KJ 201912 白酒中甲醇的快速检测.doc

附件12 白酒中甲醇的快速检测 （KJ201912） 1 范围 本方法规定了白酒中甲醇的快速检测方法。 本方法第一法适用于白酒（酒精度18% vol～68% vol）中甲醇的快速检测，第二法适用于白酒（酒精度34% vol～68% vol）中甲醇的快速检测。 第一法 变色酸法 2 原理 样品中的甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化为甲醛，用偏重亚硫酸钠除去过量的高锰酸钾。甲醛在硫酸条件下与变色酸反应生成蓝紫色化合物。通过与甲醇对照液比较，对样品中甲醇含量进行判定。 3 试剂和材料 方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB /T 6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 高锰酸钾（KMnO4）。 3.1.2 磷酸（H3PO4）。 3.1.3 偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）。 3.1.4 硫酸（H2SO4）。 3.1.5 变色酸钠（C10H6Na2O8S2）。 3.1.6 乙醇（C2H6O）。 3.1.7 5%乙醇（体积分数）：吸取乙醇5 mL，置于100 mL容量瓶，加水稀释至刻度。 3.1.8 高锰酸钾-磷酸溶液（30 g/L）：称取3.0 g高锰酸钾，溶于100 mL磷酸-水（15+85）溶液。 3.1.9 偏重亚硫酸钠溶液（100 g/L）：称取10.0 g偏重亚硫酸钠，溶于100 mL水。 3.1.10 变色酸显色剂：称取0.1 g变色酸钠溶于25 mL水中，缓慢加入75 mL 硫酸，并用玻璃棒不断搅拌，放冷至室温。 3.2 参考物质 甲醇参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。 表1 甲醇中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 甲醇 Methanol 67-56-1 CH3OH 32.04 3.3 标准溶液的配制 甲醇标准溶液（1 g/L）：称取0.1 g（精确至0.001 g）甲醇参考物质于100 mL容量瓶中，用5%乙醇稀释至刻度，混匀。 3.4 材料 甲醇快速检测试剂盒：适用基质为白酒（酒精度18～68% vol），需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 4 仪器和设备 4.1 电子天平：感量0.001 g。 4.2 量筒：50 mL，100 mL。 4.3 移液器：1 mL，5 mL。 4.4 酒精计：分度值为1% vol。 4.5 涡旋振荡器。 4.6 水浴锅。 4.7 环境温度：10℃～30℃。 5 分析步骤 5.1 待测液制备 5.1.1 酒精度的测定：取洁净、干燥的100 mL量筒，注入100 mL样品，静置数分钟，待酒中气泡消失后，放入洁净、擦干的酒精计，轻轻按一下，不应接触量筒，平衡约5 min，水平观测，读取与弯月面相切处的刻度示值。 5.1.2 样品稀释：根据酒精计示值吸取对应体积的样品，置于10 mL比色管中，补水至10 mL（参见表2），混匀。 表2 不同酒精度样品吸取体积表 酒精计示值 (% vol) 样品吸取体积 (mL) 补水体积 (mL) 18～22 2.5 7.5 23～27 2.0 8.0 28～32 1.7 8.3 33～36 1.5 8.5 37～41 1.3 8.7 42～45 1.2 8.8 46～53 1.0 9.0 54～60 0.9 9.1 61～68 0.8 9.2 5.1.3 显色：吸取稀释后的样品溶液（5.1.2）1.0 mL，置于10 mL比色管中，加入高锰酸钾-磷酸溶液0.5 mL，混匀，密塞，静置15 min。加入0.3 mL偏重亚硫酸钠溶液，混匀，使试液完全褪色。沿比色管壁缓慢加入5 mL变色酸显色剂，密塞，混匀，置于70℃水浴中，显色20 min后取出，迅速冷却至室温，即得待测液。每批测试应吸取1 mL 5%乙醇同5.1.3“加入高锰酸钾-磷酸溶液0.5 mL”起操作，随行全试剂空白试验。 5.2 甲醇对照液制备 根据待测样品的分类（粮谷类或其他类），吸取对应体积（参见表3）的甲醇标准溶液（3.3），置于10 mL比色管中，补5%乙醇至10 mL，混匀。吸取上述溶液1.0 mL，置于10 mL比色管中，同5.1.3“加入高锰酸钾-磷酸溶液0.5 mL”起操作，制得甲醇对照液。 表3 标准溶液吸取体积表 待测样品分类 标准溶液吸取体积(mL) 粮谷类 0.3 其他类 1.0 5.3 判读 将待测液（5.1）与甲醇对照液（5.2）进行目视比色，10 min内判读结果。应进行平行试验，且两次判读结果应一致。 6 结果判定要求 观察待测液颜色，与甲醇对照液比较判读样品中甲醇的含量。颜色深于对照液者为阳性，浅于对照液者为阴性。为尽量避免出现假阴性结果，判读时遵循就高不就低的原则。 7 性能指标 7.1 检测限 0.4 g/L （以100%酒精度计）。 7.2 判定限 粮谷类：0.6 g/L （以100%酒精度计）；其他类：2.0 g/L （以100%酒精度计）。 7.3 灵敏度 ≥95%。 7.4 特异性 ≥85%。 7.5 假阴性率 ≤5%。 7.6 假阳性率 ≤15%。 注：性能指标计算方法见附录A。 8 其他 本方法所述试剂及操作步骤等是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。 本方法的参比方法为GB 5009.266《食品安全国家标准 食品中甲醇的测定》。 为减少乙醇量对显色的干扰，本方法中待测液和对照液的乙醇量为5%。 本方法中采用的高锰酸钾-磷酸溶液（3.1.8）、变色酸显色剂（3.1.10）久置会变色失效，建议方法使用者考察稳定性或临用新配。 采用本方法，酒精度为非整数的样品，为避免出现假阴性结果，建议参照表2吸取酒精度整数部分对应体积。 