徐雪亮、刘子荣、喻吉生、涂年生、康宏波、胡平华、姚英娟。DB36/T 15272021 1 常见作物寄生线虫形态学鉴定方法 1 范围 本文件规定了常见作物上包括垫刃目、滑刃目、矛线目、三矛目等 4 个目 20 属寄生线虫有关的样品采集与分离、形态学鉴定方法和结果判定。本文件适用于常见作物的 4 个目 20 属寄生线虫形态学鉴定。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 主要设备 生物显微镜、离心机、解剖镜。5 样品采集与分离 5.1 采集 主要检查植物材料地上部分叶片颜色、株高、茎粗等生长指标是否异常，根部是否有根结、褐化或发黑等症状，收集上述可疑材料及根际土壤带回实验室检验。具体采样特征见附录 A。5.2 分离 5.2.1 要求 将植物材料轻轻冲洗干净后，于吸水纸上吸掉表面水后，然后用刀片切成约0.5 mm厚的薄片用贝尔曼漏斗法或浅盘法分离线虫。将分离获得的线虫液通过沉淀或离心浓缩后，制成临时玻片，于1040倍下进行镜检，观察线虫的形态学特征。5.2.2 贝尔曼漏斗法 在口径为 20 cm 的漏斗末端接一段橡皮管，在橡皮管末端用弹簧夹夹紧，在漏斗上方放置一层纱布和一层线虫滤纸，将土样或者切碎的植物材料均匀铺在滤纸上，缓慢加水至浸没样品，室温下放置 48 h后，打开夹子，收集橡皮管里的水样，于解剖镜下观察是否有线虫。若有线虫，将水样摇匀后，吸取100 L 或 200 L 线虫液，制成临时玻片，进行镜检鉴定。5.2.3 浅盘法 DB36/T 15272021 2 把网眼筐套放在塑料盆中，在网眼筐里放入一层纱布和一张等大的清风牌双层面巾纸。将土样或者切碎的植物材料轻轻倒在面巾纸上平摊开，用量杯轻轻地沿塑料盆壁往盆里加水直至水没过土面 2 mm。静置 48 h 后，轻轻取出带土的网眼盆，把塑料盆中的水样(即线虫悬浮液)倒入 500 mL 量杯中，再用少量(约 20 mL)清水冲洗塑料盆，重复清洗 2 次，冲洗液继续倒入 500 mL 量杯中。量杯中的线虫液静置 3 h 后，用橡皮管吸去上清液，留下约 100 mL，摇匀后倒入平底管中，并用 5 mL 清水冲洗，重复清洗 2次量杯，将附着在杯壁、杯底的线虫冲洗入平底管中。静置 3 h，用橡皮管轻轻吸取上层水留下约 20 mL，摇匀后倒入有刻度的试管中，再用少量清水沖洗平底管 2 次，冲洗液继续倒入有刻度试管中。静置 3 h或离心去上清后摇匀后制成临时玻片，进行镜检鉴定。6 鉴定方法 6.1 鉴定依据 根据不同目、科、属线虫体形、唇区、口针、口针基部球、食道类型、背食道腺开口位置、中食道球大小及形状、侧尾腺口形状、生殖器官位置及特征、尾部形状及特征等主要形态特征进行鉴定。6.2 鉴定特征 垫刃目包括15个属，分别为垫刃线虫属(Tylenchus)、茎线虫属(Ditylenchus)、粒线虫属（Anguina）、矮化线虫属(Tylenchorhynchus)、短体线虫属(Tylenchorhynchus)、潜根线虫属(Hirschmanniella)、穿孔线虫属(Radopholus)、盾线虫属(Scutellonema)、盘旋线虫属(Rotylenchus)、螺旋线虫属(Helicotylenchus)、肾形线虫属(Rotylenchulus)、孢囊线虫属(异皮属 Heterodera)、根结线虫属(Meloidogyne)、环线虫属(Criconema)、针线虫属(Paratylenchus)；滑刃目包括2个属，分别为真滑刃线虫属(Aphelenchus)和滑刃线虫属(Aphelenchoides)；矛线目包括2个属，分别为剑线虫属(Xiphinema)和长针线虫属(Longidorus)；三矛目包括1个属，为毛刺线虫属(Trichodorus)。