DB42T 1687-2021 萝卜根肿病抗性种质鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 31 DB 42 湖北省地方标准 DB42/T 16872021 萝卜根肿病抗性种质鉴定技术规程 Code of practice for radish germplasm resistance to clubroot disease 2021-05-12 发布 2021-07-12 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 16872021 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 接种前准备.1 4.1 接种体制备.1 4.2 培养土制备.1 4.3 鉴定材料制备.1 5 接种方法.1 5.1 接种时期.1 5.2 接种浓度.2 5.3 鉴定条件设置.2 5.4 鉴定对照.2 5.5 鉴定设计.2 5.6 接种方法.2 6 接种后管理.2 7 病情调查.2 7.1 调查时间.2 7.2 病情分级.2 7.3 病情指数计算方法.2 8 抗病性评价.3 8.1 抗病性评价标准.3 8.2 鉴定结果的有效性判别.3 附录 A（资料性）萝卜根肿病病原菌.4 DB42/T 16872021 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由湖北省农业科学院提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：湖北省农业科学院经济作物研究所，鹤峰县蔬菜办公室。本文件主要起草人：甘彩霞、邓晓辉、崔磊、於校青、黄云、张成、宋志红、孟祥生、周青龙、龙志华、王丽娅、胡阳、蔡美仲、张友华、艾姝智。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：；对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院经济作物研究所，联系电话：027-87380819，邮箱：。DB42/T 16872021 1 萝卜根肿病抗性种质鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了萝卜（Raphanus sativus L.）抗根肿病（Plasmodiophora brassicae Woron.）抗性种质鉴定技术中的术语与定义、接种体制备、接种方法、病情调查和抗性评价等进行了规范。本文件适用于湖北地区萝卜种质抗根肿病的鉴定及评价。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY 525 有机肥料 DB42/T 1106 萝卜抗黑腐病种质鉴定技术规程 3 术语和定义 DB42/T 1106界定的术语和定义适用于本文件。4 接种前准备 4.1 接种体制备 接种鉴定量小时采集发病萝卜根部根瘤进行接种；接种鉴定量大时，采集大白菜根瘤进行接种。采集发病萝卜/大白菜根部根瘤冲洗干净，用塑料膜包裹沤烂并捣碎，用净水冲洗根肿菌孢子并用8层纱布过滤备用；根肿菌浓度测定采用血球板进行显微镜检计数；根肿菌采用超低温冰箱保存的样本解冻后研磨使用。4.2 培养土制备 供试培养土取灭过菌的土壤，过筛，加入有机肥混匀，应符合NY 525的要求。将接种土装入32孔深孔穴盘（53 cm27 cm6 cm）中备用。4.3 鉴定材料制备 鉴定鉴定材料种子经5%次氯酸钠溶液浸种10 min后，用清水冲洗，放入垫有两层滤纸的培养皿中，然后于恒温培养箱中28 催芽。种子露白时，播于装有基质的穴盘中。5 接种方法 5.1 接种时期 萝卜种子萌发出芽后和幼苗两叶一心期，两个时期各接种一次。DB42/T 16872021 2 5.2 接种浓度 宜为1108个孢子/mL。5.3 鉴定条件设置 接种宜在大棚进行，土壤保持湿润，温度保持在18 25。5.4 鉴定对照 鉴定时设雪单一号、白玉春等萝卜为抗病对照品种，喜诺青、301等萝卜为感病对照品种。