ICS01.120A00DB34安徽省地方标准DB34/T3488—2019猪链球菌的分子分型MLST方法MultilocussequencetypingdetectionmethodforStreptococcussuis文稿版次选择2019-12-25发布2020-01-25实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3488—2019I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽浩翔农牧有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽浩翔农牧有限公司、安徽冠华农牧有限公司、安徽杜洛克种猪育种有限责任公司、安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所、怀宁县动物疫病预防与控制中心，巢湖市畜牧兽医局、六安市动物疫病预防与控制中心。本标准主要起草人：高亚飞、占松鹤、何长生、谢玉洁、程竹兵、李春芬、程圣芳、段倩倩、李郁、孙裴、袁献宇、刘雪兰、徐小伟、高亚成。DB34/T3488—20191猪链球菌的分子分型MLST方法1范围本标准规定了猪链球菌的分子分型MLST的术语和定义、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、生物安全和防污染措施。本标准适用于猪链球菌的分子分型检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫DB34/T2996猪链球菌检验操作规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1MLSTmultilocussequencetyping一种基于核酸序列测定的细菌分型方法，通过PCR扩增多个管家基因内部片段，测定其序列，分析菌株的变异，从而进行分型。3.2管家基因house-keepinggenes所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是维持细胞生命活动所必需的，其基因序列高度保守并且在大多数情况下持续表达。4试剂和材料4.1实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。4.2除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，应用无DNA酶污染的容器分装。4.3细菌基因组DNA提取试剂盒。4.4普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。4.5TaqDNA酶。DB34/T3488—201924.6dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。4.7引物：猪链球菌管家基因的扩增引物序列和测序引物序列见表1。表1猪链球菌管家基因的扩增引物序列和测序引物序列名称序列（5’→3’）aroA（Forward）TTCCATGTGCTTGAGTCGCTAaroA（Reverse）ACGTGACCTACCTCCGTTGACcpn60（Forward）TTGAAAAACGTRACKGCAGGTGCcpn60（Revers...
