DBS45 054-2018 食品安全地方标准 食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定 高效液相色谱-串联质谱法.doc

DBS45 广西壮族自治区地方标准 DBS45/054—2018 食品安全地方标准 食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定 高效液相色谱-串联质谱法 2018 - 12 - 30发布 2019 - 06 - 30实施 广西壮族自治区卫生健康委员会发布 DBS45/054—2018 前言 本标准按GB/T 1.1—2009的格式编写。 本标准由广西壮族自治区卫生健康委员会提出。 本标准起草单位：广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：秦富、汪文龙、司露露、吴玉杰、吕春秋、罗兆飞、赵永锋、黄大新、郑玲、蔡翔宇。 8 食品安全地方标准 食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定 高效液相色谱-串联质谱法 1　 范围 本标准规定了食品中氟虫腈及其代谢物氟虫腈亚砜、氟虫腈砜和氟甲腈残留量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于苹果、芒果、尖椒、大米、绿茶、猪肝、牛肉、虾、鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的检测,其它同类食品可参照执行。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　 原理 试样中的氟虫腈及其代谢物残留量用1%醋酸乙腈振荡提取，用吸附剂Na2SO4、PSA、C18和GCB进行净化，高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。 4　 试剂及其配制 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 4.1　 试剂和材料 4.1.1　 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 4.1.2　 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.1.3　 醋酸（CH3COOH）：色谱纯。 4.1.4　 无水硫酸钠（Na2SO4）：用前于650℃灼烧4 h，处于干燥器中冷却使用。 4.1.5　 无水醋酸钠（CH3COONa）。 4.1.6　 无水硫酸镁（MgSO4）。 4.1.7　 N-丙基乙二胺（PSA）：40—60 μm。 4.1.8　 HC-C18型吸附剂（C18）：40—63 μm。 4.1.9　 石墨化炭黑（GCB）：120—400 MESH。 4.1.10　 净化管：分别称取1.00 g Na2SO4、0.30 g PSA、0.20 g C18和0.10 g GCB至15 mL离心管中。 4.2　 溶液配制 4.2.1　 1%醋酸乙腈溶液：取10 mL醋酸，加入乙腈并定容至1000 mL。 4.2.2　 乙腈水溶液（1+1, v/v）：取500 mL乙腈，加入500 mL水，摇匀备用。 4.3　 标准品 4.3.1　 氟虫腈：Fipronil，C12H4Cl2F6N4OS，CAS号120068-37-3，纯度大于等于98%。 4.3.2　 氟虫腈砜：Fipronil-sulfone，C12H4Cl2F6N4O2S，CAS号120068-36-2，纯度大于等于98%。 4.3.3　 氟虫腈亚砜：Fipronil-sulfide，C12H4Cl2F6N4S，CAS号120067-83-6，纯度大于等于98%。 4.3.4　 氟甲腈：Fipronil-desulfinyl，C12H4Cl2F6N4，CAS号205650-65-3，纯度大于等于99%。 4.4　 标准溶液配制 4.4.1　 标准储备液：分别称取适量（精确至0.0001 g）各标准物质，用丙酮溶解配制浓度为100 μg/mL的标准储备液，避光-18℃保存，保存期12个月。 4.4.2　 混合标准中间液：分别准确移取适量的氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈标准储备液，用甲醇稀释配制成浓度为1 μg/mL，避光-18℃保存，保存期1个月。 4.4.3　 混合标准工作液：准确移取适量的混合标准中间液，用乙腈水（4.2.2）配制成适用浓度（至少5个浓度系列，用于做标准工作曲线），现配现用。 5　 仪器设备 5.1　 高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI源）。 5.2　 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。 5.3　 刀式研磨仪。 5.4　 粉碎机。 5.5　 离心机：4000 r/min。 5.6　 涡旋振荡器。 5.7　 垂直或水平往复型振荡器。 5.8　 移液器：100 μL，1000 μL，5000 μL。 5.9　 容量瓶：100 mL。 5.10　 微孔滤膜：0.22 μm，有机相。 5.11　 聚丙烯离心管：15 mL，50 mL。 6　 试样制备与保存 6.1　 取样要求 样品的取样部位按GB 2763附录A执行，在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2　 试样制备 6.2.1　 苹果、芒果、尖椒 取样品500 g，切碎，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。 6.2.2　 大米、茶叶 取样品500 g（茶叶取200 g），用粉碎机充分磨碎，混匀，装入洁净容器。 6.2.3　 猪肝、牛肉、虾 取样品500 g，切成小块，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。 6.2.4　 鸡蛋 取样品500 g，去壳，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。 