5.5 鉴定设计 鉴定材料随机区组排列，3次重复，44孔为一个重复。5.6 接种方法 播种后，种子萌发出芽具两片子叶时，采用灌根法沿苗根部浇灌10 mL菌液进行接种；待幼苗长到两叶一心时，在距植株根颈2 cm半径范围内浇灌10 mL菌液再次接种。6 接种后管理 保持鉴定环境温度在18 25 之间；光照强度不低于10000 Lux，日照/黑暗处理为16 h/8 h；土壤相对湿度80%以上，不能渍水或过干，尤其忌忽干忽湿，两次接种同样管理。7 病情调查 7.1 调查时间 两叶一心期接种后第7周调查病情。7.2 病情分级 病情分级及其对应的症状描述见表1。表1 萝卜根肿病病情级别划分 病情级别 症状描述 0 根部没有根瘤 1 侧根或主根有轻微根瘤，1/31/2的侧根和须根上有根瘤 2 侧根或者主根有较大根瘤，1/22/3的须根和侧根上有不规则根瘤 3 主根上有明显大块的根瘤，2/3以上的须根和侧根上有较大不规则 4 根瘤组织发黑开始腐烂或者植株死亡 7.3 病情指数计算方法 调查每份鉴定材料根部发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数(DI)。DB42/T 16872021 3 病情指数按公式计算：=（）100 式中：DI病情指数；S 各病情级别代表数值；n 各病情级别病株数；N 调查总株数；S 最高病情级别代表值。8 抗病性评价 8.1 抗病性评价标准 依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对萝卜根肿病的抗性水平，划分标准见表2。表2 萝卜黑腐病抗性评价标准 病情指数 抗性评价 0 免疫（I）0DI5 高抗（HR）5DI30 抗病（R）30DI60 感病（S）DI60 高感（HS）8.2 鉴定结果的有效性判别 当感病对照的病情指数DI50，该批次的抗病性鉴定结果即为有效。DB42/T 16872021 4 A A 附录A （资料性）萝卜根肿病病原菌 A.1 学名 芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae Woron.），为原生动物界根肿菌门根肿菌纲根肿菌目根肿菌科根肿菌属芸苔根肿菌。A.2 为害部位及症状 主要发生在根部，通常苗期即可受害，严重时幼苗枯死。成株受害初期地上部症状不明显，而后生长逐渐迟缓、矮小并表现缺水症状，基部叶片常在中午萎蔫，早晚恢复，后期基部叶片发黄、枯萎、严重时全株枯死。发病植株根部细胞因受病菌刺激而加速分裂，部分细胞膨大，最终形成肿瘤。根肿肿瘤一般为纺锤形、手指形、不规则形，主根上的肿瘤个大而数量少，侧根上的个小而数量多。肿瘤初期表面光滑，后期常发生龟裂、粗糙，易被其他杂菌侵入而引起腐烂。A.3 生物学特性 根肿菌以休眠孢子囊在土壤中越冬，其可在土中存活5年8年，孢子囊借雨水、灌溉水、害虫及农事操作等传播，也可粘附在种子表面上，随着播种进行传播，但种子内部一般不携带根肿菌。休眠孢子囊在12 27 均可萌发，适宜温度24 ，适宜相对湿度为98%，土壤含水量低于45%时病菌死亡，适宜pH值6.2，pH值8以上发病少。休眠孢子囊萌发产生游动抱子侵入寄主，经15天20天开始显病。十字花科蔬菜各生育期均会感染根肿病，发病的早晚、轻重与当年的温度、降雨和土壤的酸碱度等有关。一般阴蔽潮湿的低洼田发病较干燥向阳地块重；适期播种田发病较重，而适当延迟播种期可减轻病害的发生；病菌侵染莲瘤芥植株越早为害越重，无病菜苗显著轻于有病菜苗定植大田的发病程度；同时，不同的品种抗病程度不同。A.4 湖北省根肿菌生理小种 2012年汪维红等根据被鉴定的根肿病菌对4个Williams鉴别寄主的抗性反应类型，鉴定长阳县贺家坪的大白菜根肿病菌为4号生理小种。A.5 鉴定记载表格 萝卜根肿病鉴定结果记载内容见表A.1。DB42/T 16872021 5 表A.1 萝卜根肿病抗病性鉴定结果记载内容 编号 品种名称 来源 病情级别 病情指数 平均病指 抗性评价 0级 1级 2级 3级 4级 备注 1.播种日期：2.播种地点：3.根肿菌生理小种类型：4.接种时间：5.调查日期：鉴定技术负责人（签字）：