TAHFIA 004-2018 食品中总皂苷含量的测定 分光光度法.doc

T/AHFIA 安徽省食品行业协会团体标准 T/AHFIA 004—2018       食品中总皂苷含量的测定 分光光度法 Determination of total saponins in Food Spectrophotometric method 2019 - 01 - 15实施   安徽省食品行业协会      发布 2018 - 12 - 26发布 T/AHFIA 004—2018 前  言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省食品行业协会提出并归口。 本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、安徽润安信科检测科技有限公司。 本标准主要起草人：李安军、王录、刘国英、陆玮、芮君君、刘智慧、何宏魁、杨恩贺。 I T/AHFIA 004—2018 食品中总皂苷含量的测定 分光光度法 A 1 范围 本标准规定了食品中总皂苷含量的测定 分光光度法。 本标准适用于食品中总皂苷含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 本标准采用香草醛高氯酸分光光度法测定总皂苷含量。皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，再与香草醛加成显色，形成特征的紫红色化合物。在一定浓度范围内，吸光度与皂苷类化合物的含量成正比，符合朗伯-比尔定律。 4 试剂与材料 4.1 试剂 4.1.1 无水乙醇：分析纯。 4.1.2 香草醛：分析纯。 4.1.3 冰醋酸：分析纯。 4.1.4 高氯酸：分析纯。 4.1.5 XAD-2大孔树脂：纯度≥98%。 4.1.6 无水氧化铝：分析纯。 4.1.7 水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 试剂配制 4.2.1 香草醛冰醋酸溶液（5%）：精确称取5 g（精确至0.0001 g）香草醛，用冰醋酸溶解定容至100 mL。 4.2.2 乙醇溶液（70%）：量取700 mL无水乙醇，用水溶解定容至1000 mL。 4.3 标准品 人参皂苷（Re，CAS号：52286-59-6），纯度≥ 99.0%。 4.4 人参皂苷Re标准溶液配制 准确称取20 mg（精确至0.1 mg）Re标准品，用70%乙醇溶解定容至50 mL，此溶液中人参皂苷含量为400 mg/L。于4℃冰箱中避光保存。 5 仪器与设备 5.1 紫外可见分光光度计：配1 cm比色皿。 5.2 分析天平：感量0.1 mg。 5.3 电热恒温水浴锅：0℃~100℃。 5.4 玻璃层析柱：10 mm*40 cm（内径*长度）。 6 分析步骤 6.1 试样制备 6.1.1 固体试样 称取粉碎均匀的固体试样5 g（精确至0.0001 g）于100 mL烧杯中，加入30 mL70%乙醇溶液，超声30min，用70%乙醇溶液定容至50 mL容量瓶。离心至澄清，过滤备用。 6.1.2 液体试样 精确吸取5.0 mL液体试样于50 mL容量瓶中，用70%乙醇溶液定容，摇匀，备用。当稀释后的试样基质较复杂时，需过滤至澄清液备用。 6.2 样品提取 6.2.1 层析柱的预处理 取适量树脂于烧杯中，使用无水乙醇浸泡至覆盖树脂2.5 cm~5 cm，缓慢搅拌树脂1min以充分混合，静置2 h。倒出乙醇，用蒸馏水冲洗，直至无醇味。然后再用等量的无水乙醇洗涤，充分混合静置20min，再用蒸馏水洗至无醇味。对活化后的树脂进行分装，每份树脂质量为5 g，备用。 6.2.2 样品纯化 精确吸取2.0 mL制备的试样加入5 g（精确至0.0001 g）活化后的树脂中，摇匀，静置30min。将加样后的树脂移入层析柱中，上加2 g（精确至0.0001 g）无水氧化铝，用30 mL水洗柱，弃去洗脱液，再用30 mL70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，于60℃水浴挥干。 6.3 测定 6.3.1 仪器条件 6.3.1.1 测定波长：545 nm。 6.3.1.2 比色皿：1 cm。 6.3.2 标准曲线的制作 准确吸取人参皂苷标准溶液（4.4）0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL分别置于蒸发皿中，于60℃水浴挥干，加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），转动蒸发皿，使残渣溶解，再加入1.6 mL高氯酸（4.1.4），混匀后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加热20min，取出，冰浴冷却2min，准确加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），摇匀后，以1 cm比色皿于545 nm波长处测定其吸光度。以皂苷质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 6.3.3 试样溶液的测定 在6.2.2样品纯化后的蒸发皿中加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），转动蒸发皿，使残渣溶解，再加入1.6 mL高氯酸（4.1.4），混匀后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加热20min，取出，冰浴冷却2min，准确加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），摇匀后，在30min内以1 cm比色皿于545 nm波长处测定其吸光度。 7 分析结果表述 试样中总皂苷的含量用质量分数X表示，单位为百分率（%），按式（1）计算： ……（1） 式中： m1 ——由标准曲线计算得出的待测液中总皂苷的质量，单位为毫克（mg）； V1——制备试样的体积，单位为毫升（mL）； m2 ——样品的质量，单位为克（g）； V2 ——纯化试样的体积，单位为毫升（mL）。 所得结果应保留至小数点后一位。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 B _________________________________ _______________________________ 3