DB61T 563-2013 水质 丙烯酰胺的测定 高效液相色谱-质谱质谱法.pdf

ICS 13.060.01 Z 16 DB61 陕西省地方标准 DB 61/T 5632013 水质 丙烯酰胺的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法 2013-01-07 发布 2013-03-01 实施 陕西省质量技术监督局 发 布 DB61/T 5632013 I 前 言 本标准由陕西省环境监测中心站提出。本标准由陕西省环境保护厅归口。本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。本标准主要起草人：黄国全、许锋、李合义、吴卫东、周弛。本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。本标准为首次发布。DB61/T 5632013 1 水质 丙烯酰胺的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了测定水中丙烯酰胺的高效液相色谱-质谱/质谱法的方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品、分析步骤、结果计算等要求。本标准适用于饮用水源地地表水、地下水中丙烯酰胺的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 采用固相萃取技术富集样品中的丙烯酰胺，用甲醇洗脱，洗脱液浓缩后，用高效液相色谱串联质谱仪检测，外标法定量。4 试剂和材料 4.1 水：符合 GB/T 6682-2008 中规定的一级水。4.2 甲醇：液相色谱纯。4.3 甲酸：液相色谱纯。4.4 丙烯酰胺标准贮备：=1000 mg/L。介质为甲醇，4 冰箱中冷藏保存。4.5 丙烯酰胺标准中间液：=1.0 mg/L。以水为溶剂，将丙烯酰胺标准贮备液(4.4)适当稀释，4 冰箱中保存，保存期为7 d。4.6 丙烯酰胺标准使用液：=100 g/L。准确吸取10 mL丙烯酰胺标准中间液(4.5)于100 mL容量瓶中，用水定容，摇匀。现用现配。4.7 微孔滤膜：0.45 m，水系。4.8 固相萃取小柱：Plus AC-2，400 mg/85 m，或其它性能相当者。5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱串联质谱仪(三重四级杆质谱)，配电喷雾离子源(ESI)。5.2 氮吹浓缩仪。5.3 固相萃取装置。DB61/T 5632013 2 6 样品 6.1 样品测定范围 样品体积为10 mL时，方法的检出限为0.008 g/L，测定下限为0.032 g/L，测定上限为2.5 g/L。6.2 样品采集与贮存 样品应采集在棕色玻璃瓶中。采样前用待测水样将样品瓶清洗2次3次。采集的水样应充满样品瓶并加盖密封，及时分析。如需保存，应避光，4 以下冷藏，48 h内分析。7 分析步骤 7.1 样品预处理 7.1.1 固相萃取小柱的活化：将固相萃取小柱(4.8)安装在固相萃取装置(5.3)上，依此用 10 mL 甲醇(4.2)、10mL 水活化固相萃取小柱，流速控制在 1 mL/min，整个活化过程应保持柱体润湿。7.1.2 样品富集：取 10 mL 水样(富集所用水样体积根据水质情况可适当增减)以 1 mL/min 的流速流过已活化好的固相萃取小柱，弃去流出液。7.1.3 干燥：真空抽滤 15 min 或高纯氮气吹固相萃取小柱 10 min，使柱干燥。7.1.4 洗脱与浓缩：用 10 mL 甲醇以 1 mL/min 的流速洗脱样品，收集洗脱液。采用氮吹浓缩至近干，用水定容至 1 mL，过微孔滤膜(4.7)，待测。7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱：填料为 5 mODS，柱长 15 cm，内径 2.1 mm 的反相色谱柱或其他性能相近的色谱柱。7.2.2 流动相：流动相 A 为 0.1%甲酸溶液，流动相 B 为甲醇，梯度洗脱见表 1。7.2.3 流速：400 L/min。7.2.4 柱温：40。7.2.5 进样量：50 L。7.3 质谱条件 离子源：电喷雾(ESI)，扫描方式：正离子，监测方式：多反应监测（MRM）。具体参数见附录A。表1 流动相梯度洗脱程序 时间/min 流动相 A/%流动相 B/%0.00 99 1 0.40 99 1 2.50 40 60 2.51 99 1 5.00 99 1 7.4 标准曲线的绘制 DB61/T 5632013 3 准确移取一定量的丙烯酰胺标准使用液(4.6)至水中，配制浓度分别为0.2 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L、4.0 g/L、8.0 g/L、16.0 g/L、25.0 g/L的标准系列。按照上述液相色谱质谱/质谱条件测定标准工作溶液，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.5 样品测定 样品按所建立方法进行测试，记录色谱峰的保留时间和峰面积。7.6 空白实验 用水代替样品，按样品测定相同的步骤分析。8 结果计算 8.1 定性分析 在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的色谱峰相对保留时间在2.5%以内，并且在扣除背景后的样品色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表2 流动相梯度洗脱程序 相对丰度/（%，基峰）液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度 最大允许误差 50 20%大于 20 至小于等于 50 25%大于 10 至小于等于 20 30%10 50%8.2 定量分析 样品中丙烯酰胺的含量按公式（1）计算:stVKVaY.(1)式中：水样中丙烯酰胺的浓度，单位为微克每升(g/L)；Y水样中丙烯酰胺的峰面积；a校准曲线截距；tV洗脱液浓缩定容后的体积，单位为毫升(mL)；sV水样体积，单位为毫升(mL)；K校准曲线斜率。9 精密度与准确度 9.1 精密度 DB61/T 5632013 4 6家实验室分别对0.040 g/L和2.00 g/L的样品进行了测定，实验室内相对标准偏差为5.6%9.1%、6.7%11.7%；实验室间相对标准偏差分别为6.3%和2.8%。9.2 准确度 6家实验室分别对加标后浓度为0.040 g/L和2.00 g/L的样品进行测定，加标回收率分别为70.0%97.5%、73.0%98.0%。10 注意事项 10.1 丙烯酰胺有毒，实验过程中应做好防护。10.2 样品通过固相萃取小柱后，必须用氮气吹干固相萃取小柱或者抽气至干，否则会降低该方法回收率。10.3 质谱仪应定期校正质量轴，防止质量数发生漂移。DB61/T 5632013 5 A A 附 录 A（资料性附录）丙烯酰胺 HPLC-MS/MS 方法特征选择离子及质谱参数 表A.1 丙烯酰胺 HPLC-MS/MS 方法特征选择离子及质谱参数 名称 母离子/(m/Z)子离子/(m/Z)管状透镜电压/V 碰撞能量/V 丙烯酰胺 72.4 55.5*65 11 72.4 43.5 65 18 注1：其他参数：喷雾电压：3500 V，鞘气压：35 psi，辅助气压：10 arb，碰撞气：1.5 mTorr离子传输管温度：350，吹扫气压：0 psi。注2：表A.1中带*的离子为定量离子；对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。_