当目视不能判定颜色深浅时，可采用分光光度计测定待测液与甲醇对照液570 nm处的吸光度进行比较判定。 第二法 乙酰丙酮法 9 原理 样品中的甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化为甲醛，用草酸除去过量的高锰酸钾。甲醛在过量铵盐条件下与乙酰丙酮反应生成黄色化合物。通过与甲醇对照液比较，对样品中甲醇含量进行判定。 10 试剂和材料 方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB /T 6682规定的三级水。 10.1 试剂 10.1.1 高锰酸钾-磷酸溶液：同3.1.8。 10.1.2 草酸：无水草酸（H2C2O4）或含2分子结晶水的草酸（H2C2O4·2H2O）。 10.1.3 乙酰丙酮（C5H8O2）。 10.1.4 乙酸铵（C2H7O2N）。 10.1.5 冰乙酸（C2H4O2）。 10.1.6 50%乙醇（体积分数）：量取乙醇（3.1.6）50 mL，置于100 mL容量瓶，加水稀释至刻度。 10.1.7 草酸溶液（50 g/L）：称取5.0 g无水草酸或7.0 g含2分子结晶水的草酸，溶于100 mL水。 10.1.8 乙酰丙酮溶液：称取乙酸铵25.0 g，加水70 mL使溶解，加冰乙酸3 mL及乙酰丙酮0.25 mL，加水稀释至100 mL，用力摇匀。临用现配。 10.2 参考物质 同3.2。 10.3 标准溶液配制 甲醇标准溶液（1 g/L）：称取0.1 g（精确至0.001g）甲醇标准物质于100 mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，混匀。 10.4 材料 甲醇快速检测试剂盒：适用基质为白酒（酒精度34% vol～68% vol），需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 11 仪器和设备 同4。 12 分析步骤 12.1 待测液制备 12.1.1 酒精度的测定：同5.1.1。 12.1.2 显色：根据酒精计示值吸取对应体积的样品，置于10 mL比色管中，补乙醇和水至2.0 mL（参见表4），混匀。加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL，混匀，密塞，静置30 min。加入草酸溶液1.0 mL，混匀，密塞，置沸水浴中使其褪色，取出冷却至室温。加入乙酰丙酮溶液2.0 mL，混匀，密塞，置沸水浴中，显色30 min后取出，迅速冷却至室温，即得待测液。每批测试应吸取2 mL 50%乙醇同12.1.2“加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL”起操作，随行全试剂空白试验。 表4 不同酒精度样品吸取体积表 酒精计示值 (% vol) 样品吸取体积(mL) 补乙醇体积 (mL) 补水体积 (mL) 34～35 1.5 0.5 0.0 36～40 1.3 0.5 0.2 41～44 1.2 0.5 0.3 45～52 1.0 0.5 0.5 53～58 0.9 0.5 0.6 59～65 0.8 0.5 0.7 66～68 0.7 0.5 0.8 12.2 甲醇对照液制备 根据待测样品的分类（粮谷类或其他类），吸取对应体积（参见表5）的甲醇标准溶液（10.3），补50%乙醇至2.0 mL，混匀后同12.1.2“加入高锰酸钾-磷酸溶液1.0 mL”起操作，制得甲醇对照液。 表5 标准溶液吸取体积表 待测样品分类 标准溶液吸取体积(mL) 粮谷类 0.6 其他类 2.0 12.3 判读 将待测液（12.1）与甲醇对照液（12.2）进行目视比色，10 min内判读结果。应进行平行试验，且两次判读结果应一致。 13 结果判定要求 同6。 14 性能指标 14.1 检测限 0.6 g/L （以100%酒精度计） 14.2 判定限 粮谷类：0.6 g/L （以100%酒精度计）；其他类：2.0 g/L （以100%酒精度计） 14.3 灵敏度 ≥95%。 14.4 特异性 ≥85%。 14.5 假阴性率 ≤5%。 14.6 假阳性率 ≤15%。 注：性能指标计算方法见附录A。 15 其他 本方法所述试剂及操作步骤等是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。 本方法的参比方法为GB 5009.266《食品安全国家标准 食品中甲醇的测定》。 为减少乙醇量对显色的干扰，本方法中待测液和对照液的乙醇量为50%。 采用本方法，酒精度为非整数的样品，为避免出现假阴性结果，建议参照表4吸取酒精度整数部分对应体积。 当目视不能判定颜色深浅时，可采用分光光度计测定待测液与甲醇对照液415 nm处的吸光度进行比较判定。 附录A 性能指标计算表 样品情况a 检测结果b 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N21 N.2=N12+N22 N=N1.+N2.或N.1+N.2 显著性差异（c2） c2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21）， 自由度（df）=1 灵敏度（p+，%） p+=N11/N1. 特异性（p-，%） p-=N22/N2. 假阴性率（pf-，%） pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，%） pf+=N21/N2.=100-特异性 相对准确度，%c （N11+N22）/(N1.+N2.) 注： a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果； b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。 N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N