6.3　 试样保存 鸡蛋等试样4℃避光保存；苹果、芒果、尖椒、猪肝、牛肉、虾等试样于≤-18℃避光保存；大米、茶叶等试样于室温干燥处避光保存。 7　 分析步骤 7.1　 称样及预处理 7.1.1　 苹果、芒果、尖椒 称取10 g（精确至0.01 g）均匀试样于50 mL聚丙烯离心管中。 7.1.2　 大米、猪肝、牛肉、虾、鸡蛋 称取5 g（精确至0.01 g）均匀试样于50 mL聚丙烯离心管中， 加入5 mL水，涡旋振荡1 min，室温浸泡20 min，期间振荡2~3次。肉类和内脏处理后应呈乳糜状。 7.1.3　 茶叶 称取2 g（精确至0.01 g）均匀试样于50 mL聚丙烯离心管中，加8 mL水，涡旋振荡1 min，室温浸泡20 min。 7.2　 提取及净化 向经过预处理的试样中加入10 mL 1%醋酸乙腈（4.2.1），盖紧，振荡10 min；每管加入4 g无水硫酸镁和1 g无水醋酸钠，立即盖紧并涡旋振荡混合，再于振荡器上振荡20 min，然后以4000 rpm离心5 min；取2.5 mL上层清液至净化管(4.1.10)中，涡旋振荡1~2 min，以4000 rpm离心5 min；取1 mL上层清液，加入1 mL水，涡旋混合30 s，4000 rpm离心5 min，过0.22 μm有机相滤膜后装瓶。 7.3　 测定 7.3.1　 液相色谱-串联质谱参考条件 7.3.1.1 液相色谱条件 7.3.1.1.1　 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18, 1.7 μm, 2.1 mm×50 mm，或性能相当者。 7.3.1.1.2　 柱温：35 ℃。 7.3.1.1.3　 流动相：A为水；B为乙腈，梯度洗脱程序见表1。 7.3.1.1.4　 进样量：5 μL。 表1　 梯度洗脱程序 时间（min） 流速（mL/min） A(%) B(%) 0 0.3 50 50 0.5 0.3 50 50 3.0 0.3 10 90 3.9 0.3 10 90 4.0 0.3 50 50 5.0 0.3 50 50 7.3.1.2　 质谱条件 7.3.1.2.1　 ESI离子源，负离子模式。 7.3.1.2.2　 多反应监测（MRM）扫描。 7.3.1.2.3　 毛细管电压（Capillary）：-3.4 kV。 7.3.1.2.4　 源温度（Source Temperature）：150 ℃。 7.3.1.2.5　 脱溶剂气温度（Desolvation Temperature）：500 ℃。 7.3.1.2.6　 脱溶剂气流（Desolvation Gas Flow）：800 L/Hr。 7.3.1.2.7　 锥孔气流（Cone Gas Flow）：50 L/Hr。 7.3.1.2.8　 四种化合物的监测离子对参数见表2。 表2　 氟虫腈及其代谢物的监测离子对参数 分析物 母离子（m/z） 子离子（m/z） 锥孔电压(V) 碰撞能(eV) 保留时间(min) 氟虫腈 435.0 330.0* 30 12 2.64 氟虫腈 435.0 250.0 30 26 2.64 氟虫腈砜 451.1 282.1* 30 25 3.05 氟虫腈砜 451.1 415.1 30 14 3.05 氟虫腈亚砜 419.1 262.1* 30 27 3.06 氟虫腈亚砜 419.1 383.1 30 10 3.06 氟甲腈 387.2 351.1* 30 10 2.83 氟甲腈 387.2 282.1 30 30 2.83 氟甲腈 387.2 331.0 30 26 2.83 注： *，表示定量子离子；387.2/331.0为氟甲腈备用离子对。 7.3.2　 色谱测定与确证 根据试样中氟虫腈及其代谢物的含量情况，选择浓度相近的标准工作液进行色谱分析，以峰面积进行外标曲线定量。在上述色谱条件下，氟虫腈及其代谢物的参考保留时间见表2。标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图参见附录A。 按照上述条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准工作液的时间偏差在±2.5%之内；定性离子对的相对丰度与相当浓度的标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。 表3　 定性时相对离子丰度最大容许误差 相对丰度（基峰） >50 % >20 %至50 % >10 %至20 % ≤10 % 允许的相对偏差 ±20 % ±25 % ±30 % ±50 % 7.4　 空白实验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 8　 结果计算和表述 8.1　 结果计算 按色谱数据处理软件中的外标曲线定量或按式（1）计算试样中氟虫腈及其代谢物的残留量。 ···············（1） 式中： X ——试样中目标化合物的残留量，单位为μg/kg； A ——样液中目标化合物的峰面积； V ——加入提取液体积，单位为mL； f ——稀释倍数，f = 2； As ——标准工作液中目标化合物的峰面积； c——标准工作液中目标化合物的浓度，单位为ng/mL； m ——称样量，单位为g。 注： 计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 8.2　 结果表述 依据GB 2763对氟虫腈残留物的定义，应计算氟虫腈总量作为样品中氟虫腈的残留量。氟虫腈总量=氟虫腈含量+氟虫腈砜含量+氟虫腈亚砜含量+氟甲腈含量 9　 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T27404-2008规定确定的，以相对标准偏差（RSD）表示，参见附录B。 10　 测定低限和回收率 10.1　 定量限 本方法氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈在蔬菜、水果中的定量限均为0.50 μg/kg；在粮谷类、肉类、内脏、鲜蛋中的定量限均为1.0 μg/kg；在茶叶中的定量限均为2.5 μg/kg。 10.2　 回收率