DB23T 2874-2021 野生哺乳动物DNA 检测样本采集技术规范.pdf

ICS 65.020.01B 05DB23/TDB23/T 2874287420212021黑龙江省地方标准DB23野生哺乳动物 DNA 检测样本采集技术规范2021-05-14 发布2021-06-13 实施黑黑龙龙江江省省市市场场监监督督管管理理局局发 布DB23/TDB23/T 2874287420212021I前言本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。本标准由黑龙江省林业和草原局提出。本标准起草单位：黑龙江省濒危野生动物救护繁育中心、东北林业大学、黑龙江中央站黑嘴松鸡国家级自然保护区服务中心、黑龙江挠力河国家级自然保护区管理局、黑龙江省林业和草原局野生动植物保护处、黑龙江省林业规划设计院、黑龙江扎龙国家级自然保护区管理局、黑龙江乌裕尔河省级自然保护区管护中心、黑龙江省自然与生态研究所院、海伦市林业和草原局、黑龙江省桦南县向阳林场。本标准主要起草人：李天芳、杨飞飞、姜广顺、李显达、王振中、边梓希、姜东涛、汤伟权、曹洪涛、潘丰、陶佳俐、陈福元、尹伟平、王芳、曲红焱、曲虹、刘赛思、曹婷、吕砚、徐卓、王广鑫、丰田、魏丹、刘应竹、张士芳、王睿、崔振军。DB23/TDB23/T 28742874202120211野生哺乳动物 DNA 检测样本采集技术规范1范围本标准规定了野生哺乳动物DNA检测样本采集的工具和材料、采集前的准备、采集方法、采样后动物的后处理、样本记录、保存和运输、防疫注意事项、技术档案。本标准适用于野生哺乳动物DNA检测样本采集。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。HJ 628-2011生物遗传资源采集技术规范(试行)LY/T 1291活体动物运输要求LY/T 2359-2014陆生野生动物疫源疫病监测技术规范SN/T 2752.1-2011卫生检疫人员的自我防护规范3工具和材料3.1捕捉工具和设施包括捕捉网、陷阱和麻醉枪(针)等。3.2处理器材包括剪刀(医用级或科学级)、解剖刀、镊子、带帽塑料试管(或离心管)、带帽广口瓶、滴管、封口塑料袋、锡箔盒、乳胶手套等。3.3记录工具包括记录表、记号笔、标签纸、铅笔、电脑等。3.4处理和贮存材料包括蒸馏水、液氮、干冰、冰盒、冰袋、(90%100%)C2H5OH溶液、DNA缓冲液、血液抗凝剂等。4采集前的准备4.1捕捉和采集人员应进行专业培训，掌握捕捉技巧和采集技术等。4.2应制定科学的采集方案。采样时应优先选择非损伤性取样，其次是非伤害性取样。非特殊需要，不应进行伤害性取样。不应因采集活动破坏物种的种群和栖息环境。5采集方法5.1非损伤性取样5.1.1不直接接触动物，通过收集动物粪便、毛发等材料，进行 DNA 样本检测。DB23/TDB23/T 287428742021202125.1.2采集时间和要点a）采集动物粪便以冬季为主。应优先采集保留完好且新鲜的粪便，采集过程中应保持粪便表面粘膜完好，应在同一粪堆中尽可能多的进行收集。每次采集时应使用一次性手套。b）采集动物毛发不受季节限制。同一动物应沿着一个足迹链或者卧迹、剐蹭痕迹等收集毛发。5.1.3样本临时保存a）冬季采集动物粪便时，应将整块粪便装入封口袋。非冬季采集时，依据物种不同，将粪便尾部切下或逐粒装入装有变色硅胶颗粒的离心管或封口塑料袋中密封，其余部分用信封保存。b）收集到的动物毛发用蒸馏水冲去表面脏物后，放入离心管或封口塑料袋中保存。5.2非伤害性取样5.2.1通过捕获动物采集少量血液、小块组织等作为检测样本，不对其生理机能产生重大影响。5.2.2捕捉对象应以青年个体和成熟个体为主，不捕获幼体和繁殖期、哺乳期的母体。5.2.3捕捉和取样操作应快速、谨慎，尽量减轻野生动物的痛苦；应确保工作人员和野生动物的安全。5.2.4活体运输按LY/T 1291的规定执行。5.2.5 采集部位和重量a)采集动物组织时，采集部位通常为动物的耳缘组织或趾。应减少对动物的伤害，采集量达到200mg即可。b)采血前用蒸馏水和酒精清洁采血部位。常用的采血部位为颈静脉、大隐静脉、头静脉和股静脉，采血量应小于其体重的1%，通常50ul即可。5.2.6样本临时保存a)采集到的动物组织用蒸馏水清洗晾干后放入离心管中保存。离心管中应含有能没过样本的浓度为（90%100%）C2H5OH溶液或DNA缓冲液。b)采集后的血液可置于加入了血液抗凝剂的带帽试管或离心管中保存。5.3伤害性取样5.3.1通过捕获野生动物采集其新鲜肌肉、器官等作为检测样本，对动物伤害较大甚至致死。5.3.2伤害性取样对采集部位和采集量没有限制。5.3.3样本临时保存见文本 5.2.6。6采集动物的后处理按 HJ 628-2011 中 12 和 LY/T 2359-2014 中 5.4 的规定执行。7样本记录采集到的样本应做好报备，样本信息记录按HJ 628-2011中15的规定执行。8保存和运输样品采集完成后，在送检过程中保存、包装、运输按LY/T 2359-2014中6的规定执行。9防疫注意事项DB23/TDB23/T 28742874202120213按SN/T 2752.1中的规定执行。10技术档案应建立技术档案，内容包括：采集工具和材料、采集前的准备、采集方法、采样后动物的后处理、样本记录、保存和运输、防疫注意事项等。