以上20属线虫具体形态学特征和形态特征图分别详见附录B和附录C。7 结果判定 依据附录 B 和附录 C 将测试线虫判定到属。DB36/T 15272021 3 A A 附 录 A（资料性）20 属常见作物寄生线虫的主要寄主、常见种及为害症状 A.1 垫刃线虫属(Tylenchus)这类线虫通常分布于许多植物的根系周围，有些也存在于苔藓根际，其寄生性尚不清楚。常见种：戴维恩垫刃线虫（T.davainei）、优美垫刃线虫（T.elegansde）、弓形垫刃线虫（T.arcuatus）和丽塔垫刃线虫(T.rotae)。A.2 茎线虫属(Ditylenchus)茎线虫既可寄生植物地上部分，也可寄生地下部分，主要寄主有甘薯、马铃薯、起绒草、水稻等。常见种：腐烂茎线虫（甘薯茎线虫 D.destructor）。为害症状：主要为害块根、茎蔓及秧苗。秧苗根部受害，在表皮上生有褐色晕斑，秧苗发育不良、矮小发黄；茎部症状多在髓部，初为白色，后变为褐色干腐状；块根症状有糠心型、糠皮型和混合型，糠心型，由染病茎蔓中的线虫向下侵入薯块，病薯外表与健康甘薯无异，但薯块内部全变成褐白相间的干腐；糠皮型，线虫自土中直接侵人薯块，使内部组织变褐发软，呈块状褐斑或小型龟裂；严重发病时，两种症状可以混合发生，呈混合型。A.3 粒线虫属(Anguina)本属线虫为植物种子和茎部的代表寄生物，主要侵染禾本科单子叶植物。常见种：小麦粒线虫（A.tritici）。为害症状：病株叶片扭曲，抽穗增多，茎基部变粗，甚至使植物矮化与弯曲以致被害种粒形成虫瘿等。A.4 矮化线虫属(Tylenchorhynchus)矮化线虫寄主范围很广，主要包括烟草、棉花、燕麦、玉米、甘蔗、水稻、大豆和花生等重要经济作物。常见种有：饰环矮化线虫（T.annulatus）、克莱顿矮化线虫（T.claytoni）、甘蓝矮化线虫（T.brassicae）、裸露矮化线虫（T.nudus）。为害症状：主要取食于根毛细胞、表皮细胞，通常不会引起明显的地上部症状，受害植物根系生长受到抑制而发育不良，株稍停止生长，植株矮化。A.5 短体线虫属(根腐线虫属 Pratylenchus)短体线虫寄主范围很广，重要寄主有：咖啡、茶、香蕉、烟草、山药、樱桃、苹果、马铃薯、甘薯、西瓜、葡萄、柑桔、大豆、豌豆、绿豆及各种蔬菜等。常见种包括：短尾短体线虫（P.brachyurus）、咖啡短体线虫（P.coffeae）、薯蓣短体线虫（P.dioscorea）DB36/T 15272021 4 e、卢氏短体线虫（P.loosi）、穿刺短体线虫（P.penetrans）、落选短体线虫（P.neglectus）、斯克里布纳短体线虫（P.scribneri）、索恩短体线虫（P.thornei）、伤残短体线虫（P.vulnus）、玉米短体线虫（P.zeae）。为害症状：本属线虫主要在根部皮层取食，引起根系不发达，根部组织变褐腐烂、坏死。由于其对根部造成伤口，往往与细菌、真菌导致复合侵染。A.6 潜根线虫属(Hirschmanniella)潜根线虫属具有比较广泛的寄主，最主要的寄主为水稻，也从芋、甘蔗、棉花、番茄、玉米、小麦等作物根部发现，野生寄主以禾本科和莎草科最重要。