ICS65.020.99B22备案号：40456-2014江苏省地方标准DB32DB32/T2570-2013鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程TechnicalcodeofdetectingRT-LAMPforInfectiousBursalDisease2013-12-20发布2014-01-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2570-2013前言为规范鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程，提高鸡传染性法氏囊病毒检测的灵敏度、稳定性、特异性，特制定本标准。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》要求编写。本标准的附录为规范性附录。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准起草人：刘宇卓、李银、黄欣梅、赵冬敏、韩凯凯、张敬峰。DB32/T2570-20131鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程1范围本标准规范了鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程所用引物、所涉及的样品范围、操作流程、反应条件等技术标准。本标准适用于鸡传染性法氏囊病毒病的实验室诊断、临床诊断、流行病学调查、分离毒株的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16548-2006病害动物和病害动物产品生物安全处理规程NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法DB13/T500商品肉鸡传染性法氏囊病防治技术规程3主要试剂和仪器3.1DNAMarkerDL-20003.26xLoadingbuffer3.3BstDNAPolymerase3.4MgSO43.5DEPC3.6Betaine3.7lOXThermoPolbuffer3.8异丙醇3.9无水乙醇3.10琼脂糖3.11核酸染料3.12氯仿3.13电泳仪3.14电热恒温水槽4引物按照GenBank上公布的鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）A节段的基因序列(GenBankAY444873)，在VP3基因保守区域利用LAMPprimerdesigningsoftwarePrimerExplorer设计一套引物，序列为：F3：5′一CCAACTGGGCGACGTTTA一3′B3：5′一CAGAATGGAACAGTGGGTCC一3′FIP：5′一GTCCTGCATTGGGTGGAAGGTATTTTTTTTCCTCACAATCCACGCG一3′BIP：5′一CTGGCTATGGCCGCTTCAGATTTTTGCTGCTTCCATGGCTCT一3′5临床诊断DB32/T2570-20132按照DB13/T500商品肉鸡传染性法氏囊病防治技术规程中4.1流行特点、4.2临床症状、4.3.1剖检病变进行。6采样和样品的处理6.1病料的采集及处理按照NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法，病死或扑杀鸡，无菌采集法氏囊及肾脏、肝脏组织，于0～4℃冷藏保存并立即送检，采样过程中样品不得交叉污染。6.2样品的处理剖检取法氏囊及肾脏、肝脏组织，可单独...