常见种包括：水稻潜根线虫（H.oryzae）。为害症状：受害水稻生长迟缓、植株矮小黄化、分蘖减少、抽穗和开花推迟，被侵染根变黄褐色和腐烂。A.7 穿孔线虫属(Radopholus)穿孔线虫的一些种类是芭蕉、甘蔗、枇杷、咖啡树和美人蕉等植物的重要病原线虫。常见种：相似穿孔线虫（R.similis）。为害症状：根表面出现坏死斑，一般呈橘黄色、紫色或褐色，坏死斑外部形成裂缝，根腐烂；地上部一般表现为叶片缩小，变色，新枝生长弱等症状。A.8 盾线虫属(Scutellonema)某些盾线虫可引起植物地下的肉质器官如薯蓣的块茎和百合鳞茎等细胞的破坏。在热带，这类线虫是贮藏薯蓣的严重病原线虫，引起薯蓣干腐病。常见种：缓慢盾线虫（S.bradys）。A.9 盘旋线虫属(Rotylenchus)本属线虫是根部外寄生线虫，偶尔也可侵入根内，主要为害豌豆、百合、胡萝卜、莴苣和其他蔬菜作物的根系，以及许多观赏的灌木和苗圃里的树，特别是黄杨树。常见种：强壮盘旋线虫（R.robustus）。为害症状：导致根系坏死或腐烂，地上部生长受阻，有时伴发失绿病。A.10 螺旋线虫属(Helicotylenchus)本属线虫能取食极为广泛的植物种类，是我国大豆农田和果园的优势植物线虫类群。常见种：双宫螺旋线虫（H.dihystera）。为害症状：根系出现坏死病斑，地上部生长受阻。A.11 肾形线虫属(Rotylenchulus)在我国南方主要为害双子叶植物蔬菜的根部。常见种：肾形肾状线虫（R.reniformis）。DB36/T 15272021 5 为害症状：受害根系变小，多坏死斑，严重时腐烂死亡，地上部生长受阻。A.12 孢囊线虫属(异皮线虫属 Heterodera)孢囊线虫病是发生在冷凉地区农业生产上的重要病害，一般寄主范围都较狭窄，严格的专性寄生，存在生理小种。常为害马铃薯、大豆、茄子、番茄、甜菜、小麦等。对我国农业影响较大的有大豆孢囊线虫（H.glycines）和禾谷孢囊线虫（H.avenae）。为害症状：主要为害寄主的根系，地上部症状与缺水或缺氮肥相似，根系受害后发育较弱，表面出现褐色斑点，表皮龟裂，线虫数量较大时，根系虫体开始露出根表皮，根系开始变褐腐烂，造成地上部分黄化枯死。检查根系可发现白色或淡黄色比小米粒还小的肉质小颗粒，这是线虫的雌虫，后变黄褐色，易掉落土中。此病在田间分布初期仅局限于小面积上，使大田出现绿中带黄，高矮相间的山丘状，后期严重时大田病株呈带状枯死甚至全田枯死，似火烧状。A.13 根结线虫属(Meloidogyne)根结属线虫广泛分布于世界各地，寄主植物 3000 余种，常为害烟草、各种蔬菜、瓜类、果树及观赏植物等，还能传播一些细菌和真菌性病害。常见种：南方根结线虫（M.incognita）、花生根结线虫（M.arenaria）、爪哇根结线虫（M.javanica）、北方根结线虫（M.hapla）。为害症状：主要为害植物的根部，表现为侧根和须根较正常多，并在幼根上形成球形或圆锥形大小不等的根瘤。A.14 环线虫属(Criconema)环线虫属广泛分布于世界各地，主要从禾本科杂草、羊齿植物和各种树木的根围土中收集到该线虫，在我国主要采集于柑橘和梨等果树根围土，目前该属对植物的为害性尚不十分清楚。常见种：甘地环线虫（C.giardi）。A.15 针线虫属(Paratylenchus)针线虫在各种植物根部出现比例都比较大，主要为害玉米、大豆、高粱、甜菜等大田作物，也为害蔬菜以及梨、核桃、樱桃等各